BHI AGAR: ZALOŽENÍ, PŘÍPRAVA A POUŽITÍ - BIOLOGIE - 2025

Agar BHI nebo Brain Heart Infusion agar médium je nutriční pevné kultuře. Ve španělštině to označujeme jako agar infuzi mozku. Je to neselektivní kultivační médium, což znamená, že se mohou vyvíjet všechny typy grampozitivních a gramnegativních bakterií, jakož i některé kvasinkové a vláknité houby.

Skládá se z infuze telecího mozku a srdce, peptického hydrolyzátu ze zvířecích tkání, pankreatického hydrolyzátu kaseinu, chloridu sodného, ​​glukózy, hydrogenfosforečnanu sodného a agaru.

Desky BHI. Zdroj: Fotografie pořízená autorem MSc. Marielsa Gil.

Je třeba poznamenat, že BHI agar je jedním z nejčastěji používaných kultivačních médií v bakteriologických laboratořích. Může být použit bez doplňků jako primární kultura, subkultura kolonií získaných na jiných selektivních médiích nebo pro udržování kmenů v laboratoři.

Na druhé straně je to ideální médium pro použití jako základ pro přípravu obohacených médií, jako je krevní agar a čokoládový agar. Oba jsou ideální pro izolaci náročných mikroorganismů z nutričního hlediska. Je však třeba poznamenat, že jelikož obsahuje glukózu, není vhodný pro pozorování hemolytických vzorců.

Podobně lze agar BHI použít k přípravě speciálních médií pro izolaci obtížně rostoucích patogenních mikroorganismů v běžných médiích, mezi nimi: Haemophilus sp, Francisella tularensis, Corynebacterium diphtheriae a Histoplasma capsulatum.

S antibiotickou přísadou se agar BHI stává selektivním médiem pro izolaci hub.

Základ

Je to výživné kultivační médium, které izoluje středně náročné mikroorganismy a jeho obohacení lze zvýšit přidáním krve a dalších doplňků výživy.

Je to neselektivní kultivační médium, proto umožňuje růst většiny grampozitivních a gramnegativních bakterií, jakož i některých hub. Může však být selektivní s přidáním antibiotik.

Médium obsahuje infuzi telecího mozku a srdce, peptický hydrolyzát zvířecích tkání a pankreatický hydrolyzát kaseinu; Všechny tyto sloučeniny působí jako zdroje vitamínů, aminokyselin, dusíku a uhlíku.

Glukóza je uhlohydrát, který mikroorganismům dodává energii, jakmile je fermentují. Mezitím si chlorid sodný a fosforečnan disodný udržují osmotickou rovnováhu a poskytují pH téměř neutrální. Nakonec agar dává středně pevné konzistenci.

Příprava

Naváží se 52 gramů dehydratovaného média a rozpustí se v jednom litru destilované vody. Směs se přivede na zdroj tepla až do varu, často se během procesu rozpouštění míchá.

BHI agarové desky nebo klíny mohou být připraveny bez přísad.

Klíny

Pro přípravu klínů podávejte přípravek, dokud se polovina každé zkumavky nenaplní, přikryjte a sterilizujte v autoklávu při 121 ° C po dobu 15 minut, po opuštění položte na základnu, dokud neztuhne. Později skladujte až do použití v chladničce.

Klíny BHI pro bakterioteku. Zdroj: Fotografie pořízená autorem MSc. Marielsa Gil.

Talíře

Rozpuštěná směs se autoklávuje při 121 ° C po dobu 15 minut, nechá se vychladnout na 50 ° C a 20 ml média se podává ve sterilních Petriho miskách. Nechají se ztuhnout, převrátí se a až do použití se uchovávají v lednici. Před naočkováním nechte desky vychladnout na pokojovou teplotu.

PH média musí zůstat na 7,4 ± 0,2.

Surové médium má béžovou barvu a připravené médium je světle jantarové barvy.

Příprava krevního agaru

Po sterilizaci média ochlaďte na teplotu přibližně 45 až 50 ° C, poté přidejte krev (50 ml), jemně promíchejte, aby se homogenizovala, a asepticky podávejte 20 ml v každé Petriho misce. Pokud se na desce vytvoří bubliny, měl by lehce plamen rychle projít bublinami, aby se odstranily.

Podobně lze speciální média připravit přidáním odpovídajících přísad, když směs dosáhne teploty 45 až 50 ° C.

Médium zůstává třešňové červené.

Aplikace

Použití bez doplňků

BHI agar bez aditiv je užitečný jako primární kultura a pro setí čistých kmenů mikroorganismů s nízkou nebo střední náročností pro jejich následnou identifikaci.

Protože se jedná o médium světlé barvy, je ideální pro pozorování pigmentů a protože neobsahuje rušivé látky, lze na něm provést některé biochemické testy, jako je oxidáza a kataláza, nebo lze z těchto kolonií provést jiné biochemické testy. agar.

Podobně se BHI agarové klíny široce používají pro udržování kmenů po určitou dobu v laboratoři (bakterioteca).

Destičky nebo klíny očkované povrchem bakteriálními kmeny se inkubují při 37 ° C po dobu 24 až 48 hodin. Mezitím bude v houbách záviset teplota a doba inkubace na typu požadované houby.

Jako základní agar pro přípravu dalších médií

S touto bází lze připravit obohacená a selektivní média.

Obohacený

Jeho hlavní funkcí je sloužit jako základ pro přípravu krevního agaru pro rutinní použití v mikrobiologických laboratořích. Zejména báze BHI vede k izolaci Streptococcus sp. Nevýhodou však je, že není vhodný pro pozorování hemolytických vzorců, protože obsahuje glukózu.

Používá se také při přípravě králičího nebo koňského krevního agaru pro izolaci Haemophilus sp. Pro dosažení nejlepších výsledků je možné přidat doplněk obohacení (IsoVitaleX).

Pokud vzorky pocházejí z dýchacích cest, lze do agaru přidat bacitracin, aby se inhibovala doprovodná flóra a zvýšila se pravděpodobnost zotavení Haemophilus sp.

Alternativně může být připraven krevní agar (jehněčí nebo člověk) s cystin telluritem k izolaci Corynebacterium diphtheriae. Rovněž je užitečné připravit králičí krevní agar s přídavkem cystinu a glukózy pro izolaci Francisella tularensis.

Naočkování krevního agaru se provádí pomocí odsávání a jsou inkubovány při 35-37 ° C po dobu 24-48 hodin v microaerophilicity (5-10% CO ₂).

Selektivní

Toto médium s přídavkem antibiotik může nahradit agar Sabouraud pro izolaci hub.

Kombinace agaru BHI s chloramfenikolem - gentamicinem nebo penicilinem, streptomycinem a koňskou krví je ideální pro izolaci Histoplasma capsulatum.

V závislosti na izolovaném mikroorganismu se doporučuje inkubace při 35 - 37 ° C nebo při pokojové teplotě v aerobióze. Někdy je nutná inkubace v obou teplotních rozsazích, za použití 2 destiček.

Některé houby, jako jsou Trichophyton mentagrophytes, musí být inkubovány při pokojové teplotě po dobu až 7 dnů.

QA

Z každé připravené šarže se doporučuje inkubovat 1 plotnu nebo klín při 37 ° C po dobu 24 hodin a ověřit, že nedochází k růstu; Je to zvláště důležité při přípravě krevního agaru, protože se jedná o snadno kontaminované médium.

Na druhou stranu lze kvalitu média hodnotit naočkováním známých nebo certifikovaných standardních kmenů a pozorováním jejich vývoje.

V tomto smyslu lze pro hodnocení BHI agaru bez přísad použít kmeny Escherichia coli ATCC 25922, Staphylococcus aureus ATCC 25923 nebo Candida albicans ATCC 10231. Inkubují se při aerobióze při 37 ° C po dobu 24 až 48 hodin. Ve všech případech se očekává uspokojivý růst.

Kmeny Streptococcus pyogenes ATCC 19615, Streptococcus pneumoniae ATCC 6305 nebo Trichophyton mentagrophytes ATCC 9533 mohou být naočkovány pro vyhodnocení misek na krevním agaru.

Bakteriální kmeny jsou inkubovány při 37 ° C v mikroaerofilitě po dobu 24 hodin, zatímco houba je inkubována při pokojové teplotě ve vlhké komoře po dobu až 7 dnů. Ve všech případech se očekává uspokojivý růst.

Reference

1. Britannia Laboratories. Agar s infuzí mozku. 2015. K dispozici na adrese: britanialab.com.
2. Laboratoře BD. Agar mozkové infuze srdce (BHI). 2013. K dispozici na adrese: bd.com.
3. Laboratorios Difco Francisco Soria Melguizo, agar s infuzí mozku. 2009.
4. Neogen Laboratory. Agar s infuzí mozku. K dispozici na adrese: foodsafety.neogen.com
5. Gil M. Krevní agar: založení, použití a příprava. 2018. K dispozici na adrese: lifeder.com.
6. Přispěvatelé Wikipedie. Mozková srdeční infuze. Wikipedia, encyklopedie zdarma. 19. září 2018, 03:58 UTC. K dispozici na adrese: wikipedia.org. Přístup k 2. března 2019.
7. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey a Scott Mikrobiologická diagnostika. 12 ed. Editorial Panamericana SA Argentina.