STUART MEDIUM: ZALOŽENÍ, PŘÍPRAVA A POUŽITÍ - BIOLOGIE - 2025

Médium Stuart je polotuhý agaru nebo bujónu bez živin, použitý pro transport biologických vzorků. Jeho účelem je udržet kmeny přítomné ve vzorku životaschopné po určitou dobu, ale bez zvýšení mikrobiální populace.

Byl vytvořen Moffetem, Youngem a Stuartem v roce 1948 a později modifikován Toshachem a Patsulaem. Skládá se z glycerofosfátu sodného, ​​thioglykolátu sodného, ​​chloridu vápenatého a agaru. Ten je přítomen v polotuhém médiu a v kapalině chybí. Některé laboratoře k tomu přidávají methylenovou modrou.

Kultureta s transportem Stuart. Zdroj: Autor: CDC / Dr. Gilda Jones, se svolením: Knihovna obrazů veřejného zdraví

Obvykle se používají, když není možné zasít vzorek okamžitě. V tomto případě je vzorek umístěn do transportního média, zatímco je přenesen do laboratoře, která kultivuje.

Tímto způsobem je zaručeno, že přítomné mikroorganismy zůstávají naživu, dokud nejsou inokulovány v odpovídajícím kultivačním médiu.

Původně bylo jeho použití určeno k přepravě vzorků uretry nebo vaginálních vzorků, u nichž byla podezření na přítomnost Neisseria gonorrhoeae. Později si uvědomili, že jeho užitečnost může být širší.

Stuartovo médium bylo mimo jiné velmi účinné při ochraně labilních a náročných mikroorganismů, jako jsou Neisseria meningitidis, Haemophilus influenzae, Streptococcus pyogenes, Streptococcus pneumoniae, Corynebacterium diphteriae, Bordetella pertusis. Kromě jiných nepříjemných mikroorganismů, jako je Enterobacteria.

Stuartovo médium v ​​zásadě zabraňuje vysychání vzorku, udržuje osmotickou rovnováhu a udržuje mikroorganismy v ideálním pH. Na druhé straně strategicky toto médium neobsahuje živiny, čímž zabraňuje množení mikroorganismů.

Na trhu existují speciální vzorová přepravní zařízení, která obsahují tento nebo jiný dopravní prostředek, nazývaný kultura. Mohou být také připraveny v laboratoři.

Základ

Účelem Stuartova způsobu dopravy je udržovat vzorky tak blízko původního stavu, dokud nejsou zpracovány.

Glycerofosforečnan sodný a chlorid vápenatý je pufrový systém, který pracuje tak, že udržuje pH a osmolaritu.

Mezitím thioglykolát sodný působí jako redukční činidlo a v případě, že obsahuje agar, dává mu polotuhou konzistenci, čímž se zpožďuje okysličování média. Nakonec je methylenová modrá indikátorem oxidace, to znamená, že detekuje přítomnost kyslíku.

Polotuhé médium s redoxním indikátorem je ideální pro přepravu vzorků, u nichž existuje podezření na přítomnost anaerobních bakterií.

Vlastnosti dopravního prostředku

Médium Stuart, stejně jako všechny dopravní prostředky, splňuje určité vlastnosti, včetně:

- Zachovává životaschopné mikrobiální kmeny bez množení.

- Neobsahuje živiny; Jeho sloučeniny jsou zaměřeny na udržování hydratovaného vzorku za odpovídajících podmínek pH a osmolarity.

-Inhibuje autolyzát některých jemných mikroorganismů, jako je Pneumococcus.

-Jeho použití je dočasné, nemělo by být prodlouženo příliš dlouho.

Příprava

Polotuhé Stuartovo médium s redoxním indikátorem

Domácí příprava

Ingredience

Glycerofosfát sodný 10 g

Thioglykolát sodný 1,0 g

Chlorid vápenatý 0,1 g

Methylenová modrá 0,002 g

Agar-agar 3 gr

Destilovaná voda 1 l

Míchejte složky a zahřívejte, dokud se úplně nerozpustí. Nalijte do zkumavek nebo speciálních tamponů. Zavedou se do autoklávu a sterilizují se při 121 ° C po dobu 15 minut. Trubky nechte vychladnout ve svislé poloze (ve tvaru bloku). Uchovávejte při pokojové teplotě.

Příprava komerčním médiem

Naváží se 14,1 g média v 1 litru destilované vody. Teplo se třepe, dokud se úplně nerozpustí, lze jej vařit. Zbytek postupu, jak již bylo popsáno.

Dehydratované médium je krémově zbarvené a připravené by mělo být na jeho povrchu modré. Důvodem je přítomnost methylenové modři.

PH média musí být upraveno na 7,4 ± 0,2

Liquid Modified Stuart Medium (domácí)

Ingredience

Glycerofosfát sodný 10 g

Thioglykolát sodný 1 g

Dihydrát chloridu vápenatého 0,1 g

Destilovaná voda 1000 ml

Má stejné složky jako polotuhá látka, ale nemá agar ani methylenovou modrou. V tomto případě se složky smíchají bez zahřívání a 0,5 ml se rozdělí do zkumavek 16 x 125 mm se šroubovými uzávěry.

Sterilizuje se v autoklávu při 121 ° C po dobu 10 minut. Pro odběr vzorků by se měly použít dacronové výtěry, pokud je vzorek určen pro PCR nebo umělé hedvábí, je-li určen pro kultivaci.

Zkumavky se skladují při pokojové teplotě.

Aplikace

Komerčně existují speciální vzorková transportní zařízení zvaná Culturette; Toto zařízení je podlouhlá tenká trubice, která má výtěr uvnitř a na konci je segment, který obsahuje polotuhé nebo tekuté Stuartovo médium.

Zařízení se otevře a vzorek se odebere tamponem. Poté se zavede zpět do zkumavky, dokud se špička tamponu nevloží do polotuhého transportního média; Někteří přinášejí polyuretanovou houbu napuštěnou tekutým Stuartovým médiem, se kterým se vzorek udržuje, když je udržován vlhký.

V případě podezření na přítomnost choulostivých mikroorganismů je třeba ke sběru vzorku použít bavlněné tampóny s uhlím.

Vzorky, které lze odebírat pomocí výtěrů nebo výtěrů a přenášet se v tomto médiu, jsou faryngeální exsudáty, rektální výtěry a různé sekrety, včetně: vaginální, uretrální, rány, oční, ušní a absces.

Během přenosu vzorku v transportním médiu do laboratoře je třeba se vyvarovat vystavení média extrémním podmínkám prostředí (příliš chladným nebo příliš horkým). Rovněž je třeba se vyhnout náhlým změnám atmosférického tlaku.

Čas, ve kterém je médium schopné udržovat životaschopný mikroorganismus, bude záviset na příslušném kmeni. Například pro mikroorganismy rodu Neisserias a Haemophilus mohou zůstat životaschopné po dobu až 24 hodin, ale kmeny, jako je Salmonella nebo Shigella, mohou trvat dny a dokonce týdny.

Pokud se odhaduje, že zpracování vzorku může trvat déle než 4 dny, je výhodné vzorek zmrazit při -70 ° C.

Identifikace vzorku v dopravním prostředku

Připravený dopravní prostředek nebo komerční kultivar musí mít štítek, na kterém budou umístěny následující informace:

Jméno a příjmení pacienta: vyhýbá se záměně vzorků.

Identifikační číslo: je vhodné udržovat objednávku v práci.

Zdroj sběru vzorků: pomáhá bakteriologovi při výběru vhodného kultivačního média.

Ošetřující lékař: Někdy je nutné provést případné konzultace.

Datum a čas odběru vzorku: je nezbytné pro přijetí nebo odmítnutí vzorku podle času, který uplynul mezi odběrem vzorku a přijetím do laboratoře.

Další informace, které by bylo velmi užitečné přiložit, jsou:

Předpokládaná diagnóza: řídí přidávání speciálních kultivačních médií podle podezření na diagnózu.

Antibiotická léčba: je užitečné být přiložen k antibiogramu.

Všechny tyto informace jsou nezbytné pro zajištění správného zpracování vzorků.

QA

Pro vyhodnocení účinnosti Stuartova média mohou být známé kmeny naočkovány a udržovány při 25 ° C, jako například: Bordetella pertussis ATCC 9340, Haemophilus influenzae ATCC 19418, Neisseria gonorrhoeae ATCC 19904, Neisseria meningitidis ATCC 13090, Streptococcus pneumoniae ATCC 6301.

Ve všech případech se očekává, že obnoví dotyčný mikroorganismus uchovaný po dobu 24 hodin.

Na druhé straně mohou být použity jiné kmeny, jako například: Shigella flexneri ATCC 12022, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Streptococcus pyogenes ATCC 12344, Enterococcus faecalis ATCC 33186, Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 a Escherichia coli ATCC 11775.

Ve všech případech se očekává hojné zotavení až 96 hodin.

Omezení

Některé studie zajišťují, že glycerofosfát přítomný v Stuartově médiu může být metabolizován některými koliformami, mimo jiné gramnegativními bakteriemi, a proto se v tomto médiu množí.

Toto riziko zvyšuje, čím déle je zpracování vzorku zpožděno. Rovněž to ovlivňuje vystavení Stuartova média vysokým teplotám během transportu.

Reference

1. "Transportní médium (mikrobiologie)." Wikipedia, encyklopedie zdarma. 13. dubna 2018, 10:36 UTC. 1. dubna 2019. K dispozici na adrese: es.wikipedia.org
2. Microkit Laboratories: Culture Media. Stuart Transport. K dispozici na: K dispozici na: Medioscultivo.com
3. LabLisan. Stuartův dopravní prostředek. K dispozici na adrese: lablinsan.cl
4. Vědecké MDM. Výhody mikrobiologického transportního média Stuart. K dispozici na adrese: mdmcientifica.com
5. Metrix Laboratories. Stuart. 2017. K dispozici na adrese: metrixlab.mx
6. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey a Scott Mikrobiologická diagnostika. 12 ed. Editorial Panamericana SA Argentina.
7. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologická diagnostika. 5. ed. Editorial Panamericana SA Argentina.