LACTOPHENOL BLUE: CHARAKTERISTIKA, SLOŽENÍ, PŘÍPRAVA, POUŽITÍ - CHEMIE - 2025

Laktofenolu modré nebo modré bavlny se připraví jednotlivé vlastnosti barviva. V klinických laboratořích se používá hlavně k barvení plísňových struktur, jako jsou hýfy, zárodečné zkumavky a spory.

Pomáhá při presumptivní nebo předběžné diagnóze některých hub, vždy je však vhodné posílit diagnózu konkrétnějšími testy, jako jsou biochemické nebo sérologické testy.

Grafické znázornění laktofenolové modře, nátěr zbarvený laktofenolovou modří, preparace na mikroskopu. Zdroj: public Domain Pictures.net/https://www.youtube.com/watch?v=P-kiFFZ7NvU /https://www.youtube.com/watch?v=wSZ77T5L6e8

Laktofenolová modrá je tvořena kyselinou mléčnou, anilinovou modrou, glycerinem, fenolem a deionizovanou vodou. Může být připraven v laboratoři nebo může být zakoupen připraven k použití. Jakmile je připraven, je připraven k použití, v žádném případě by neměl být ředěn, protože tato akce poskytne hrozné výsledky.

Koncentrace jejích složek je ideální pro barvení fungálních struktur, protože fenol vylučuje doprovodnou bakteriální mikrobiotiku, zatímco kyselina mléčná vytváří ochranný film kolem fungální struktury. Konečně má anilinová modrá afinitu k ulpívání na strukturách houby.

Základ

U laktofenolické modři se provádí jednoduché zabarvení fungálních struktur určité mykologické kultury. Říká se tomu jednoduché, protože používá pouze jedno barvivo.

Laktofenolová modř, kromě barvení, působí také jako čirý vzorek, díky společnému působení kyseliny mléčné a fenolu se fenol navíc chová jako mordant a současně zabraňuje lýze mikroorganismu inhibicí hydrolytických enzymů, které může být přítomen.

Zatímco kyselina mléčná zachovává morfologii struktur houby.

Na druhé straně má anilinová modrá vlastnost přilnavosti nebo vazby na struktury obsahující chitin. Struktury jsou obarveny světle modrou barvou.

Je třeba poznamenat, že buněčná stěna houbových mikroorganismů, zejména plísní, obsahuje chitin, což je důvod, proč je toto barvivo ideální pro barvení těchto mikroorganismů.

vlastnosti

Roztok laktofenolové modři je silně kyselé, mírně zakalené vodné barvivo se světle modrou barvou. Pokud je skladován při teplotě mezi 15 ° C a 25 ° C, zůstává stabilní. Láhev musí být řádně uzavřena. Dráždí a leptá pokožku a sliznice.

Složení

Vzorec pro přípravu jednoho litru laktofenolové modři je následující:

- 250 g / l kyseliny mléčné

-1,0 g / l anilinové modři nebo methylové modři

-500 g / l glycerinu

-250 g / l fenolu

- 250 ml deionizované nebo destilované vody.

Fenol se rozpustí v dříve zahřáté vodě. Přidá se kyselina mléčná a glycerin a dobře se promíchají. Nakonec se anilinová modrá rozpustí. Znovu se mísí a je připraven k použití.

Dávky pro přípravu 80 ml roztoku laktofenolové modři jsou:

-20 g fenolických krystalů

-20 ml kyseliny mléčné

-40 ml glycerinu nebo glycerolu

-20 ml destilované vody.

Použití

Používá se k barvení plísňových struktur a díky morfologickým charakteristikám pozorovaným na mikroskopické úrovni umožňuje předvídat diagnózu houby.

Proces

Barvení plísňových struktur kultur

- Vezměte čistou kulturu houby, jejíž struktury je třeba sledovat.

- Pracujte nejlépe v laminární proudové kapotě nebo pod zapalovačem pomocí masky a rukavic, protože je nutné dodržovat normy biologické bezpečnosti, protože většina forem se snadno šíří do životního prostředí, a proto představuje nebezpečí pro provozovatele.

- Na sklíčko se umístí kapka laktofenolové modře.

- Vystřihněte malý čtverec kvalitní lepicí pásky a velmi pečlivě ho držte na konci studené sterilizované platinové rukojeti.

- Platinová rukojeť se přiblíží k nejpovrchnější části houbové kolonie a kultura se velmi pečlivě dotkne, přesně tam, kde se nachází lepicí páska.

- Poté se vezme na sklíčko a umístí se přímo na kapku laktofenolové modři, přičemž je třeba dbát na to, aby byla páska dokonale prodloužena a promazána barvivem. Rukojeť platiny je velmi jemně odstraněna.

- Další kapka laktofenolové modři se umístí na pásku a krycí sklíčko nahoře. Nepoužívejte příliš velký tlak, aby nedošlo ke zničení struktur houby, protože jsou extrémně křehké. Barvivo by mělo působit přibližně 3 až 4 minuty.

- Po uplynutí této doby je přípravek připraven ke sledování pod mikroskopem při zvětšení 10x nebo 40x. Pokud je vyžadováno 100X pozorování, měl by být použit ponorný olej.

- Struktury houby jsou obecně zbarveny modře, s výjimkou dematiaceózních hub, které si zachovají svou charakteristickou hnědou barvu tohoto typu houby.

Přímé barvení biologických vzorků

Pokud je třeba studovat přímý biologický vzorek, jako je například sputum, hnis, exsudáty, sekrece, musí mít předchozí postup dekontaminace vzorku. K tomu se používá roztok NaOH.

V případě vzorků vlasů je lze barvit přímo.

Několik postižených vlasů (celkem 10) se odebere z předpokládaných lézí tinea capitis (alopecické oblasti) a umístí se na sklíčko (3 až 4 vlasy na sklíčko). Několik kapek laktofenolické modři se umístí na vrchol a okamžitě se zakryjí krycím sklíčkem.

Sklíčko uchopte kleštěmi a mírně zahřejte nad hořákem. Za tímto účelem proveďte 3 až 4 rychlé průchody plamenem. Pozorujte mikroskop při 40x a hledejte spory vně nebo uvnitř vlasů (ectothrix nebo endothrix). V případě potřeby přidejte imerzní olej a sledujte při 100x.

Barvení zárodečných trubic při identifikaci

Po inkubaci předpokládané kultury Candida albicans v lidském séru po dobu 2 až 4 hodin při 37 ° C se odebere část roztoku a obarví se laktofenolickou modří. Přípravek je pozorován pod mikroskopem při 40x. Je přítomna zárodečná zkumavka a blastospory zbarvují jasně modrou barvu.

Bezpečnostní list laktofenolu

Národní asociace požární ochrany (NFPA) zřizuje bezpečnostní list pro chemické látky z hlediska rizika, které představuje podle různých hledisek, které jsou symbolizovány barevným kosočtvercem a číslem v rozmezí 0- Čtyři.

Zdravotní rizika jsou označena modře, hořlavost v červené barvě, nestabilita nebo reaktivita ve žluté barvě a všechna zvláštní nebezpečí v bílé barvě.

Zdraví

Zdravotní riziko, které představuje laktofenolová modrá podle NFPA, je úroveň 3. To znamená, že látka je při požití nebo v přímém kontaktu s kůží nebo sliznicí extrémně nebezpečná.

Je to vysoce žíravá a dráždivá látka.

Při styku s kůží a sliznicemi způsobuje těžké popáleniny.

Při požití může způsobit bolesti hlavy, zmatek, letargii, bezvědomí, zástavu dýchání a dokonce smrt.

Zápalnost

Podle NFPA je Lactophenol Blue hodnocena jako stupeň 1 pro hořlavost. To znamená, že hoří pouze tehdy, je-li zahřátý na 94 ° C.

Nestabilita

Uvedeno podle NFPA na úrovni 0 (nula) z hlediska reaktivity. To znamená, že nehrozí reaktivita, tj. Je to chemicky stabilní látka.

Zvláštní nebezpečí

Nepředstavuje žádná další zvláštní nebezpečí.

Reference

1. SAR Laboratoř. Lactophenol Blue. 2010. K dispozici na adrese: labsar.com.
2. Aplikovaná laboratoř klinické chemie. Lactophenol blue. 2015.K dispozici na: cromakit.es
3. Merck Laboratories. Mikroskopie laktofenolové modři v roztoku. 2017.K dispozici na: Uživatelé / Vybavení / Stahování
4. Nouzová karta. Lactophenol blue roztok pro plísňové barvení. Universidad Pontificia Javeriana, Bogota Kolumbie. 2014. K dispozici na adrese: javeriana.edu.co
5. González M, Diamont D, Gutiérrez B. Technika pro barvení struktur plísní rostlinnými barvivy jako neznečišťující alternativy. Bioagro, 2011; 23 (1): 65-68. K dispozici na adrese: Redalyc.
6. Laboratorní multimédia. Lactophenol Cotton Blue. 2017. K dispozici od: himedialabs.com
7. Wanger A, Chavez V, Huang R, Wahed A, herec J, Dasgupta A. Biochemické testy a barvicí techniky pro mikrobiální identifikaci. Science Direct, 2017; 61-73. K dispozici od: Elsevier