LAKTOSOVÝ VÝVAR: ZALOŽENÍ, PŘÍPRAVA A POUŽITÍ - BIOLOGIE - 2025

Vývar laktóza je prostředkem non - selektivního kapalného kultivačního média, používané zejména jako s předběžným obohacením v izolaci kmenů Salmonella z mikrobiologickou analýzu na zpracované potraviny, mléčné výrobky nebo vody. Toto doporučuje Mezinárodní komise pro mikrobiologické specifikace potravin (ICMPF).

Médium obsahuje enzymatický rozklad želatiny, masového extraktu a laktózy, látek nezbytných pro růst bakterií. Kromě toho je laktóza fermentovatelným uhlohydrátem, a proto jsou některé koliformní formy schopny ji rozložit při výrobě plynu.

Laktované vývary se zákalem. Zdroj: Fotografie pořízená autorem MSc. Marielsa gil

Z tohoto důvodu je laktózový bujón doporučen American Public Health Association (APHA) pro presumptivní studium celkových a fekálních koliformních bakterií, což je považováno za vynikající alternativu k nahrazení tryptosového laurylsulfátového bujónu standardní metodou nejpravděpodobnějšího čísla (MPN).), které se používají k mikrobiologické analýze vzorků odpadních vod z potravin, mléka a povrchových, podzemních, rekreačních, domácích a průmyslových vzorků.

Základ

Pro mikrobiologickou analýzu některých vzorků je krok před obohacením nezbytný, aby bylo možné získat specifický mikroorganismus, který může být ve velmi malém množství nebo za nepříznivých podmínek, které narušují nebo minimalizují jeho životaschopnost.

To je případ sušených a zpracovaných potravin, případně kontaminovaných Salmonellas sp. V těchto případech, pokud jsou bakterie přítomny, došlo během výrobního procesu k fyzickému a chemickému zneužívání.

Takovým způsobem, že mikroorganismy jsou vystaveny nepříznivým faktorům, jako je dehydratace, expozice inhibičním nebo toxickým produktům a překrývání vznikající přítomností jiných bakterií ve větším množství, mimo jiné.

V tomto smyslu má laktózový bujón opravný účinek na poškozené struktury mikroorganismu, což způsobuje jeho regeneraci a reprodukci, a to způsobem, který může být detekován.

Podobně má laktózový bujón schopnost ředit inhibiční látky, které mohou ovlivnit jeho životaschopnost, což umožňuje jeho vývoj. Kromě toho je nutriční složení laktózového vývaru strategické pro podporu růstu Salmonella sp před jinými mikroorganismy.

Pro konečnou identifikaci musí být subkultivována na jiná definitivní kultivační média.

Na druhé straně složení média také umožňuje detekovat mikroorganismy fermentující laktózu, které produkují plyn.

Příprava

K přípravě litru laktózového bujónu musí být odváženo 13 gramů dehydratovaného média a rozpuštěno v 1000 ml destilované vody.

K rozpuštění média ve vodě může být roztok zahříván trochu, ale ne příliš.

Jakmile je homogenní, roztok se připraví následujícím způsobem: pokud se má bujón použít k hledání koliformních organismů, připraví se stojan na zkumavky, do kterého se vloží zkumavka Durham fermentační trubice vzhůru nohama.

Trubice Durham je velmi důležitým detailem, protože umožní detekci tvorby plynu, což jsou údaje při hledání koliformních bakterií velké hodnoty.

Jakmile jsou zkumavky připraveny, do nich se nadávkuje 10 ml laktózového bujónu, což je množství, které musí být dostatečné k pokrytí celé Durhamovy zkumavky.

Pokud se má laktózový bujón použít jako před obohacující bujón, není nutné umístit Durhamovu fermentační zkumavku. V tomto případě je zapotřebí větší množství média (225 ml), které bude podáváno v 500 ml lahvích, široká ústa a s tepelně odolným šroubovacím uzávěrem.

Následně se zkumavky nebo baňky autoklávují při 121 ° C po dobu 15 minut.

Médium musí zůstat při konečném pH 6,9 ± 0,2 při 25 ° C.

Bujóny se až do použití uchovávají v lednici.

Před použitím se vývar musí zahřát na pokojovou teplotu.

Na druhé straně lze laktózový vývar připravit také ve dvojité koncentraci.

Některé laboratoře přidávají do laktózového bujónu jako indikátor pH bromokresolovou purpurovou barvu, aby ukázaly zkumavky, kde byla laktóza fermentována kvůli změně barvy. V tomto případě má vývar fialovou barvu a v případě kvašení se změní na žlutou.

Aplikace

V mikrobiologických laboratořích se široce používá laktózový bujón, protože jde o relativně levné médium, které nabízí spolehlivé a rychlé výsledky (24–48 hodin).

Může být použit pro analýzu celkových a fekálních koliformních bakterií v potravě a vodě nebo jako před obohacovací bujón pro Salmonella.

Předběžné obohacování

Předběžné obohacení je krok před obohacením vzorku, což výrazně zlepšuje regeneraci bakterií rodu Salmonella ve zpracovaných potravinách.

Za tímto účelem se pevný vzorek potravy (25 g) nebo kapalina (25 ml) naočkuje do 225 ml laktózového bujónu, inkubuje se 24 až 48 hodin. Následně se subkultivuje v obohaceném médiu, jako je seleničitanový cystinový vývar nebo tetrathionátový vývar. Poté přejděte na XLD a SS selektivní média.

Analýza celkových a fekálních koliform

Je to vynikající médium jako indikátor fekální kontaminace.

Z tohoto důvodu je laktózový bujón ideální pro presumptivní fázi studie koliformních bakterií metodou nejpravděpodobnějšího počtu.

U vzorků, u nichž existuje podezření na velké množství koliformních bakterií, se naočkuje menší množství těchto bakterií (1 ml), zatímco u vzorků, u nichž existuje podezření na nižší množství koliformních organismů, se naočkuje větší objem vzorků (10 ml).

Pro analýzu se připraví ^10-1, 10 ^-2, ^10-3 ředění, čímž se vytvoří baterie 3-5 zkumavek pro každou použitou koncentraci.

Z každého ředění se stejný objem naočkuje do laktózového bujónu.

Zkumavky se inkubují 24 hodin. Negativní vývary se inkubují dalších 24 hodin.

Interpretace výsledků se provádí pozorováním dvou charakteristik: první je přítomnost nebo nepřítomnost zákalu a protože toto médium neobsahuje indikátor pH, nedojde ke změně barvy.

Druhým je produkce plynu či nikoli. Plyn je snadno patrný v Durhamově trubici díky vzhledu jedné nebo více vzduchových bublin v něm.

Považuje se za pozitivní, pokud jsou pozorovány obě charakteristiky, tj. Zákal s výrobou plynu. Pozitivní zkumavky by měly být znovu naočkovány do potvrzujícího média (2% bujón s brilantní zelenou žlučou a EC bujón).

Kontrola kvality média

- Při přípravě média je důležité nezapomenout umístit Durhamsovy zkumavky, pokud je jejich účelem studovat koliformní bakterie.

- Před sterilizací médium nepřehřívejte.

- Distribuujte do zkumavek před sterilizací, nikdy poté.

- Nepoužívejte, pokud je médium starší než 3 měsíce.

- Nepoužívejte, pokud pozorujete jakoukoli změnu obvyklých charakteristik média.

- Při přípravě šarže laktózového bujónu otestujte jeho kvalitu setím známých kmenů, jako jsou Escherichia coli, Enterobacter aerogenes, Citrobacter freundii a Klebsiella pneumoniae. Rostou velmi dobře, s produkcí plynu (pozitivní kontrola).

- Může také zahrnovat Pseudomonas aeruginosa, Salmonella typhimurium nebo Enterococcus faecalis, které rostou dobře, ale bez produkce plynu (negativní kontrola).

- Je třeba poznamenat, že původní barva dehydratovaného média je béžová a barva připraveného média je velmi světlá a transparentní žlutá. Pokud je pozorována změna barvy nebo vzhledu, může se zhoršit.

Reference

1. Acevedo R, Severiche C, Castillo M. Biologie životního prostředí a mikrobiologie. (2013) 1. vydání. University of Cartagenas, Kolumbie.
2. Camacho A, Giles M, Ortegón A, Palao M, Serrano B a Velázquez O. (2009). Techniky mikrobiologické analýzy potravin. 2. ed. Fakulta chemická, UNAM. Mexiko.
3. Conda Pronadisa Laboratories. 2017. Laktózový vývar s dvojitou koncentrací (European Pharm.)
4. Fernández-Rendón C, Barrera-Escorcia G. Srovnání technik extrakce koliformních bakterií ze sedimentu jezera Xochimilco v Mexiku. Rev. argent. mikrobiol. 2013; 45 (3): 180-184. K dispozici na adrese: scielo.org.
5. Sotomayor F, Villagra V, Cristaldo G, Silva L, Ibáñez L. Stanovení mikrobiologické kvality artézských studenských vod v okresech centrálních, Cordillera a městských částí hlavního města. Mem. Inst. Investig. Věda. Zdraví 2013; 11 (1): 5-14. K dispozici od: scielo.iics.