TETRATHIONÁTOVÝ VÝVAR: ZDŮVODNĚNÍ, PŘÍPRAVA A POUŽITÍ - BIOLOGIE - 2025

Tetrathionát vývar nebo vývar TT je selektivní kapalné kultivační médium pro obohacení a obnovu kmenů rodu Salmonella. Byl vytvořen společností Müeller a později upraven společností Kauffmann, proto existují lidé, kteří jej nazývají vývar Müeller-Kauffmann.

Původní médium obsahovalo proteosové peptony, uhličitan vápenatý a thiosíran sodný. Kauffmann k tomu přidal žlučové soli a vytvořil další modalitu s jasně zelenou. Tyto látky inhibují růst koliformních bakterií a ponechávají médium volné pro vývoj patogenních bakterií, v tomto případě Salmonella.

Přidání roztoku jodu a jódu do vývaru tetrathionátu. Zdroj: Manuel Almagro Rivas

Úprava byla velmi úspěšná, protože významně zvýšila citlivost média. Z tohoto důvodu je v současné době užitečné při hledání salmonel v jakémkoli typu vzorku, ale zejména u pevných nebo tekutých stolic a potravin.

Jeho příprava se skládá ze dvou fází; Komerční médium je základem pro přípravu tetrathionátového bujónu a následně, aby se mohl vytvořit tetrathionát, přidá se jodovaný jodový roztok k dokončení média.

Americká asociace pro veřejné zdraví (APHA) doporučuje použití Tetrathionátového bujónu doplněného jasně zelenou pro obohacení vzorků na Salmonella, protože je selektivnější než Tetrathionátový bujón a Selenitový bujón.

Obecně je tetrathionátový vývar ideální, pokud je podezření na přítomnost bakterií rodu Salmonella v malém množství nebo pokud jsou zneužívány vystavením inhibičním látkám nebo průmyslovými procesy, které minimalizují jejich životaschopnost.

Základ

Přítomné peptony odpovídají pankreatickému štěpení kaseinu a peptickému štěpení zvířecí tkáně. Ty poskytují zdroj uhlíku, dusíku a obecných živin pro růst bakterií.

Thiosulfát sodný reaguje s jodovaným roztokem za vzniku tetrathionátu. To inhibuje růst koliformních organismů a podporuje vývoj bakterií, které obsahují enzym tetrathionát reduktázu, mezi nimi je rod Salmonella, ale také Proteus.

Žlučové soli také působí jako inhibiční látka pro většinu grampozitivních a některých gramnegativních bakterií (koliformní formy).

Uhličitan vápenatý absorbuje toxické látky vytvářené rozkladem tetrathionátu, který tvoří kyselinu sírovou. V tomto smyslu uhličitan vápenatý neutralizuje kyselost a udržuje pH média stabilní.

V případě jasně zelené modality tato látka zvyšuje selektivní sílu tetrathionátového vývaru inhibicí jiných mikroorganismů než rodu Salmonella.

Příprava

-Tetrathionátový vývar

Roztok jodu

Vážit:

• 6 gramů jodu.
• 5 g jodidu draselného.

Jodid draselný se rozpustí v přibližně 5 ml sterilní destilované vody, poté se za zahřívání přidává jód pomalu. Po úplném rozpuštění doplňte sterilní destilovanou vodou po značku až do dosažení konečného objemu 20 ml.

Základní médium pro tetrathionátový vývar

Naváží se 46 gramů dehydratovaného média a suspenduje se v 1 litru sterilní destilované vody. Promíchejte a zahřejte, dokud se úplně nerozpustí, může to dojít k varu pouze na několik minut. Nepoužívejte autokláv. Báze média se nechá vychladnout na přibližně 45 ° C a poté se přidá 20 ml jodovaného roztoku.

Po přidání jodovaného roztoku do média by měl být použit okamžitě. Pokud nechcete používat celou směs, postupujte následovně:

10 ml základního média se rozdělí do zkumavek a pouze k zkumavkám, které se naočkují vzorky, se přidá 0,2 ml jodovaného roztoku.

Ty, které se nebudou používat, mohou být stále uloženy v lednici, ale protože médium není sterilizováno, je ideální připravit přesné množství, které je potřeba.

Barva média před přidáním jodovaného roztoku jodu je mléčně bílá s bílou sraženinou a po přidání je hnědá s hustou sraženinou. Pozorovaná sraženina je normální a odpovídá uhličitanu vápenatému, který se nerozpouští. Konečné pH média je 8,4 ± 0,2.

-Tetrathionátová vývar s jasně zelenou

K přípravě jasně zeleného bujónu tetrathionátu se provedou všechny výše popsané kroky, ale navíc se ke směsi přidá 10 ml jasně zeleného roztoku připraveného v 0,1%.

Svítí zeleně

Tento roztok je připraven následujícím způsobem:

Naváží se 0,1 g světle zelené a suspenduje se ve 100 ml destilované vody. Zahřejte k varu, abyste dosáhli úplného rozpuštění. Uchovávejte v jantarové láhvi.

Použití

Pro vzorky stolice (kultura stolice) je protokol následující:

Naočkujte 1 g pevné stolice nebo 1 ml tekuté stolice do zkumavky 10 ml hotového tetrathionátového bujónu. Silně protřepte a inkubujte aerobně při 43 ° C po dobu 6-24 hodin.

Následně se odebere 10 až 20 ul alikvotního vývaru a subkultury v selektivním médiu pro Salmonella, jako je SS agar, XLD agar, jasně zelený agar, Hektoenův enterický agar.

Paralelně se selektivní média pro Salmonella inokulují přímým vzorkem (stolicí) bez obohacení. U vzorků z rektálního tampónu vypusťte shromážděný materiál do zkumavky a postupujte podle výše uvedeného popisu.

U vzorků potravin navážte 10 g pevného krmiva nebo 10 ml tekutého jídla a naočkujte láhev 100 ml hotového tetrathionátového bujónu. Postupujte stejným způsobem, jak je popsáno výše, ale inkubujte při 37 ° C.

Jak je vidět, vztah mezi vzorkem a vývarem bude vždy 1:10.

QA

K testování kultivačního média lze použít známé kontrolní kmeny. Nejpoužívanější jsou kmeny certifikované ATCC.

Použitými kmeny jsou Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella abony DSM 4224, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Escherichia coli ATCC 25922, Enterococcus faecalis ATCC 19433 a Staphylococcus aureus ATCC 25923.

Vynikající růst se očekává u kmenů Salmonella, zatímco Escherichia coli může mít slabý nebo pravidelný růst a grampozitivní kmeny (Enterococcus a Staphylococcus) jsou částečně nebo úplně inhibovány.

doporučení

- Protože toto médium neinhibuje růst Proteus, některé laboratoře používají 40 mg / l novobiocinu, aby zabránily rozvoji tohoto mikrobiálního kmene. Antibiotikum musí být přidáno před roztokem jódu.

- Po přípravě média včetně roztoku jodu a jódu by naočkování nemělo trvat déle než 2 hodiny.

- Při distribuci média do zkumavek musí být směs kontinuálně homogenizována, aby se vytvořená sraženina znovu suspendovala.

- V méně kontaminovaných vzorcích se výluh tetrathionátu inkubuje při 35–37 ° C a ve vysoce kontaminovaných vzorcích se doporučuje inkubace při 43 ° C.

Reference

1. Conda Pronadisa Laboratory. 2010. Tetrathionátová bujónová základna podle Müeller-Kauffmanna. K dispozici v:
2. Laboratoře BD. 2003. Tetrathionátová vývarová základna. K dispozici v:
3. Britannia Laboratories. 2015. Tetranate základní vývar. K dispozici v:
4. BBL Media. 2005. Připraveno ve zkumavkách pro kultivaci druhů Salmonella.
5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey a Scott Mikrobiologická diagnostika. 12 ed. Editorial Panamericana SA Argentina.
6. Flores-Abuxapqui J, Puc-Franco M, Heredia-Navarrete M, Vivas-Rosel M, Franco-Monsreal J. Porovnání kultivačních médií seleničitanu sodného a tetrathionátu sodného, ​​oba inkubovány při 37 ° C a 42 ° C po dobu izolace Salmonella spp z výkalů nosičů. Rev Biomed 2003; 14 (4): 215-220