EC VÝVAR: ZALOŽENÍ, PŘÍPRAVA A POUŽITÍ - BIOLOGIE - 2025

ES vývar či bujón Escherichia coli je selektivní kapalné kultivační médium. Toto médium je doporučeno standardními metodami pro počítání celkových a fekálních koliformních bakterií, nejpravděpodobnější technikou počtu (MPN) ve vzorcích vody a potravin, kde hlavním činitelem je Escherichia coli.

EC vývar se skládá z tripteinu, laktózy, žlučových solí, fosforečnanu draselného, ​​fosforečnanu draselného, ​​chloridu sodného a vody. Jeho vzorec je strategicky navržen tak, aby podporoval růst celkových a fekálních koliformních bakterií a bránil rozvoji dalších doprovodných mikroorganismů.

Obrazové znázornění přípravy vývaru ES. Zdroj: Pixabay.com

Bakterie Escherichia coli je hlavní fekální koliformní bakterie přítomná jako kontaminant ve vodě a potravinách, což je příčina závažných gastrointestinálních poruch.

Je třeba poznamenat, že existuje mnoho sérotypů Escherchia coli; Mezi nimi lze uvést enterohemoragické (EHEC), enteroinvazivní (EIEC), enteopatogenní (EPEC), enterotoxigenní (ETEC) a enteroagregativní (EAEC).

Toto médium má schopnost umožnit rozvoj všech z nich, aniž by je však bylo možné od sebe odlišit. To vyžaduje další testování.

Mikrobiologická studie o vodě a potravě podle nejpravděpodobnějšího počtu (MPN) k hledání celkových a fekálních koliformních bakterií je protokol, který se skládá z několika fází; presumptivní fáze, potvrzující fáze a fáze dokončení. EC bujón se používá v potvrzovací fázi.

Základ

EC vývar

Médium EC je založeno na poskytování nutričních prvků nezbytných pro optimální vývoj celkových a fekálních koliformních bakterií, kde jsou zahrnuty bakterie Escherichia coli.

Tyto nutriční prvky jsou poskytovány tripteinem, který je vynikajícím zdrojem peptidů a aminokyselin. Kromě toho také obsahuje laktózu, fermentovatelný uhlohydrát, který dodává energii a umožňuje ukázat, zda bakterie produkují plyn.

Na druhé straně médium obsahuje žlučové soli, které poskytují selektivní charakter, protože inhibují růst grampozitivních mikroorganismů, které mohou být přítomny ve vzorku.

Stejně tak fosforečnan draselný a fosforečnan draselný fungují jako systém vyrovnávání pH. Tento systém je nezbytný, protože laktóza obsažená v bujónu má tendenci okyselovat médium, když je fermentováno mikroorganismy, ale je to kompenzováno fosfátovými solemi.

Tyto prvky jsou proto nezbytné, protože nekontrolovaná kyselost může ovlivnit správný vývoj hledaných mikroorganismů.

Chlorid sodný stabilizuje médium osmoticky, zatímco voda je rozpouštědlem přítomných rozpuštěných látek a zajišťuje kapalnou konzistenci média.

Novobiocin modifikovaný EC bujón

Okrend a Rose vytvořili řadu vývarů EC, zvaných novobiocinem modifikovaný vývar EC. Modifikace spočívala ve snížení koncentrace žlučových solí a přidání 20 mg / dl novobiocinu.

Tato modifikace podporuje regeneraci enterohemoragických kmenů Escherichia coli (O157: H7).

Tento bakteriální sérotyp způsobuje závažnou hemoragickou kolitidu, která může vést k hemolytickému uremickému syndromu (HUS); což zase může způsobit akutní selhání ledvin, s vysokou mírou úmrtnosti, která může dosáhnout až 50% u starších osob.

Vzhledem k nemocnosti a úmrtnosti způsobené každoročně touto bakterií v důsledku konzumace kontaminovaných potravin, Ministerstvo zemědělství Spojených států amerických (USDA) důrazně doporučuje použití tohoto média.

Příprava

EC vývar

Naváží se 37,4 g dehydratovaného média a rozpustí se v 1 litru destilované vody. Směs by měla být ponechána stát po dobu 5 minut. Následně se ve zdroji tepla rozpouští častým mícháním.

Jakmile je rozpuštěn, je distribuován do předem upravených zkumavek s Durhamovou zkumavkou uvnitř. Sterilizujte v autoklávu při 121 ° C po dobu 15 minut.

PH média by mělo být 6,9 ± 0,2. Barva dehydratovaného média je béžová a připravené médium je světle jantarové.

Bujóny se až do použití uchovávají v lednici. V době použití musí být vývar při pokojové teplotě.

Na druhé straně lze vývar EC připravit také ve dvojité koncentraci.

Novobiocin modifikovaný EC bujón

Naváží se 36,7 g dehydratovaného média a rozpustí se v 1 litru vody. Zbytek přípravku je stejný, jako je popsáno výše.

Použití

Analýza celkových a fekálních koliform

EC bujón je ideální pro potvrzovací fázi studia koliformních bakterií metodou NMP, a to jak ve vzorcích vody, tak ve farmaceutických výrobcích a potravinách.

Zakalené plynné výpary produkující plyn získané v presumptivní fázi by měly být znovu naočkovány do 2% žlučově jasně zeleného vývaru a EC vývaru.

Pro celkový počet koliformních bakterií se EC bujóny inkubují aerobně po dobu 24 až 48 hodin při 37 ° C a pro fekální koliformní formy se inkubují aerobně po dobu 24 až 48 hodin při 44 ° C.

V obou případech se interpretuje takto: zakalené trubice s výrobou plynu se považují za pozitivní. Pokud nedojde k produkci plynu do 24 hodin, inkubace pokračuje až 48 hodin.

EC pozitivní bujóny jdou do kompletní potvrzovací fáze, která sestává z opětného nasazení na selektivních médiích, jako je agar Mac Conkey, EMB agar nebo Endo agar.

Pokud je použitým bujónem EC modifikovaný novobiocinem, doporučuje se, aby pozitivní zkumavky byly znovu nasazeny na agaru Mac Conkey se sorbitolem.

QA

Každá šarže připraveného média musí být kontrolovaná jakostí. Nejprve musí být vyhodnocena sterilita média. V tomto smyslu se jedna nebo dvě bujóny inkubují bez inokulace v aerobióze po dobu 24 hodin při 37 ° C. Očekávaný výsledek je průhledný vývar, bez zákalu nebo změny barvy.

Za druhé je třeba vyhodnotit růst známých kmenů, proto lze použít následující bakterie: Escherichia coli, ATCC 8739, Escherichia coli ATCC 25922, Salmonella typhimurium ATCC 14028.

Ve všech případech se očekává uspokojivý mikrobiální vývoj, kdy se pozoruje zakalený vývar s produkcí plynu pro E. coli a žádný plyn pro Salmonella.

Další kmeny, které mohou být zahrnuty do kontroly, jsou: Staphylococcus aureus ATCC 25923, Enterococcus faecalis ATCC 29212. Tyto kmeny musí být zcela inhibovány.

doporučení

- Umístění Durhamových zkumavek je nezbytné pro studium koliform.

-Distribuujte médium ve zkumavkách před sterilizací, nikdy poté.

- Nepoužívejte, pokud je médium starší než 3 měsíce.

- Nepoužívejte, pokud je pozorována změna obvyklých vlastností média.

Reference

1. Britannia Laboratories. EC Střední. 2015.K dispozici na: britanialab.com
2. Enterohemoragická E. coli. Centrum pro bezpečnost potravin a veřejné zdraví. 2010. K dispozici na adrese: cfsph.iastate.edu
3. Neogen Corporation. EC medium. K dispozici na adrese: foodsafety.neogen.com
4. Neogen. Novobiocinem modifikované EC médium. K dispozici na adrese: foodsafety.neogen.com
5. Jure M, Condorí S, Leotta G, Chinen I, Miliwebsky E, Allori C, Aulet O, de Castillo M. Detekce, izolace a charakterizace Escherichia coli produkující shiga toxin z čerstvého mletého masa z řezníků v provincii Concepción, provincie od Tucumána. Microbiol Rev Arg; 2010, 42 (4): 284-287. K dispozici na adrese: www.scielo.org.