PONORNÝ OLEJ: SLOŽENÍ, VLASTNOSTI, POUŽITÍ - BIOLOGIE - 2025

Imerzní olej je viskózní čirá kapalina s indexem lomu vysoko. Z tohoto důvodu je široce používán v mikroskopických pozorováních, protože poskytuje vlastnost soustředění světla, když prochází objektivem mikroskopu 100X, čímž zvyšuje jeho rozlišovací schopnost.

K tomu dochází v důsledku vytváření viskózního filmu mezi objektivem a nátěrem, což zabraňuje rozptylu světelných paprsků, když se dostanou do vzduchu, a soustředí se tak paprsky světla směrem ke vzorku.

Kapátko s olejovou imerzí a mikroskop zaostřený objektivem 100X pomocí olejové imerze. Zdroj: Pixabay.com

Ponorný olej se používá pouze s objektivem 100X. To je důvod, proč se objektiv 100X nazývá také cíl ponoření. Zbytek se označuje jako suché cíle. Tuto čočku nelze použít bez imerzního oleje, protože bez ní by vizualizace nebyla uspokojivá.

Hlavní funkcí imerzního oleje je poskytovat jasnější, ostřejší a přesněji definovaný obraz, který umožňuje pozorování detailů, které by u jiných čoček nebylo možné.

Prvním olejem použitým pro tento účel byl anýzový olej, používaný společně s první ponornou čočkou vytvořenou Giovanni Battista Amici. To pouze zabránilo chromatické aberaci, ale nezvýšilo numerickou aperturu systému čoček.

Poté byl použit cedrový olej, ale jeho použití mělo mnoho nevýhod. Mezi nimi byla vysoká kyselost, která krátkodobě poškodila cíle.

Následně se použily další látky, jako je voda a glycerin, dokud se nevytvořily syntetické imerzní oleje, které se postupně postupně rafinovaly, dokud nedosáhly současného imerzního oleje, což je komplexní sloučenina organických látek.

Složení imerzního oleje

Ponorný olej je tvořen směsí organických sloučenin, jako jsou: terfenyl, hydrogenovaný terfenyl, přírodní uhlovodíky a polybuteny.

Vlastnosti ponorného oleje

Imerzní olej je světle žlutá kapalina, mírně viskózní vzhledu, s charakteristickou vůní a s hustotou mezi 0,92 až 0,99 g / cm ³.

Ponorný olej není rozpustný ve vodě a má bod varu 340 ° C. Index lomu a (n 20 ° C / D): je v rozmezí 1,482 - 1,516. Mezitím je index záblesku 110 ° C a viskozita je v rozmezí 100 až 120 mPa.s.

Tento produkt musí být řádně zlikvidován, protože je ekotoxický. Jinými slovy, je škodlivé pro životní prostředí, zejména ovlivňuje vodní živočichy. Na druhé straně to dráždí pokožku a sliznice. Při požití je nefrotoxický a kardiotoxický.

Ponorný olej je stabilní při teplotě 15 až 25 ° C, což je teplota, při které musí být skladován.

Základy ponorného oleje

Při použití objektivů s větším zvětšením by měla být intenzita světla zvýšena. Mnoho světelných paprsků je však ztraceno, protože jsou rozptylovány při dosažení vzduchu (prostor mezi krycím sklíčkem a čočkou) a dokonce i některé paprsky jsou zcela odrazeny.

Ponorný olej má index lomu podobný sklu. Když se tedy olej dostane do kontaktu mezi čočkou 100X a krycím sklíčkem, světelné paprsky se koncentrují.

Koncentrované paprsky procházejí vzorkem a zaostřují obraz, tj. Zvyšují numerickou aperturu objektivu a korigují chromatické a sférické aberace.

Použití nebo aplikace

Použití imerzního oleje je zvláště nutné, pokud je třeba pozorovat obraz širším způsobem, s použitím objektivu s největším zvětšením (objektiv 100X), aby se zobrazily podrobnosti, které jsou nezbytné pro stanovení diagnózy.

Proto je široce používán v mikroskopických studiích v různých oblastech, jako jsou: histologie, cytologie, hematologie a bakteriologie. Například je užitečné pro studium charakteristik buněk a tkání pacienta.

Používá se také pro analýzu krevních nátěrů, kde chceme podrobně rozebrat charakteristiky hemoparazitů uvnitř a vně erytrocytů, jakož i v Gramových přípravcích k definování morfotintoriálních charakteristik mikroorganismů.

Obvykle se používá v fixovaných přípravcích, protože se nedoporučuje v čerstvých přípravcích. Je to proto, že povrchové napětí oleje způsobuje posun krycího sklíčka, což způsobuje posun vzorku během pozorování a zabraňuje analýze.

Na druhé straně je imerzní olej užitečný nejen v konvenční světelné mikroskopii: používá se také v mikroskopech s úplnou vnitřní reflexní fluorescencí (TIRFM) a v konfokálních fluorescenčních aplikacích.

Kroky k pozorování přípravku pomocí imerzního oleje

Chcete-li zobrazit sklíčko pod mikroskopem, sklíčko by mělo být nejprve zaostřeno objektivem s nejmenším zvětšením, obvykle 10x, s nízkou intenzitou světla.

Pak jde k objektivu 40X a světelná cesta je mírně zvětšena. Při tomto zvětšení lze provést některé analýzy, ale pro zobrazení strukturálních detailů je nutné zvětšení 100X.

Před přesunutím na objektiv 100X se na krycí sklíčko umístí kapka imerzního oleje, přesně tam, kam chcete pozorovat, a potom se věž mikroskopu pohne, aby se v preparátu našel objektiv 100x.

Intenzita světla se reguluje (zvyšuje) (pohybem kondenzátoru a otevřením clony). Pokud mikroskop používá parafokální objektivy, mělo by se dokonale zaostřit několik malých pohybů mikrometrického šroubu (dopředu nebo dozadu).

Pokud se pokusíte zaostřit přípravek přímo pomocí ponorné čočky, může být obtížné najít zaostření. Nejedná se o nemožnou akci, ale obtížnost se výrazně zvyšuje.

Péče

Pro použití ponorného oleje je třeba vzít v úvahu určité podmínky.

Když byl vyroben barevný přípravek, jako je nátěr obarvený Giemsou nebo gramem, počkejte, až nátěr zcela zaschne, než vložíte olejovou ponoření. Jinak olej spolu s vodou vytvoří micely, které neumožní vidět přípravek.

Na druhou stranu, po pozorování šarže přípravků, tj. Na konci pracovního dne, by měl být objektiv 100X pečlivě očištěn pomocí papíru na čočky s ethanolem. Pokud je čočka špinavá, olej na ní uschne a poté bude velmi obtížné ji odstranit, což poškodí zorné pole.

Stejně tak je třeba vzít v úvahu, že olej je hořlavý a musí být udržován mimo zdroje tepla (zapalovače). Je důležité se vyhnout zahřátí nad 65 ° C.

A konečně, olej je toxický produkt. Proto by se měl zabránit přímému kontaktu s pokožkou a sliznicemi, kde by to mohlo způsobit mírné podráždění. Aby se předešlo nehodám, doporučuje se při manipulaci s nimi používat rukavice a ochranné brýle.

V případě kontaktu s olejem je třeba oblast umýt velkým množstvím vody. Pokud olej vnikne do očí, měl by být omyván stejným způsobem, aby oči zůstaly otevřené. V případě náhodného požití je důležité spolknout teplou vodu a vyvolat zvracení, kromě návštěvy nejbližšího lékaře.

Reference

1. "Celkový interní reflexní fluorescenční mikroskop." Wikipedia, encyklopedie zdarma. 30. prosince 2018, 22:46 UTC. 14. května 2019, 01:54
2. IVD. Mikroskopie Ponoření oleje. K dispozici na adrese: Users / Team / Downloads.
3. Environmentální biologie a mikrobiologie. Provoz optického mikroskopu. K dispozici na adrese: eumed.net/libros.
4. Sánchez Lera Rita María, Oliva García Ninfa Rosa. Historie mikroskopu a jeho vliv na mikrobiologii. Rev Hum Med, 2015; 15 (2): 355-372. K dispozici v: scielo.
5. Herrero J. Cvičení č. 1: Základy a použití společného složeného optického mikroskopu. Universitat d´Alacant K dispozici na adrese: rua.ua.es/dspace
6. Scharlau - MSDS. Ponorný olej, pro mikroskopii. 2001. K dispozici na adrese: insumos-labcentral.