Malonát půda je kapalné kultivační médium používá pro diagnostický test (malonát), který se používá k odlišení určité rody čeledi Enterobacteriaceae. Byl vytvořen Leifsonem v roce 1933 a později modifikován Ewingem, který přidal malé množství dextrózy a kvasničného extraktu do původní receptury.
Médium je v současné době složeno z kvasničného extraktu, síranu amonného, fosforečnanu draselného, fosforečnanu draselného, chloridu sodného, malonátu sodného, dextrózy a bromtymolové modři. Tento test je obecně zahrnut do biochemické identifikační baterie pro Enterobacteriaceae, což pomáhá rozlišovat určité rody a druhy.
Grafické znázornění malonátového testu. A. Negativní test, B. (Acidifikace) Negativní test, C. (Střední alkalizace) Pozitivní test. Zdroj: Barevné trubky publicdomainpictures.net
Test malonátu je hlavně založen na schopnosti některých mikroorganismů používat malonát sodný jako jediný zdroj uhlíku a síran amonný jako zdroj dusíku.
Maklonátový test je obvykle pozitivní u některých druhů rodů Enterobacter, Klebsiella a Citrobacter. Vzhledem k tomu, že většina druhů rodů Escherichia, Salmonella, Shigella, Edwardsiella, Yersinia, Serratia, Morganella, Proteus a Providencia dává negativní reakci.
Základ
Test malonátu spočívá v ukázání těch bakterií, které jsou schopné používat malonát sodný jako jediný zdroj uhlíku a síran amonný jako zdroj dusíku.
Většina Enterobacteriaceae, které nepoužívají malonáty, jsou schopny růst v tomto médiu, přičemž jako živiny berou dextrózu a kvasnicový extrakt.
V tomto případě bude jakýkoli pokus o alkalizaci pomocí peptonů potlačen produkcí kyselin generovaných fermentací dextrózy. Podobně jako fosforečnan draselný a fosforečnan draselný fungují jako pufr, přičemž pH se udržuje na 6,7.
Proto, když je test negativní, vývar zůstává stejná původní barva (zelená). Ve vzácných případech může být médium kyselé díky fermentaci dextrózy; bez použití peptonů a indikátoru pH by obrátila barvu média na žlutou. Aby k tomu došlo, musí pH klesnout na 6.
Pokud je však tento test pozitivní, říká se, že mikroorganismus použil jako zdroje uhlíku a síranu amonného sírany amonné, aniž by použil další složky.
V tomto případě se médium stává zásaditým díky uvolňování sodíku a následné tvorbě NaOH. V tomto smyslu indikátor pH (bromtymolová modrá) změní barvu média ze zelené na modrou, když je pH rovné nebo vyšší než 7,6. Modrá může být světlá nebo intenzivní (pruská modrá).
Nakonec chlorid sodný udržuje osmolaritu média a voda je ředidlem všech složek.
Výklad
Stejný barevný vývar (zelený) - negativní test
Žlutý vývar: negativní test
Světle nebo tmavě modrý vývar: testujte pozitivně
Tam je varianta volala fenylalanine malonate vývar, také volal Shaw a Clarkeovo médium. V tomto případě lze analyzovat dva testy, použití malonátu jako zdroje uhlíku a produkce kyseliny pyruvové z fenylalaninu.
Příprava
Malonate vývar
Váží se počet gramů specifikovaných v příloze vybrané obchodní společnosti (může se lišit od jedné k druhé). Navážené gramy se suspendují v jednom litru destilované vody. Mírně zahřejte, dokud se úplně nerozpustí. Rozdělte 3 ml média do 13/100 zkumavek s vatovými uzávěry.
Sterilizujte v autoklávu při 121 ° C po dobu 15 až 20 minut.
Před použitím vychladněte. Pokud se nepoužijí okamžitě, skladujte v chladničce až do použití. Před inokulací přiveďte vývar na pokojovou teplotu.
PH média by mělo být 6,7 ± 0,2. Barva připraveného média je zelená.
Fenylalaninový malonátový vývar
Naváží se 11 g dehydratovaného média a rozpustí se v 1 litru destilované vody. Zbytek přípravku je stejný, jako byl popsán dříve.
Může být také připraven přidáním 2 g / l fenylalaninu do média malonátového bujónu před sterilizací.
Použití
Používá se jako součást baterie biochemických testů, které jsou sestaveny pro identifikaci bakterií čeledi Enterobacteriaceae.
Pomáhá rozlišovat mezi:
- Rod Klebsiella a Enterobacter (+) rodu Escherichia a Serratia (-).
- Druh Salmonella enterica ssp arizonae, Salmonella enterica ssp a Salmonella enterica ssp diarizonae (+), druhu Salmonella enterica ssp enterica (-).
- Z rodu Klebsiella obecně (+) z rodu Actinobacillus (-).
- Občas může napomoci diferenciaci rodů a druhů bakterií, které nepatří do čeledi Enterobacteriaceae, například mezi nekvasící gramnegativní bacily Alcaligenes faecalis (+) a Acinetobacter sp (-).
Zdroj: Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologická diagnostika. 5. ed. Editorial Panamericana SA Argentina.
Proces
Pod zapalovačem se odebere část čistého kolínské vody pomocí správně sterilizované a chlazené kliky z platiny. Odebraný vzorek (lehké inokulum) se rozpustí v malonátovém vývaru. Inkubujte s uvolněným víčkem v aerobióze při 35 ° C ± 0,2 po dobu 24 až 48 hodin.
Malonátový vývar lze také naočkovat 18 až 24 hodinovou kulturou v sójovém vývaru tryptikázy. V tomto případě se odebere 0,01 ml sterilní pipetou a naočkuje se malonátový vývar. Inkubujte s uvolněným víčkem v aerobióze při 35 ° C ± 0,2 po dobu 24 až 48 hodin.
Po uplynutí času jsou výsledky interpretovány. Jakékoli stopy modré barvy po 48 hodinách inkubace by měly být považovány za pozitivní. Test by neměl být interpretován jako negativní, dokud neuplyne doba inkubace 48 hodin.
V případě použití varianty fenylalanin malonátu se nejprve interpretuje malonát a poté se přidá 5 kapek 1N HC1 a 3-5 kapek 8% chloridu železitého. Tmavě zelená barva je interpretována jako pozitivní test na fenylalanin. Pokud se na druhé straně médium změní na světle modrou, je test na fenylalanin negativní.
QA
K provedení kontroly sterility média by měla být inkubována jedna nebo dvě živné půdy při 35 ° C ± 0,2 po dobu 24 hodin inkubace. Po uplynutí této doby by nemělo dojít k žádnému zákalu nebo změně barvy.
Pro kontrolu kvality mohou být použity známé nebo certifikované kmeny, jako například: Enterobacter aerogenes ATCC 13048, Klebsiella pneumoniae ATCC 33945, Salmonella enterica ssp arizonae ATCC 13314 a Escherichia coli ATCC 25922.
Očekávané výsledky jsou:
- Enterobacter aerogenes, Klebsiella pneumoniae a Salmonella enterica ssp arizonae dávají pozitivní reakci (středně modrá barva).
- U Escherichia coli by výsledek měl být negativní, tj. Očekává se, že nedojde k žádné změně barvy (zelená) nebo že se v důsledku fermentace glukózy změní na žlutou.
Omezení
Nepoužívejte vývar, který vykazuje zákal, sraženiny, změnu barvy nebo jakékoli známky poškození.
Reference
- Pedraza J, Sanandres N, Varela Z, Aguirre E, Camacho J. Mikrobiologická izolace Salmonella spp. a molekulární nástroje pro jeho detekci. Uninorte Health. Barranquilla (pl.) 2014; 30 (1): 73-94. K dispozici na adrese: scielo.org.co
- BBL. Malonate Broth, Ewing upraven. 2007. K dispozici na adrese: bd.com
- Senna Laboratories. Malonato vývar. K dispozici na adrese: cientificasenna.com
- RenyLab. Malonato vývar. 2013. K dispozici na adrese: es.renylab.ind.br
- Mbiologická diagnostika. Malonato vývar. K dispozici na adrese: mbiolog.com
- Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologická diagnostika. 5. ed. Editorial Panamericana SA Argentina.
- Conda Pronadisa Laboratories. Fenylalaninový malonátový vývar. K dispozici na adrese: condalab.com