TRYPTICASEIN SOJOVÝ VÝVAR: ZALOŽENÍ, PŘÍPRAVA A POUŽITÍ - BIOLOGIE - 2025

Sójový bujón trypton je kapalné kultivační médium, vysoce výživné, neselektivní. Vzhledem ke své velké všestrannosti je to jedno z nejpoužívanějších kapalných kultivačních médií v mikrobiologické laboratoři.

To je také známé pod názvem tryptický sójový vývar nebo kasein-sójový trávený, jehož zkratka je TSB pro jeho zkratku v angličtině Tryptic sójový vývar nebo CST pro jeho zkratku ve španělštině. Její použití se díky svému složení velmi liší. Skládá se z tripteinu, sójového peptonu, chloridu sodného, ​​fosforečnanu draselného a glukózy.

Sójový bujón Trypticaseinu naočkovaný kmenem Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853, kde je pozorována produkce pigmentu. Zdroj: Fotografie pořízená autorem MSc. Marielsa Gil.

Je schopen reprodukovat klinicky důležité patogenní bakterie, včetně těch, které jsou nutričně náročné a anaerobní bakterie. V tomto prostředí se také mohou vyvinout některé oportunistické a kontaminující houby.

Vzhledem ke své vysoké výživové síle má vysokou citlivost k detekci mikrobiální kontaminace, a proto byla vybrána službou USDA pro veterinární a veterinární inspekce pro mikrobiologickou analýzu vakcín.

Sójový bujón trypticaseinu rovněž splňuje požadavky různých lékopisů (European EP, Japanese JP a North American USP) pro mikrobiologické studium produktů na průmyslové úrovni, jako je kosmetika a potraviny.

Na druhou stranu stojí za zmínku, že navzdory velkému užitku je toto médium relativně levné, takže je dostupné pro většinu mikrobiologických laboratoří. Je také velmi snadné se připravit.

Základ

Triptein, pepton a glukóza poskytují základní nutriční vlastnosti, díky kterým je ideálním prostředkem pro rychlý mikrobiální růst.

Během přibližně 6 až 8 hodin inkubace lze růst pozorovat již u většiny mikroorganismů. Existují však pomalu rostoucí kmeny, které mohou růst několik dní.

Chlorid sodný a fosforečnan draselný fungují jako osmotická rovnováha a regulátor pH. Přítomnost růstu je doložena výskytem zákalu v médiu; pokud nedochází k růstu, zůstává médium průsvitné.

Díky své světlé barvě je možné pozorovat produkci pigmentů, jako je pigment zobrazený na obrázku na začátku článku, který odpovídá pigmentu produkovanému Pseudomonas aeruginosa.

Příprava

-Trtytyin v sójovém vývaru

K přípravě tryptického sójového bujónu se musí digitálně zvážit 30 g dehydratovaného komerčního média. Poté se rozpustí v litru destilované vody obsažené v baňce.

Směs se nechá 5 minut odpočívat a poté se převede na zdroj tepla, který napomáhá rozpuštění média. Měl by se často míchat za varu po dobu 1 minuty.

Po rozpuštění se podle potřeby distribuuje do zkumavek vhodné velikosti. Lze použít zkumavky s bavlněnými vložkami nebo s uzávěry Bakelite. Následně se zkumavky sterilizují s médiem v autoklávu při 121 ° C po dobu 15 minut.

PH média musí zůstat na 7,3 ± 0,2

Je třeba poznamenat, že barva dehydratovaného kultivačního média je světle béžová a měla by být skladována při teplotě 10 až 35 ° C na suchém místě. Připravený vývar je světle žluté barvy a měl by být skladován v lednici (2 až 8 ° C).

- Varianty tryptikasinového sójového bujónu

Modifikovaný trypticaseinový sójový bujón může být připraven přidáním žlučových solí a novobiocinu, aby byl selektivní pro izolaci E. coli. Další možností pro stejný účel je připravit sójový bujón tryptikázy doplněný vankomycinem, cefiximem a telluritem (2,5 ug / ml).

Na druhé straně, více glukózy (0,25%) může být přidáno do tryptického sójového bujónu, když je cílem stimulovat tvorbu biofilmů.

Použití

Je dostatečně výživný, aby umožnil růst náročných nebo náročných bakterií, jako jsou Streptococcus pneumoniae, Streptococcus sp a Brucella sp, bez nutnosti doplňování krví nebo séra.

Podobně se v tomto vývaru mohou vyvinout některé houby, jako je například Candida albicans Complex, Aspergillus sp a Histoplasma capsulatum.

Kromě toho je toto médium za anaerobních podmínek ideální pro izolaci bakterií rodu Clostridium a také pro nesporované anaerobní bakterie klinického významu.

Pokud je přidán 6,5% chlorid sodný, může být použit pro růst Enterococcus a jiných streptokoků skupiny D.

Na výzkumné úrovni je velmi užitečný v různých protokolech, zejména při studiu bakterií vytvářejících biofilm nebo biofilm. Používá se také k přípravě 0,5% bakteriální suspenze Mac Farland nezbytné k provedení antibiogramu metodou Kirbyho a Bauera.

V tomto případě se odeberou 3 až 5 kolonií podobného vzhledu a emulgují se ve 4-5 ml sójového bujónu tryptikasinu. Potom se inkubuje 2 až 6 hodin při 35 až 37 ° C a následně se sterilním solným roztokem upraví na požadovanou koncentraci. Trypticaseinové sójové bujóny by se neměly používat od 18 do 24 hodin inkubace.

Zaseté

Vzorek může být naočkován přímo nebo mohou být subkultivovány čisté kolonie odebrané ze selektivního média. Inokulum by mělo být malé, aby se médium před inkubací nezakalilo.

Normálně se inkubuje při aerobióze při 37 ° C po dobu 24 hodin, ale tyto podmínky se mohou lišit v závislosti na hledaném mikroorganismu. V případě potřeby může být také inkubována za anaerobních podmínek při 37 ° C po dobu několika dnů. Například rychle rostoucí nebo náročné mikroorganismy lze inkubovat až 7 dní.

V mikrobiologické analýze farmaceutických látek - jako jsou vakcíny - jsou protokoly přísnější. V těchto případech se vývar bez růstu nezlikviduje, dokud nedosáhne 14 dní nepřetržité inkubace.

QA

Z každé připravené šarže by měla být inkubována 1 nebo 2 naočkované zkumavky, aby se prokázala jejich sterilita. Musí zůstat nezměněn.

Známé kmeny lze také vysadit, aby se vyhodnotilo jejich chování. Mezi kmeny, které lze použít, patří:

Aspergillus brasiliensis ATCC 1604, Candida albicans ATCC 10231, Bacillus subtilis ATCC 6633, Staphylococcus aureus ATCC 6538 nebo 25923, Escherichia coli ATCC 8739, Streptococcus pyogenes ATCC 19615, Streptococcus pneumoniae, ATCC28CC305 pneumoniae ATCC28omonas 905, pneumoniae ATCC28omonas305.

Ve všech případech musí být růst uspokojivý za vhodných podmínek atmosféry a teploty pro každý mikroorganismus.

Omezení

- Fermentace glukózy způsobuje pokles pH média v důsledku produkce kyselin. To může být nepříznivé pro přežití některých mikroorganismů citlivých na kyselost.

- Nedoporučuje se pro udržování kmenů, protože kromě kyselosti bakterie vyčerpávají živiny i po několika dnech s následnou akumulací toxických látek, díky nimž je prostředí nehostinné.

- Musíte se starat o všechny protokoly sterility, protože bujóny jsou snadno kontaminovány.

- Po přípravě sójových bujónů tryptikasinu byste se neměli pokoušet přenést bujón do jiné sterilní zkumavky, protože tento typ manévru je velmi náchylný ke kontaminaci.

Reference

1. Cona E. Podmínky pro dobrou studii citlivosti pomocí agarového difúzního testu. Rev. chil. infectol. 2002; 19 (2): 77-81. K dispozici na adrese: scielo.org
2. Britannia Laboratory. Triptein sojový vývar. 2015.K dispozici na: britanialab.com
3. Laboratoř MCD. Trypticasein Soy Broth. K dispozici na adrese: electronic-systems.com
4. Neogen Laboratory. Triptych Soy Broth. K dispozici na adrese: foodsafety.neogen.com
5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey a Scott Mikrobiologická diagnostika. 12 ed. Editorial Panamericana SA Argentina.
6. Rojas T, Vásquez Y, Reyes D, Martínez C, Medina L. Hodnocení techniky magnetické imunoseparace pro získání Escherichia coli O157: H7 v mléčných krémech. ALAN. 2006; 56 (3): 257-264. K dispozici na adrese: scielo.org.ve
7. Gil M, Merchán K, Quevedo G, Sánchez A, Nicita G, Rojas T, Sánchez J, Finol M. Tvorba biofilmu v izolátech Staphylococcus aureus podle antimikrobiální citlivosti a klinického původu. Vitae. 2015; 62 (1): 1-8. K dispozici na adrese: saber.ucv.ve
8. Narváez-Bravo C, Carruyo-Núez G, Moreno M, Rodas-González A, Hoet A, Wittum T. Izolace Escherichia coli O157: H7 ve dvouúčelových vzorcích hovězího dobytka z Miranda Municipality, stát Zulia, Venezuela. Cient. (Maracaibo), 2007; 17 (3): 239-245. K dispozici na adrese: scielo.org