KŘÍŽOVÉ TESTY: PRO CO JSOU, TECHNIKA, ZDŮVODNĚNÍ, FÁZE - LÉK

Křížová zkouška řada laboratorní studie se provádějí za účelem zjištění, zda krevní produkty od dárce (převážně celé krve a baleny kulové) jsou kompatibilní s krví příjemce.

Jedná se o doplňkový test kompatibility ABO a faktoru Rh. Důvodem křížového párování je to, že někdy mohou mít dva jedinci (dárce-příjemce) stejnou ABO a Rh skupinu, ale jejich krev je stále nekompatibilní.

Zdroj: unsplash.com

Taková nekompatibilita je způsobena přítomností protilátek proti řadě bílkovin červených krvinek známých jako malé antigeny. Tyto antigeny nejsou rutinně testovány, protože jsou určeny pro krevní skupinu (ABO) a Rh faktor.

Důvodem je to, že vedlejší antigeny jsou mnohem méně časté a mají variabilní expresi u každého jednotlivce, proto je prakticky nemožné je seskupit do kategorií, jako je tomu u skupiny a faktoru Rh.

Místo toho jsou dárcovské červené krvinky smíchány s pacientovým sérem (test hlavní shody) a červené krvinky pacienta s dárcovským sérem (test menší shody), aby se detekovala přítomnost reakcí antigen-protilátka.

Pokud existují protilátky proti menším antigenům, buď v pacientově nebo dárcovském séru, je test považován za pozitivní, takže ve většině případů nemůže být konkrétní jednotka krve transfuzována.

Skupina ABO

Abyste plně pochopili, o jakých křížových reakcích jde, musíte nejprve znát základy krevních skupin.

V tomto smyslu je nejdůležitější vědět, že krev lze rozdělit do čtyř skupin: A, B, AB a O.

Každá z těchto skupin exprimuje na povrchu červených krvinek konkrétní protein (antigen), který je identifikován jako cizí prvek protilátkami potenciálního receptoru jiné skupiny.

Nejvýraznější věc, o reakcích antigen-protilátka při porovnávání krve, je, že pro existenci protilátek není nutná předchozí expozice antigenu. Toto je známé jako přirozené protilátky.

Přírodní protilátky

Obecně, aby protilátky existovaly v těle jedince, je nutné, aby byly bílé krvinky jedince předem vystaveny antigenu.

To znamená, že při prvním kontaktu mezi cizím antigenem a organismem neexistují žádné protilátky, protože jsou vytvářeny později, po počátečním kontaktu. Je proto nemožné, aby imunitní systém měl protilátky proti například určitému viru, pokud mu v minulosti nebyl vystaven.

Jedinou výjimkou z výše uvedeného jsou antigeny anti-AB. V těchto případech má osoba protilátky proti antigenu, které jejich červené krvinky nemají, přestože nikdy nebyly v kontaktu s červenými krvinkami jiné osoby. Toto je známé jako přirozené protilátky.

Antigeny a protilátky související s krevními skupinami

Krevní skupiny se v případě systému ABO určují přítomností specifických antigenů (A nebo B) na membráně červených krvinek a naopak protilátek proti chybějícímu antigenu na membráně erytrocytů.

Osoba s krevní skupinou A tedy exprimuje antigen A na povrchu svých červených krvinek, zatímco v séru jsou protilátky anti-B.

Naopak u pacientů skupiny B je antigen B nalezen, zatímco protilátky jsou anti-A.

Pacienti s AB krví však mají antigeny A i B. Proto neexistují žádné protilátky, protože by to zničilo červené krvinky této osoby.

Naopak opak se vyskytuje ve skupině O, kde membrána erytrocytů nepředstavuje žádný ze dvou antigenů (ani A ani B), zatímco v séru jsou protilátky anti-A a anti-B.

Neslučitelnost skupiny ABO

Z výše uvedeného lze snadno odvodit kompatibilitu krevních skupin ABO, protože díky znalosti antigenu membrány erytrocytů jsou protilátky v séru automaticky známy. Aby:

- Krev A je kompatibilní se skupinou A a skupinou O.

- Krevní skupina B je kompatibilní s krví B a O.

- Lidé se skupinou O mohou přijímat pouze krev O (protože mají protilátky anti-A a anti-B), ačkoli jejich krev je přijímána všemi ostatními skupinami bez problémů, protože jí chybí antigeny.

- Konečně. ti, kteří mají krevní skupinu AB, mohou přijímat krev ze všech ostatních skupin (A, B, O a samozřejmě AB), protože nemají protilátky proti žádnému z antigenů. Krev AB však mohou přijímat pouze lidé ve skupině AB, protože všechny ostatní skupiny mají protilátky, které by tyto červené krvinky zničily.

Menší antigeny

Stejně jako u skupin ABO lze na povrchu erytrocytů nalézt řadu proteinů, které fungují jako antigeny stejným způsobem jako antigeny skupiny ABO.

Tyto antigeny však nejsou přítomny u všech jedinců. Jejich kombinace je heterogenní a penetrace (úroveň exprese proteinu) je variabilní, proto není možné klasifikovat do skupin, jako je ta, která existuje pro ABO a Rh. To je místo, kde odvozuje své jméno od „menších antigenů“, také známých jako „antigeny s nízkým výskytem“.

I když nejsou časté, mohou existovat přirozené protilátky proti menším antigenům. Mezi nimi nejčastěji patří Lewis, MNS, anti N, Kell, Duffy, anti Fyb a Kidd. Všichni jsou zodpovědní za velmi závažné hemolytické a post-transfuzní reakce.

Kromě toho může dojít k senzibilizaci na menší antigeny předchozím kontaktem, buď s uvedenými antigenními proteiny v důsledku předchozích transfuzí, nebo v důsledku křížové imunity.

Cross imunita

Říká se, že dochází ke zkřížené imunitě, když jsou dva antigeny ze dvou různých zdrojů (například červené krvinky a bakterie) velmi podobné, do té míry, že protilátky proti jednomu z těchto antigenních proteinů také reagují s ostatními, protože jsou téměř totožné.

Abychom to lépe pochopili, vezměte si předchozí hypotetický příklad (antigeny z červených krvinek a bakterií). V žádném případě neexistují přirozené protilátky, ale pokud je osoba vystavena bakteriím, vytvoří proti ní protilátky.

Takové protilátky budou později reagovat proti červených krvinek, pokud jsou jejich antigeny velmi podobné antigenům bakterií, které vyvolaly tvorbu protilátek.

Pokud k tomu dojde, červené krvinky s tímto konkrétním antigenním proteinem nemohou být podány osobě, která má protilátky, protože by došlo k odmítnutí. Zde leží význam zkřížených reakcí.

K čemu slouží křížení?

Protože je nemožné seskupit krev různých jedinců na základě menších antigenů, jediným způsobem, jak zjistit, zda existují protilátky proti menším antigenům červených krvinek jiné osoby v krvi jedné osoby, je křížení..

V případech, kdy jsou přítomny protilátky, je spuštěna hemolýza nebo aglutinační reakce, a proto se dochází k závěru, že reakce byla pozitivní; to znamená, že existují protilátky proti menším antigenům (ačkoli není přesně známo, které). Jinak je test negativní.

Základ

Křížové zápasy jsou založeny na reakci antigen-protilátka. S nimi je tedy možné zjistit, zda v séru příjemce existují protilátky proti antigenům červených krvinek dárce (nebo naopak), což vyvolává reakci antigen-protilátka.

Pokud neexistují žádné protilátky, nedochází k žádné reakci a test je hlášen jako negativní. Naopak, pokud je reakce pozitivní (během testu dochází k hemolýze nebo aglutinaci), lze dojít k závěru, že jsou přítomny protilátky.

V tomto ohledu je důležité poznamenat, že mohou existovat protilátky proti erytrocytům v dárcovském i recipientním séru. Z tohoto důvodu existují dva typy zkřížených reakcí.

Druhy zkřížených reakcí

Protilátky proti dárcovským erytrocytům mohou existovat v pacientově séru; ale může se také vyskytnout opak, tj. protilátky v séru dárce proti červeným krvinkám pacienta.

To je důvod, proč existují dva typy křížového křížku:

- Velký křížový kříž.

- Menší křížový kříž.

Oba typy jsou prováděny rutinně v krevní bance před transfuzí krevních produktů, protože pokud jsou některé z testů pozitivní, existuje vysoké riziko transfuzních reakcí, které mohou ohrozit život pacienta.

Major crossmatch

Tento test hodnotí, zda sérum příjemce obsahuje protilátky proti dárcovým erytrocytům.

Pokud k tomu dojde, nelze krevní produkty podat, protože velké množství protilátek přítomných v plazmě pacienta velmi rychle zničí červené krvinky dárce a způsobí v tomto procesu katastrofické reakce v těle příjemce. Tyto reakce jsou tak závažné, že mohou být život ohrožující.

Menší křížový kříž

V tomto případě se stanoví, zda existují protilátky proti erytrocytům příjemce v séru dárce.

Pokud ano, protilátky začnou ničit erytrocyty příjemce. Avšak vzhledem k tomu, že množství protilátek je omezené, je reakce méně intenzivní; i když je to stále nebezpečné.

Fáze

Hlavní a vedlejší křížový kříž jsou rozděleny do tří fází:

- Saline.

- Tepelné nebo inkubační.

- Coombs.

V první fázi se červené krvinky a sérum smísí ve fyziologickém roztoku. Následně se přidá albumin a vzorek se inkubuje při 37 ° C po dobu 30 minut, aby se nakonec pokračovalo ve fázi coombs.

Technika

Technika křížového křížení je poměrně přímá, protože zahrnuje přidání červených krvinek dárce do séra pacienta (hlavní křížový kříž) a také přijímající erytrocyty do séra dárce (menší křížový kříž).

Aby se vyvolala reakce antigen-protilátka v relativně krátké době, musí být provedena řada standardizovaných kroků. Tyto kroky jsou shrnuty zjednodušeným způsobem níže.

Je důležité si uvědomit, že v následující části je popsán hlavní test kompatibility, i když kroky jsou stejné pro test menší kompatibility, ale výměna původu červených krvinek a séra.

Solná fáze

- Přidejte do zkumavky 2 kapky séra od příjemce (od dárce, pokud se jedná o menší křížový kříž).

- Odebrat vzorek červených krvinek od dárce (od příjemce, pokud se jedná o menší křížový kříž).

- Omyjte a odstřeďte červené krvinky.

- Resuspendujte v roztoku mezi 3% a 5%.

- Vložte kapku tohoto roztoku do zkumavky obsahující sérum příjemce.

- Jemně promíchejte.

- Odstředivka.

- Přečtěte výsledek v kontrolce displeje.

Tepelná fáze

- Do zkumavky, kde byla dokončena solná fáze, přidejte 2 kapky 22% albuminu.

- Inkubujte při 37 ° C po dobu 30 minut.

- Centrifugujte po dobu 15 sekund.

- Přečtěte výsledek v kontrolce displeje.

Coombsova fáze

- Vyjměte buňky z tuby a omyjte je fyziologickým roztokem.

- Odstraňte supernatant.

- Přidejte dvě kapky Coombsova činidla.