STŘEDNÍ SIM: ZALOŽENÍ, PŘÍPRAVA A POUŽITÍ - BIOLOGIE - 2025

SIM médium je polotuhé a rozdíl agar, speciálně navržen tak, aby pomoc identifikovat některé bakterie, zejména Enterobacteriaceae. Skládá se z tripteinu, peptonu, síranu železa, síranu amonného, ​​thiosíranu sodného a agaru.

Toto médium umožňuje provádění tří důležitých testů: produkci sirovodíku (H ₂ S), tvorbu indolu a motility, a proto je zkratka SIM. Vzhledem k jeho velkému užitku nemůže být přítomen v bakteriologické laboratoři.

A. Komerční médium SIM B. Test SIM H2S (-), Indole (-) a Motility (+) a SIM H2S (+), Indole (-), Test motility (+). Zdroj: A. Fotografie pořízená autorem MSc. Marielsa Gil B. Mfloayza

Na rozdíl od jiných médií musí být polotuhá, aby byla detekovatelná pohybová kapacita některých bakterií. V tomto smyslu tento test funguje velmi dobře pro Enterobacteriaceae, ale ne u nefermentujících gramnegativních tyčinek, kde jsou preferovány jiné metody, jako je visící kapka.

Médium SIM umožňuje rozlišovat určité specifické vlastnosti, které charakterizují některé bakterie ve vztahu k jiným. Například, Escherichia coli se vyznačuje tím, že je H ₂ S (-), indolu (+) a motility (+), zatímco Próteus mirabilis je H ₂ S (+), indol (-), motilita (+).

Základ

Je to kultivační médium, které je považováno za rozdílné, protože jeho použití rozlišuje mezi mikroorganismy, které jsou schopné produkovat sirovodík, a těmi, které ho nemají; zdůrazňuje také ty, které tvoří indol od tryptofanu od těch, které tak nečiní, a konečně odlišuje pohyblivé bakterie od imobilních.

Zdroj energie

Jako každé kultivační médium má prvky, které poskytují potřebné živiny, aby se mohly vyvinout nenáročné mikroorganismy. Tyto prvky jsou reprezentovány peptony a tripteinem.

Vývoj mikroorganismu v médiu je nezbytný, aby bylo možné pozorovat přítomnost nebo nepřítomnost charakteristik, které toto médium hodnotí.

Výroba sirovodíku

Písmeno S v SIM zkratka se vztahuje k produkci sirovodíku (H ₂ S). Bakterie schopné tvořit sirovodík pohlcují síru z thiosíranu sodného.

Jakmile je H ₂ je vytvořena S -colourless plynem, reaguje s přítomností soli železa v médiu, které tvoří železný sulfid, jasně viditelné (černé sraženiny). Bakterie, které se tvoří H ₂ S, opustí médium původní barvy (béžový).

Přítomnost černé sraženiny může bránit interpretaci pohyblivosti. Nicméně, většina H ₂ S- produkující Enterobacteriaceae, je známo, že pozitivně pohyblivé, jako je Salmonella, Proteus a Citrobacter. Kromě toho černá sraženina, která pokrývá téměř celé médium, naznačuje pozitivní pohyblivost.

Indolová formace

Druhým písmenem zkratky SIM je „I“, což představuje vytvoření indolu.

V tomto smyslu plní triptein kromě toho, že je zdrojem živin, další základní funkci. Tento pepton je bohatý na aminokyselinu zvanou tryptofan, proto může vykazovat bakterie, které produkují tryptofanázu.

Tento enzym je zodpovědný za štěpení aminokyseliny tryptofanu s následnou tvorbou indolu (bezbarvá látka), kyseliny pyruvové a amonia.

Proto je pro prokázání této reakce nutné přidat odhalující látku (Ehrlichovo činidlo nebo Kovacovo činidlo). Buď reaguje s indolem a vytváří na povrchu agaru látku ve tvaru červeného fuchsie. Pokud se objeví fuchsiový kruh, indolový test se interpretuje jako pozitivní.

Bakterie, které tento enzym nemají, nebudou tvořit kruh a jsou interpretovány jako negativní indolový test.

Je důležité si uvědomit, že indolový test by měl být interpretován jako poslední, protože jakmile je přidáno činidlo, médium se zakalí, což ztěžuje vizualizaci pohyblivosti.

Pohyblivost

Konečně písmeno „M“ slova SIM znamená pohyblivost. Aby se vyhodnotila pohyblivost, je toto médium strategicky polotuhé, protože tato vlastnost je nezbytná pro to, aby bylo možné pozorovat, zda dochází k bakteriálnímu pohybu. Bakterie, které mají bičíky, jsou ty, které dávají tento pozitivní test.

Pozitivní test bude patrný, když je pozorována zákal, jak v počátečním inokulu, tak kolem něj. Zatímco nemotilní bakterie se vyvíjejí pouze na cestě počátečního inokula.

Příprava

Střední SIM

Naváží se 30 g dehydratovaného média a rozpustí se v litru destilované vody. Směs se nechá stát po dobu 5 minut a poté se zahřívá k varu, za stálého míchání, dokud se úplně nerozpustí.

Směs se rozdělí do zkumavek s vatovými uzávěry a v autoklávu při 121 ° C po dobu 15 minut. Vyjměte stojan na zkumavky z autoklávu a nechte jej ztuhnout ve svislé poloze tak, aby médium mělo tvar bloku.

Pro jeho uchování je uchováván v chladničce až do jeho použití. Připravené médium musí mít konečné pH 7,3 ± 0,2.

V době inokulace média musí být médium při pokojové teplotě. Střední barva je béžová.

Kovacovo činidlo

Změří se 150 ml amylu nebo isoamylu nebo butylalkoholu. (Použijte jednu ze tří uvedených).

10 g p-dimethylaminobenzaldehydu se rozpustí. Potom se pomalu přidá 50 ml koncentrované kyseliny chlorovodíkové.

Připraveno k použití je bezbarvé nebo světle žluté. Měl by být uchováván v jantarové láhvi a uchováván v chladničce. Nepoužívejte, pokud je tmavě hnědá; to znamená, že je poškozen. Toto činidlo je výhodné, pokud jde o Enterobacteriaceae.

Erlichovo činidlo

Naváží se 2 g p-dimethylaminobenzaldehydu a rozpustí se ve 190 ml absolutního ethylalkoholu a pomalu se smíchá se 40 ml koncentrované kyseliny chlorovodíkové. Stejným způsobem skladujte Kovacovo činidlo. Ehrlichovo činidlo se používá nejčastěji pro nefermentující a anaerobní bakterie.

Aplikace

Médium SIM se v bakteriologických laboratořích velmi používá. Jeho výhodou je, že při identifikaci Enterobacteriaceae lze ve stejné zkumavce pozorovat tři základní vlastnosti.

Zaseté

Správným způsobem zasetí tohoto média je použití jehly, kterou je odebrána část čisté kolonie, která má být studována, a vertikálně vložena do středu média. Měl by se provést jeden výpad. Proražení by nemělo dosáhnout dna zkumavky, správné je pokrýt pouze dvě třetiny hloubky.

Opakování inokula se nedoporučuje, protože to může vést k falešným interpretacím pozitivní motility. Inokulované médium se inkubuje aerobně při 37 ° C po dobu 24 hodin.

Jakmile je čas k závěru, sleduje se, zda byl či nebyl výroba H ₂ S a motility je číst. Nakonec se odhalí indol přidáním 3 až 4 kapek Ehrlichova nebo Kovacova činidla, jemně promíchejte a interpretujte.

Zdroj: Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologická diagnostika. 5. ed. Editorial Panamericana SA Argentina.

QA

Jako kontrola sterility se jedna nebo dvě zkumavky inkubují bez inokulace v peci při 37 ° C po dobu 24 hodin. Očekává se, že po této době nedochází k růstu ani změně barvy.

Jako kontrola kvality lze použít známé certifikované kmeny, jako například: Escherichia coli ATCC 25922, Enterobacter aerogenes ATCC 13048, Klebsiella pneumoniae ATCC 13883, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Shigella sonnei ATCC 29930, Proteus vulgaris ATCC 13315.

Očekávané výsledky jsou: Escherichia coli H ₂ S negativní, indolová a pozitivní motilita, Enterobacter aerogenes pouze pozitivní motilita, Salmonella typhimurium H ₂ S a pozitivní motilita, se záporným indolem. Proteus vulgaris je pozitivní, zatímco Klebsiella pneumoniae a Shigella jsou negativní.

Omezení

- Některé kmeny Morganella morganii mohou, mimo jiné, v tomto médiu produkovat nahnědlý pigment v důsledku produkce melaninu, nemělo by to být zaměňováno s precipitátem sulfidu železnatého. V nezkušených odborníky tato situace může generovat falešně pozitivní výsledky v interpretaci H ₂ S testem.

-Striktní aerobní bakterie porostou pouze na povrchu zkumavky, což ztěžuje interpretaci pohyblivosti.

Reference

1. Laboratoře BD. BBL SIM Medium. 2008. K dispozici na adrese: bd.com
2. Neogen Laboratories. SIM Střední. K dispozici na adrese: foodafety
3. Difco Francisco Soria Melguizo. SIM Střední. 2009. K dispozici na adrese:
4. Laboratoř Brizuela-Lab. Střední SIM. K dispozici na adrese:.brizuela-lab.com
5. Britannia Laboratories. Střední SIM. 2015.Dostupné na: studyres.es/doc
6. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologická diagnostika. 5. ed. Editorial Panamericana SA Argentina.