NEUBAUEROVA KOMORA: HISTORIE, CHARAKTERISTIKA, POUŽITÍ - BIOLOGIE - 2025

Neubauer komora, hematometer nebo hemocytometru, je laboratorní přístroj skládající se ze speciálního tlusté skleněné desky. Tato kamera se používá k počítání některých typů buněk, jako jsou červené krvinky, bílé krvinky a krevní destičky, i když lze použít k počítání spór, spermií, parazitů atd.

Představuje některé velmi zvláštní vlastnosti, protože se skládá ze 3 zón, centrální pro počítání a dvou podpůrných zón. Každá komora má dvě počítací zóny nebo nitkový kříž, jeden nahoře a druhý dole.

Neubauerova komora. Zdroj: SantiBadia. Upravený obrázek.

Mají několik divizí ve formě mřížky. Počítací oblasti jsou střední čtverce nalezené ve 4 rozích obou mřížek plus střední čtverec.

Sestavení kamery musí být provedeno s velkou péčí, protože jakýkoli detail ovlivňuje počet buněk. Existuje mnoho chyb, které lze udělat, ale pokud k nim dojde, musí být kamera rozebrána, vyčištěna a znovu sestavena. Mezi hlavní chyby patří následující:

Přetékání komory nebo nedostatečné plnění, ponechání komory suché, pokus o odstranění přebytečné kapaliny gázou, naklopení komory při její přepravě, plnění špinavé nebo mokré komory, mimo jiné promíchání ředění nebo vzorku. Všechny tyto chyby povedou k neskutečné hodnotě.

Dějiny

Komora Neubauer je přesný nástroj a výrobní proces podléhá přísné kontrole kvality. Byl vytvořen pro přesné počítání částic nebo tvarovaných prvků na mm ³, jako jsou buňky v různých kapalinách. Jeho jemná grafika je vyřezána diamantovou tužkou.

Neubauerova charakteristika komory

Celá komora má velikost normálního sklíčka, takže jej lze umístit na stolek mikroskopu.

Komora se skládá ze tří centrálních pravoúhlých povrchů (a, b, c). V zóně „b“ je umístěna zóna R nebo počítací zóna, také nazývaná retikulum. Jeden na každé straně fotoaparátu, oddělený zónou „d“.

Grafické schéma Neubauerovy komory. Zdroj: Praktický průvodce hematologií. School of Bioanalysis of University of Carabobo, Venezuela.

Každá mřížka je leštěná oblast, která obsahuje vyrytou oblast počítání. Skládá se z čtverce o ploše 9 mm ² a je vnitřně rozdělena na 9 čtverců o ploše 1 mm ². Čtyři rohové čtverce jsou rozděleny na 16 menších čtverců (plocha 0,0625 mm ²).

Tyto mřížky jsou tvořeny řadou milimetrových čar, které se protínají mezi sebou, a tvoří dokonale graficky znázorněné mřížky, které jsou vymezeny na specifikovaná měření. Tyto linie byly vyryty diamantovou špičkou.

Vylepšené Neubauerovo retikulum. Zdroj: Praktický průvodce hematologií School of Bioanalysis University of Carabobo, Venezuela.

Čtyři strany odpovídají oblasti počítání. Na těchto stranách nebo rozích se počítá většina buněk (červené krvinky a leukocyty), zatímco krevní destičky se počítají v centrální oblasti.

Centrální zóna má více divizí, sestává z čtverce 1 mm ² rozděleného do 25 čtverců, které mají povrchovou plochu 0,04 mm ². Ty jsou dále rozděleny do 16 sítí o rozloze 0,0025 mm ².

Popis vylepšeného Neubauerova retikula. a) náměstí rohů, b) centrální náměstí, c) střední náměstí centrálního náměstí. Zdroj: Praktický průvodce hematologií School of Bioanalysis University of Carabobo, Venezuela.

Zóny „a“ ​​a „c“ slouží jako podpora pro umístění zvláštního krycího předmětu zvaného hematometrický skluz nebo krycí hematometr.

Výška mezi fólií a počítací plochou je 0,1 mm. Měření povrchové plochy shodných políček, jakož i výška komory a ředění vzorku jsou údaje nezbytné pro provedení konečných výpočtů.

Aplikace

Používá se pro počítání buněk. Je zvláště užitečný v hematologické oblasti, protože umožňuje počítání 3 sérií krvinek; tj. červené krvinky, bílé krvinky a krevní destičky.

Lze jej však použít i v jiných oblastech, například k počítání spermií, spór, bakterií nebo jiných důležitých položek v závislosti na typu vzorku.

Jak používat?

příprava vzorků

Aby se provedl počet buněk, obvykle se začíná od předchozího zředění. Příklad: pro počítání bílých krvinek připravte ředění 1:20 Turkovou kapalinou. Před naložením pipety a namontováním Neubauerovy komory je ředění dobře promícháno.

Jsou chvíle, kdy na zředění 1:20 nestačí počítat. Například u pacientů trpících určitými typy chronických leukémií. V těchto případech je třeba provést vyšší ředění, například 1: 100.

Pokud je naopak počet velmi nízký, jako u těžkých leukopenií, lze pro zahuštění vzorku provést menší ředění. Příklad: můžete provést ředění 1:10.

Provedené změny ovlivňují výpočty.

Montáž Neubauerovy komory

Neubauerova komora je sestavena umístěním hematometrického sklíčka do střední oblasti. Oba musí být velmi čisté a suché. Pro umístění lamely je zachycena hranami a jemně spadla na kameru.

Toto je vyplněno umístěním špičky automatické pipety Thoma nebo pipety v úhlu 35 ° na okraji nakládací zóny. Kapalina je vypouštěna hladce a nakládací plocha je vyplněna kapilárou. To se provádí z obou stran k načtení dvou nitkových křížů.

Mřížky by neměly být přetíženy a neměly by být ani odepřeny kapaliny. Zatížení musí být přesné. Je důležité, aby se plnění provádělo homogenně, to znamená, že by neměly existovat žádné bubliny.

Po sestavení komory se nechá 2 minuty odpočívat, aby se buňky vysrážely ke dnu a jejich vizualizace a počítání byly snazší.

Po odpočinku se k pozorování namontuje na stolek světelného mikroskopu. Nejprve se zaměřuje na 10x objektiv a v případě potřeby pak na 40X.

Pro zlepšení jeho vizualizace je snížen průchod světla z mikroskopu. K tomu je kondenzátor spuštěn a membrána je mírně uzavřená.

Počítací

Pro počet bílých krvinek nebo leukocytů se musí spočítat celý povrch čtyř středních rohových čtverců a centrální čtverec každého retikula.

Počítání začíná ve čtverci v levém horním rohu. Začnete od prvního čtverce první řady, tj. Zleva doprava, dokud nedosáhnete opačného konce.

Tam jdete dolů a díváte se zprava doleva, dokud nedosáhnete druhého konce, a tak se buňky v každé mřížce počítají klikatým způsobem. Počítá se 16 mřížek každého středního čtverce.

Aby nedošlo k dvojímu počítání buněk, existují pravidla o buňkách, která jsou umístěna na hraničních linkách každé mřížky. Buňky na levém a horním řádku se počítají a buňky na pravém a spodním řádku se ignorují.

Musí být k dispozici ruční počítadlo buněk, aby obsluha stiskla tlačítko zařízení tolikrát, kolikrát byly pozorovány buňky. Pomocí počítadla může obsluha počítat, aniž by se musela dívat z mikroskopického pole. Na konci počtu se zobrazí celkový počet buněk.

Výpočty

Pro výpočty můžete postupovat několika způsoby. Může být spočítána jedna mřížka nebo mohou být spočítány oba a obě jsou průměrovány. V těchto dvou situacích musí být počítané buňky vynásobeny faktorem, který by v tomto případě činil 40. A tak ^{se získá} celkový počet na mm3.

Pokud se však dvě mřížky spočítají a průměr se nebere, musí se vynásobit jiným faktorem, v tomto případě 20.

- Multiplikační faktor

Takto se vypočítá multiplikační faktor.

Pro výpočty se berou v úvahu různé údaje, včetně titru ředění, výšky komory a počítané plochy.

Ředění

Použité standardní ředění je pro počet leukocytů 1:20.

Výška komory

Výška mezi komorou a vrstvou krvinek je 0,1 mm.

Počítaná oblast

Pokud se počítá 5 čtverců o ploše 1 mm ², znamená to, že celková počítací plocha je 5 mm ². Tato data musí být vynásobena výškou komory, aby se získal celkový odečtený objem. To znamená, že 5 mm ² x 0,1 mm = 0,5 mm ³.

Vzorce a výpočty

S údaji, které máme, se říká:

Pokud jsou v 0,5 mm ³ - pak se počítá - počet buněk

V 1 mm ³ --- bude - X n ° buněk

X č. Z buněk = (č. Z buněk, počítaných x 1) / 0,5 mm ³

Je však také třeba vzít v úvahu ředění. Vzorec je tedy následující:

(počet buněk počítá x 1) x 20 / 0,5 mm ³

A konečně, shrnout, počet buněk, počítaných může vynásobit 40. To dává hodnotu leukocytů na mm ³.

Pokud se počítají dva optické mřížky, jsou data pro počítaného oblasti se změní, což v tomto případě by bylo 10 čtverců, který je 10 mm ². A celkový počítaný objem 1 mm3. Vzorec by byl:

(počet buněk x 1) x 20/1 mm ³

Proto by v tomto případě činil multiplikační faktor 20.

Chyby

-Pokud je při plnění fotoaparátu překročena nebo překročena kapalina, bude se výška kamery měnit. To má za následek, že počet je vyšší než skutečná věc. Pokud se pokusíte odstranit přebytek gázou nebo bavlnou, je to velká chyba. Tato akce způsobí koncentraci buněk, čímž se zvýší počet.

- Pokud je načten špatně, bude počet nižší než ten skutečný.

-Pokud je kamera namontována a ponechána uschnout, není již možné počítat, protože poskytne špatné výsledky.

- Pokud není ředění vzorku před naplněním komory dobře promícháno, existuje riziko chyby při odečtu, protože buňky nebudou rovnoměrně rozděleny. Proto bude existovat nižší nebo vyšší koncentrace buněk, v závislosti na tom, zda je vzorek odebrán z povrchu kapaliny nebo ze dna zkumavky.

- Přítomnost bublin snižuje množství tekutiny, která musí vstoupit do retikula, což narušuje správnou vizualizaci a distribuci buněk. To vše výrazně ovlivňuje výsledky.

-Při počítání se nedívejte do mikroskopu, dokud není každý velký čtverec dokončen, aby nedošlo ke ztrátě.

- Jedním z důvodů chyby je naklopení kamery po montáži. Z tohoto důvodu musí být stolek mikroskopu pečlivě zvednut.

Doporučení

Pokud z nějakého důvodu zjistíte abnormalitu při plnění komory, doporučuje se tento přípravek rozebrat, vyčistit komoru a znovu ji sestavit od nuly.

Při čištění fotoaparátu buďte velmi opatrní, abyste nepoškodili křížové chloupky. Na druhou stranu mějte na paměti, že hematometrický skluz je křehký a křehký. Nesprávná manipulace ji může poškodit.

Než začnete počítat, ujistěte se, že jsou buňky správně rozloženy. Nerovnoměrná distribuce buněk nastává špatným mícháním nebo ředěním vzorků. Pokud k tomu dojde, je nutné sestavu zopakovat.

Jeden způsob, jak zjistit, zda jsou buňky dobře rozloženy, je porovnáním počtu každého velkého čtverce, počet buněk počítaných pro každý čtverec by se neměl přehánět odlišně od jednoho do druhého.

- Pokud je počet bílých krvinek nad 50 000 mm ^3, je vhodné počet opakovat, čímž se zředí více.

- Pokud změníte ředění, musíte přepočítat multiplikační faktor, protože to ovlivňuje vzorec.

Reference

1. Cardona-Maya W, Berdugo J, Cadavid A. Porovnání koncentrace spermií pomocí Maklerovy komory a Neubauerovy komory. Actas Urol Esp 2008; 32 (4): 443-445. K dispozici v: scielo.
2. Neubauerova komora. (2018, 27. března). Wikipedia, encyklopedie zdarma. Datum konzultace: 04:10, 23. června 2019 od es.wikipedia.org
3. Meneses A, Rojas L, Sifontes S. Použití alternativní metody počítání v Neubauerově komoře pro stanovení koncentrace Trichomonas vaginalis. Cub Med Trop 2001; 53 (3): 180-8. K dispozici na adrese: researchgate.net
4. Gómez-Pérez Roald E. Analýza spermogramu. Venez. Endocrinol. Metab. 2007; 5 (2): 19-20. K dispozici v: ve.scielo
5. Hematologický praktický průvodce School of Bioanalysis of University of Carabobo. Venezuela 1998