Rose Bengal je laboratorní test založený na reakci antigen-protilátka pro diagnostiku brucelózy. Tato technika umožňuje detekci specifických protilátek proti bakterii Brucella abortus ve vzorcích lidského séra. Výsledek lze vykazovat kvalitativně nebo semikvantitativně.
Kvalitativní forma vyjadřuje, zda je pacient pro test pozitivní nebo negativní, tj. Zda existují protilátky. Mezitímní zpráva je mezitím uvedena v IU / ml a ukazuje přibližné množství přítomných protilátek. Je třeba poznamenat, že protilátky budou produkovány pouze tehdy, pokud byl pacient v kontaktu s mikroorganismy.
Rose Bengalova reakce na aglutinační desce. Zdroj: převzato z videa
Vzhledem ke své velké jednoduchosti, vysoké citlivosti a specifičnosti je to jedna ze séroaglutinačních technik používaných v medicíně jako počáteční test pro diagnostiku tohoto onemocnění.
Někteří vědci srovnali účinnost testu Rose Bengal s jinými technikami, jako je seroaglutinace (febrilní antigeny) a pozorovali, že ačkoli existuje dobrá korelace, viděli izolované případy, ve kterých byl test febrilního antigenu negativní a Rose de Pozitivní erupce.
Získaný rozdíl byl způsoben skutečností, že tito pacienti měli podtřídu IgG protilátek proti Brucella abortus s lepší vazebnou kapacitou při kyselém pH, a proto mohli reagovat s činidlem Rose Bengal, ale nikoli s reakcí febrilních antigenů.
V tomto smyslu navrhli, aby byla činidla febrilního antigenu modifikována na kyselé pH, takže mohou detekovat tento typ případu.
Základ
Rose Bengal Reagent se skládá z antigenní suspenze. Je složen z kmene S99 Brucella abortus, zředěného v kyselém laktátovém pufru (pH 3,6), plus fenolu a barviva Rose Bengal.
Proto ve vzorku, které jsou hledány, jsou anti-Brucella protilátky, pokud jsou přítomny, budou reagovat s antigenem činidla a bude pozorována makroskopicky viditelná aglutinační reakce. Test detekuje protilátky IgM nebo IgG.
To znamená, že dokáže detekovat onemocnění jak v jeho akutním stadiu, kde převládají IgM protilátky, tak v jeho chronickém stadiu, kde převládají IgG protilátky.
To představuje výhodu, protože zvyšuje senzitivitu testu, ale současně je to nevýhoda, protože nediskriminuje jeden stupeň a druhý, protože reakce s protilátkami IgM a IgG jsou identické.
Zkouška musí být vždy provedena společně s negativní kontrolou a pozitivní kontrolou. Negativní kontrola obsahuje zvířecí sérum bez protilátek a pozitivní kontrola obsahuje sérum živočišného původu s 50 IU / ml anti-Brucella protilátek.
Použití
Brucelóza je závažné onemocnění, které má tendenci být chronické a nebezpečné, takže je velmi důležité, aby byla diagnostikována brzy. Je to zoonóza a lidé se mohou nakazit přímým kontaktem s kontaminovaným materiálem, přičemž nejzranitelnějšími lidmi jsou veterináři a ošetřovatelé zvířat.
K infekci může dojít také konzumací infikovaného syrového masa, mimo jiné formy infekce.
Toto onemocnění útočí lokálně nebo systémově. Systémová forma je nejzávažnější, protože mohou být ovlivněny různé orgány, včetně endoteliálního systému retikula (játra, slezina, kostní dřeň), kůže (celulitida a lymfadenopatie), respirační systém (pneumonie), muskuloskeletální systém (artritida, sakroiliitida a spondylitida), mimo jiné.
Test Rose Bengal je velmi užitečnou technikou pro provedení počátečního screeningu, protože je velmi levný, snadno použitelný a má velkou specifičnost a citlivost.
Případy falešných negativů a falešně pozitivních výsledků jsou velmi vzácné a mohou se vyskytnout u lidí s velmi nízkými titry protilátek (<25 IU / ml) nebo extrémně vysokými (> 1000 IU / ml).
Proces
materiály
-Vyberte bengálskou soupravu
-Agglutinační deska bílé pozadí
-50 µl pipeta
-Rotátor (volitelné)
-Vír
Technika (kvalitativní metoda)
Komerční soupravy Rose Bengal jsou dodávány s reagenciemi připravenými k použití.
- Reagencie před zahájením práce nechte působit.
- Aglutinační destičky mají nakreslené kruhy, každý pro jiný vzorek. Použijte 3 kruhy, první pro negativní kontrolu, druhý pro vzorek a třetí pro pozitivní kontrolu.
- Vložte kapku nebo 50 µl kontrol a vzorku do odpovídajícího kruhu.
-Míchejte reagent Rose Bengal pomocí víru. Umístěte kapku vedle dříve umístěných.
-Mix s dřevěnými párátky (použijte jeden pro každý vzorek nebo kontrolu). Proveďte kruhové pohyby a rozprostřete se tak, abyste pokryli celý kruh.
Zdroj: obrázky pořízené z videa: https://youtu.be/igAVQ-GiyGY. Upravené rozložení obrázku.
- Nasaďte desku na automatický rotátor rychlostí 80 až 100 ot / min nebo ručně otáčejte po dobu 4 minut. Na konci této doby si přečtěte důkaz.
- Ověřte, že ovládací prvky dávaly podle očekávání. Porovnejte reakci zkušebního vzorku s kontrolami. Uveďte jako pozitivní, pokud je pozorována aglutinace, a jako negativní, pokud nedochází k aglutinaci.
Pozitivní test ukazuje, že pacient má množství rovnající se nebo větší než 25 IU / ml anti-Brucella protilátek.
Interpretace pozitivní (aglutinační) a negativní (aglutinační) reakce. Zdroj: Citrulline. Upravený obrázek.
Technika (semikvantitativní)
Pokud je v kvalitativní reakci vzorek silně pozitivní, může být semikvantifikován. Za tímto účelem se sériová dvojitá ředění vzorku provádí fyziologickým roztokem. Výše popsaný postup se provádí s každým ředěním.
Interpretuje se také makroskopickým pozorováním aglutinace. Výsledkem bude titr nejvyššího ředění, ve kterém byl pozorován pozitivní výsledek.
Pro výpočet přibližné hodnoty anti-Brucella protilátek se používá následující vzorec:
25 IU / ml x reakční titr = IU / ml
Příklad: pokud pacient v semikvantitativních testech testuje pozitivní na ředění ½, ¼ a 1/8 a začíná být negativní od ředění 1/16, znamená to, že pacient má titr 8.
Použití vzorce:
25 IU / ml x 8 = 200 IU / ml
QA
- Soupravy mají datum expirace a musí být respektovány. Nemělo by se používat, pokud platnost činidla vypršela.
- Během používání se ujistěte, že činidlo neobsahuje pevné částice, protože to je známkou zhoršení kvality.
-Keepujte mezi 2 a 8 ° C
- Nezmrazujte, tento čin nenávratně poškodí činidlo.
-Vždy proveďte test společně s negativními a pozitivními kontrolami.
- Technika toleruje vzorky séra s určitým stupněm lipémie a hemolýzy, nedoporučuje se však používat nadměrně lipemická a hemolyzovaná séra, obě podmínky mění výsledky testu.
- Před zahájením analýzy vždy nechejte reagencie zahřát na pokojovou teplotu.
- Nevykládejte reakce, které trvají déle, než je doporučená doba, protože to generuje zprávu o falešně pozitivních výsledcích, protože po určité době se precipitát vysráží a simuluje pozitivní reakci.
- Technika je 100% citlivá a má specifičnost 98%.
- Po semikvantifikaci 1000 IU / ml je možné pozorovat prozónový efekt (falešně negativní kvůli nadbytku protilátky ve srovnání s množstvím antigenů).
Reference
- Rubio M, Barrio B a Díaz R. Hodnota testů Rosa de Bengala, Coombs a counter-imunoelektroforéza k diagnostice případů brucelózy u člověka, u nichž je sérová aglutinace negativní. Oddělení mikrobiologie. Klinická mikrobiologická služba. Univerzitní klinika. University of Navarra. 406-407. K dispozici na adrese: elsevier.es/es-revista-enfermedades-infecciosas
- "Brucelóza." Wikipedia, encyklopedie zdarma. 6. prosince 2019, 14:37 UTC. 18. prosince 2019, 18:09 en.wikipedia.org.
- Monlab Laboratories. Monlab Bengal Rose - test. 2016. K dispozici na adrese: monlab.es/
- Carrillo C, Gotuzzo E. Brucellosis. Rev. Peru. Med. Exp. Veřejné zdraví 1997; 14 (1): 63-66. K dispozici na adrese: scielo.org
- Morales-García R, García-Méndez N, Regalado-Jacobo D, López-Merino A, Contreras-Rodríguez A. Sledování klinické, sérologické a polymerázové řetězové reakce rodiny s brucelózou. Rev. chil. Infectol. 2014; 31 (4): 425-433. K dispozici na adrese: scielo.conicyt.