THIOGLYKOLÁTOVÝ VÝVAR: ODŮVODNĚNÍ, PŘÍPRAVA A POUŽITÍ - BIOLOGIE - 2025

Thioglykolát vývar je médium obohacené tekuté konzistenci. Zkratka FTM je známá jako zkratka v anglickém tekutém thioglykolátovém médiu. Byl vytvořen Brewerem a upraven v roce 1944 Vérou, která do něj přidala kaseinový pepton.

Toto médium má nízký oxidačně-redukční potenciál, proto se nedoporučuje pro vývoj přísných aerobních bakterií, ale je ideální pro regeneraci fakultativních aerobních, přísných anaerobních a nenáročných mikroaerofilních bakterií.

Thioglykolátový vývar bez indikátoru. Ukazuje vaginální výtok. Zdroj: Bobjgalindo

Vysoký výkon pozorovaný s tímto médiem při izolaci a regeneraci široké škály mikroorganismů způsobil, že byl akceptován Pharmacopeia Spojených států (USP), Oficiální asociací zemědělských chemiků (AOAC) a Evropským lékopisem (EP).

Tyto organizace to doporučují pro testování sterility farmaceutických produktů a pro obohacování různých typů vzorků.

Kadiothioglykolát se skládá z kvasnicového extraktu, pankreatického trávení kaseinu, bezvodé dextrózy, L-cystinu, chloridu sodného, ​​thioglykolátu sodného, ​​resazurinu a agaru v malém množství.

Existuje několik verzí tohoto média, mezi nimi jsou: thioglykolát vývar s indikátorem, thioglykolát vývar bez ukazatele, thioglykolát vývar s indikátorem obohacené hemin a vitamínu K _1, a thioglykolát vývar s uhličitanem vápenatým.

Zejména varianta thioglykolátového bujónu obohaceného heminem a vitamínem K slouží ke zvýšení růstu náročných anaerobů a varianta thioglykolátového bujónu obsahující uhličitan vápenatý je užitečná pro působení proti kyselinám produkovaným během mikrobiálního růstu.

Základ

Tioglykolátový vývar je považován za neselektivní obohacovací médium, protože umožňuje růst většiny nejnáročnějších bakterií. Nutriční požadavky jsou dány kvasinkovým extraktem, pankreatickým trávením a glukózou.

Na druhé straně toto médium, přestože je vývar, obsahuje malé množství agaru; To znamená, že má nízký oxidačně-redukční potenciál v důsledku skutečnosti, že zpomaluje vstup kyslíku takovým způsobem, že kyslík klesá, když prochází hlouběji do trubice.

To je důvod, proč je toto médium ideální pro vývoj fakultativních aerobních, mikroaerofilních a přísných anaerobních bakterií, přičemž druhé médium 2 není nutné za těchto podmínek inkubovat. Stejné médium reguluje množství kyslíku v médiu, které chybí na dně zkumavky a v dostatečném množství na povrchu.

Podobně thioglykolát a L-cystin působí jako redukční činidla, což pomáhá zabránit hromadění látek, které jsou škodlivé pro bakteriální vývoj, jako je peroxid. Kromě toho tyto sloučeniny obsahují sulfhydrylové skupiny (-SH-), které neutralizují inhibiční účinky derivátů rtuti, arzeniků, mimo jiné těžké kovy.

Resazurin je indikátorem redukce oxidů. Tato látka je bezbarvá, pokud je redukována, a růžová, když je oxidována. Existují varianty indikačního a neindikčního thioglykolátového bujónu. Jeho použití bude záviset na typu vzorku a preferenci laboratoře.

Mezitím si chlorid sodný udržuje osmotickou rovnováhu thioglykolátového bujónu a použití glukózy v bezvodé formě zabraňuje přebytečné vlhkosti v dehydratovaném médiu.

Příprava

Thioglykolátový vývar s indikátorem

Naváží se 29,75 g dehydratovaného média a rozpustí se v 1 litru destilované vody. Směs se nechá stát přibližně 5 minut. Přiveďte ke zdroji tepla a často míchejte, dokud se úplně nerozpustí.

Nalijte médium do zkumavek a autoklávujte při 121 ° C po dobu 15 minut. Před použitím nechte vychladnout. Zkontrolujte vložku komerčního domu, zda není zachována. Někteří doporučují skladování při pokojové teplotě na tmavém místě a jiní v chladničce chráněné před světlem.

PH připraveného média je 7,1 ± 0,2.

Barva dehydratovaného média je světle béžová a připravené médium je světle jantarové s trochou opalescence.

Tioglykolátový vývar s indikátorem obohaceným heminem a vitamínem K

Existují komerční média, která již obsahují hemin a vitamin K ₁, zejména pro pěstování anaerobů.

Pokud nemáte obohacené médium pro anaeroby, můžete připravit základní thioglykolátový vývar. K tomu _{se přidá} 10 mg heminhydrochloridu a 1 mg vitamínu K1 na každý litr média. Pokud se však do thioglykolátového bujónu přidá krev nebo sérum, není přidání heminu nebo vitaminu K nutné.

Tioglykolátový vývar s uhličitanem vápenatým

Je dodáván komerčně a je připraven podle pokynů na příbalové informaci.

Thioglykolátový vývar bez indikátoru

Toto má stejné složení jako základní thioglykolát, ale neobsahuje resazurin.

Naváží se 30 g dehydratovaného média a rozpustí se v litru destilované vody. Zbytek přípravku je stejný jako ten, který je popsán v thioglykolátovém bujónu s indikátorem.

Použití

Tioglykolátový bujón je užitečný pro obohacení klinických vzorků, zejména vzorků ze sterilních míst. Je také užitečný pro neklinické vzorky, jako jsou kosmetika, léky atd.

Pro inokulaci kapalných vzorků (jako je CSF, synoviální tekutina, mimo jiné) se vzorky nejprve odstředí a poté se odeberou 2 kapky sedimentu a umístí se do thioglykolátového bujónu. Inkubujte při 35 ° C po dobu 24 hodin. Pokud v této době nedochází k žádnému růstu (zákal), inkubuje se maximálně 7 dnů.

Pokud je vzorek odebrán pomocí tamponu, kultivační médium se nejprve naočkuje do misek a nakonec se tampon vloží do vývaru, vyčnívající část se rozdělí a zkumavka se uzavře, přičemž tampon zůstane uvnitř. Inkubujte při 35 ° C po dobu 24 hodin, maximálně 7 dní.

U pevných vzorků homogenizujte ve fyziologickém roztoku (SSF) a poté naočkujte thioglykolátový vývar dvěma kapkami suspenze.

Někdy může být použit jako transportní médium pro vzorky, u nichž existuje podezření na přísné anaeroby, nebo jako záložní obohacující vývar.

Varianta thioglykolátového bujónu s uhličitanem vápenatým se používá pro udržení kontrolních kmenů po delší dobu, protože má schopnost neutralizovat kyseliny produkované pomocí glukózy; Tyto kyseliny jsou toxické pro určité bakterie.

Růst v thioglykolátovém bujónu bude pozorován zákalem média. Doporučuje se provést Gramovo barvení a následně subkultivaci v neselektivních a selektivních médiích, v závislosti na typu vzorku a podezřelých mikroorganismech.

QA

Pro kontrolu sterility se doporučuje inkubovat jeden nebo dva bujóny bez očkování. Očekávaným výsledkem je čirý vývar bez změny barvy, i když je normální vidět na povrchu trubice mírně růžovou barvu.

Pro kontrolu kvality by mělo být inokulováno 10 až 100 CFU certifikovaných kontrolních kmenů, jako je Staphylococcus aureus ATCC 6538, Micrococcus luteus ATCC 9341, Bacillus subtilis ATCC 6633, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Clostridium sporogenes ATCC 19404, Clostridium 11437 sporogenes Bacteroides vulgatus ATCC 8482.

Inkubujte při aerobióze při 30 - 35 ° C po dobu 24 hodin až maximálně 3 dny, protože tyto mikroorganismy rychle rostou.

Dobrý vývoj se očekává ve všech případech, s výjimkou Micrococcus luteus a Bacillus subtilis, kde může být mírný vývoj.

Pro kontrolu kvality thioglykolát půdy obohacené hemin a vitamín K ₁, kontrolní kmeny Bacteroides vulgatus ATCC 8482, Clostridium perfringens ATCC 13124 a Bacteroides fragilis ATCC 25285 může být použit. Očekávaný výsledek je uspokojivý růst.

doporučení

- Občas lze pozorovat, že povrch thioglykolátového bujónu s indikátorem zbarví do růžova; To je způsobeno oxidací média. Pokud růžová barva pokrývá 30% nebo více celkového vývaru, může být zahřívána ve vodní lázni po dobu 5 minut, znovu ochlazena a použita.

Tím se odstraní absorbovaný kyslík a vrátí se médium do původní barvy. Tento postup lze provést pouze jednou.

- Pro zlepšení růstu aerobních bakterií inkubujte s mírně uvolněným víčkem. Pro správný vývoj striktních aerobů je však pro tento účel výhodné použít infuzní bujón mozkového srdce nebo sojový bujón tryptikázy.

-Měli byste se vyhnout zamrznutí média nebo přehřátí, protože obě podmínky médium poškozují.

- Přímé světlo poškozuje kultivační médium, musí být skladováno chráněné před světlem.

Reference

1. Britannia Laboratories. Thioglykolát USP s indikátorem. 2015.K dispozici na: labBritania.com.
2. Laboratoře Chios Sas. 2019. Tioglykolátový vývar. K dispozici na adrese: quios.com.co
3. Laboratoře BD tekuté thioglykolátové médium (FTM). 2003. K dispozici na adrese: bd.com/Europe
4. Média BBL připravená v zkumavkách pro kultivaci anaerobních mikroorganismů. Thioglykolátová média. 2013. K dispozici na adrese: bd.com
5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey a Scott Mikrobiologická diagnostika. 12 ed. Editorial Panamericana SA Argentina.