- Základ
- Příprava
- -Selenitový vývar
- - Příprava obchodního prostředí
- Varianta výbušného selenitového cystinu
- Aplikace
- Zaseté
- QA
- Omezení
- Reference
Seleničitan je selektivní kapalné kultivační médium. Byl navržen společností Leifson pro obohacování vzorků, u nichž existuje podezření na přítomnost enteropatogenních bakterií rodu Salmonella.
Toto médium vyhovuje požadavkům Americké asociace pro veřejné zdraví (APHA), a proto je akceptováno mimo jiné pro zkoumání přítomnosti salmonel ve vzorcích fekálií, moči, tekutých nebo pevných potravin, vody.
Selenitový vývar. Zdroj: Fotografie pořízená autorem MSc. Marielsa gil
Jeho chemické složení podporuje regeneraci těchto mikroorganismů a naopak inhibuje růst ostatních. Je primárně toxický pro většinu bakterií patřících do rodiny Enterobacteriaceae. Umožňuje však také regeneraci kmenů Shigella a neinhibuje růst Pseudomonas a Proteus.
Skládá se z bezvodého hydrogenuhličitanu sodného, bezvodého fosforečnanu sodného, peptonů a laktózy. Tam je také varianta ke kterému cystine je přidán, proto jeho jméno selenite-cystine vývar.
V současné době je výhodné použití seleničitan-cystinového bujónu, protože se získá vyšší procento výtěžku salmonel, což je ekvivalentní tomu, které bylo pozorováno u jiných selektivních médií pro stejný účel, jako je bujón tetrathionát sodný.
Základ
Peptony obsažené v vývaru slouží jako živiny pro správný vývoj mikroorganismů. Kmeny Salmonella používají peptony jako zdroj dusíku, vitamínů a aminokyselin.
Laktóza je fermentovatelný uhlohydrát, zatímco seleničitan sodný je inhibiční látkou, která zastavuje růst grampozitivních bakterií a většiny bakterií přítomných ve střevní flóře, zejména bakterií čeledi Enterobacteriaceae. Fosforečnan sodný je pufr, který stabilizuje pH média.
V případě varianty selenitového bujónu obsahujícího L-cystin je tato další sloučenina redukčním činidlem, které minimalizuje toxicitu selenitu a zvyšuje regeneraci salmonel.
Příprava
-Selenitový vývar
Pokud máte složky směsi, můžete zvážit:
4 g bezvodého hydrogenuhličitanu sodného.
10 g bezvodého fosforečnanu sodného.
5 g peptonů.
4 gramy laktózy.
Sloučeniny se rozpustí v 1 litru sterilní destilované vody. Může se mírně zahřát, aby se úplně rozpustil.
Některé laboratoře vystavují médium po dobu 10 minut plynné parě, aby jej sterilizovaly, protože by se neměl používat autokláv. Pokud je médium sterilizováno, může být až do použití uloženo v lednici.
Lze jej také připravit nesterilní a přímo do 10-5 ml do sterilních zkumavek.
V takovém případě je třeba nechat okamžitě odpočívat a používat. Protože médium není sterilní, nelze jej uložit v lednici pro pozdější použití.
- Příprava obchodního prostředí
Je-li k dispozici komerční médium, naváží se 23 g dehydratovaného média a rozpustí se v jednom litru sterilní destilované vody. Krátce zahrejte, dokud se nerozpustí. Nepoužívejte autokláv. Asepticky podávejte 10 nebo 15 ml ve sterilních zkumavkách.
Konečné pH média by mělo být 7,0 ± 0,2.
Je třeba poznamenat, že barva dehydratovaného média je béžová a přípravek je světlý a průsvitný jantar.
Varianta výbušného selenitového cystinu
Obsahuje stejné sloučeniny jako seleničitý vývar, ale přidá se 10 mg cystinu. Zbytek postupu je přesně stejný jako výše uvedený postup.
Aplikace
Toto médium je speciální pro použití v epidemiologických studiích, v případech, kdy nemoc není v akutním stadiu, u asymptomatických pacientů nebo zdravých nosičů.
Izolace rodu Salmonella je obecně obtížná, protože se obvykle jedná pouze o vzorky, které špatně kontaminují. Protože je v malém množství, snadno se překrývá s růstem dalších bakteriálních rodů, které se vyskytují ve větším množství.
Na druhé straně jsou suroviny, z nichž se vyrábějí zpracované potraviny, často vystaveny mimo jiné teplu, dehydratačním procesům, použití dezinfekčních prostředků, záření a konzervačních látek.
Salmonely, přítomné v surovině, jsou proto špatně ošetřeny podrobením produktu výše uvedeným průmyslovým procesům. Podobně v případě klinických vzorků, jako jsou stolice, mohou být kmeny slabé, pokud pocházejí od pacientů, kteří byli léčeni antibiotiky.
Proto by měl být jakýkoli vzorek, u kterého existuje podezření na přítomnost salmonel, předem obohacen v laktózovém vývaru a následně obohacen o selenitový vývar, aby se optimalizovalo jeho zotavení ve selektivních médiích, jako je SS agar, xylózový agar, lysin deoxycholát (XLD)), enterický Hektoenův agar (HE) a jasně zelený agar.
Zaseté
U vzorků stolice odeberte 1 g vzorku a suspendujte v zkumavce s 10 až 15 ml seleničitého vývaru. Pokud jsou stoličky tekuté, vezměte 1 ml a zavěste se do vývaru. Pro rektální výtěry vypusťte materiál výtěru do vývaru.
U vzorků pevných potravin odeberte 1 gram a suspendujte v selenitovém vývaru.
V tekutých potravinách smíchejte ve stejných částech se seleničitým vývarem ve dvojité koncentraci.
U vzorků moči odstřeďte, zlikvidujte supernatant, odeberte veškerý sediment a suspendujte ho v selenitovém vývaru.
Bujóny se inkubují při 37 ° C po dobu 24 hodin. Bakteriální růst je doložen zákalem. Pro inkubaci při 42 ° C lze také přidat další zkumavku na vzorek. Následně naočkování selektivního pevného média ze seleničitanového bujónu.
QA
Pro kontrolu sterility se selenitový vývar z každé naočkované šarže inkubuje při 37 ° C po dobu 24 hodin. Očekává se, že nedochází k zákalu nebo změně barvy média.
Známé kmeny mohou být použity k řízení správného fungování média, jako například:
Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella choleraesuis ATCC 12011, Escherichia coli ATCC 25922 a Proteus mirabilis ATCC 43071.
Očekávané výsledky jsou:
- U prvních tří bakteriálních kmenů musí být růst uspokojivý.
- Pro částečnou inhibici Escherichia coli.
- Pro Proteus mírný růst.
Omezení
Médium se selenitovým bujónem je pro lidskou kůži toxické, proto je třeba se vyhnout přímému kontaktu.
Reference
- Flores-Abuxapqui J, Puc-Franco M, Heredia-Navarrete M, Vivas-Rosel M, Franco-Monsreal J. Porovnání kultivačních médií seleničitanu sodného a tetrathionátu sodného, oba inkubovány při 37 ° C a 42 ° C po dobu izolace Salmonella spp z výkalů nosičů. Rev Biomed 2003; 14 (4): 215-220
- Britannia Laboratories. Selenito vývar. 2015.K dispozici na: britanialab.com
- Neogen Laboratories. Selenitový vývar. K dispozici na adrese: foodsafety.neogen.com
- González -Pedraza J, Pereira -Sandandres N, Soto-Varela Z, Hernández -Aguirre E, Villarreal- Camacho J. Mikrobiologická izolace Salmonella spp. a molekulární nástroje pro jeho detekci. Zdraví, Barranquilla 2014; 30 (1): 73-94. K dispozici na adrese:
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey a Scott Mikrobiologická diagnostika. 12 ed. Editorial Panamericana SA Argentina.