Agar Biggy je pevná střední selektivní a diferenční kultury. Byl navržen tak, aby izoloval a pomohl při identifikaci hlavních druhů Candida. Název BIGGY pochází z akronymu v angličtině Bismuth Glucose Glycine Yeast.
Původní formule byla vytvořena Nickersonem, proto je toto médium známé také jako Nickersonův agar. V současné době se skládá z kvasničného extraktu, glycinu, dextrózy, citronanu amonného, citrátu bizmutu, siřičitanu sodného a agaru.
Grafické znázornění BIGGY agaru. Zdroj: Flickr.com
BIGGY agar je vytvořen pro diferenciaci druhů Komplex C. albicans, C. tropicalis, C. krusei a C. kefyr, ale rostou i jiné druhy, jako je Candida glabrata, C. parapsilosis, C. guilliermondii, Trichosporun sp, Geotrichum kandidum a Saccharomyces cerevisiae.
Má dobrou citlivost a specifičnost, nicméně ve srovnání s jinými médii s podobnou funkcí je na druhém místě a překonává ho CHROMagar. Z tohoto důvodu mnoho laboratoří dává přednost těm posledním, i když je mnohem dražší.
Mělo by být jasné, že použití agaru BIGGY, jakož i jiných podobných prostředků, napomáhá rychlé předpokládané identifikaci, ale nikdy není potvrzující. Proto musí být k dispozici další metody identifikace; například identifikační systémy Vitek 32 a API 20.
Základ
Agar BiGGY je považován za částečně selektivní médium pro izolaci kvasinek, zejména rodu Candida, i když mohou růst i další rody.
Je to také diferenciální médium, protože v závislosti na druhu se budou pozorovat různé vlastnosti, pokud jde o vzhled, barvu, tvar a velikost. To je považováno za chromogenní médium, kvůli vývoji různých barev v koloniích.
Barva kolonií kvasinek je způsobena přítomností siřičitanu bizmutitého v agaru. Nickerson si uvědomil, že kvasinky rodu Candida provádějí extracelulární redukci siřičitanu bizmutitého a transformují ho na sulfid bizmutitý (nerozpustná černá látka). Výsledkem jsou světle hnědé až černé kolonie.
Tento agar obsahuje kvasnicový extrakt a dextrózu, která poskytuje zdroj základních živin a energie pro vývoj kvasinek. Glycin je stimulátor růstu kvasinek, zatímco inhibuje růst určitých bakterií.
Ve stejném smyslu působí jako inhibitory růstu bakterií citronan amonný a bizmut, jakož i siřičitan sodný. Agar je látka, která dává střední pevné konzistenci.
Příprava
Naváží se 45 g dehydratovaného kultivačního média a rozpustí se v litru destilované vody. Směs se protřepe a zahřívá se 1 minutu až do úplného rozpuštění. Toto kultivační médium není autoklávovatelné.
Po ochlazení na přibližně 45 ° C ve vodní lázni nalijte 20 ml na sterilní Petriho misky.
Barva dehydratovaného média je nažloutlá šedá a připravená je nažloutlý bílý gel, ve kterém lze pozorovat slabou vločkovitou sraženinu.
Hodnota pH by měla být 6,8 ± 0,2.
Připravené médium by mělo být skladováno v chladničce (4 ° C) a chráněno před světlem. Protože se jedná o médium, které nelze autoklávovat, mělo by se použít co nejdříve. Jeho použití se doporučuje před 3 dny po jeho přípravě.
Použití
Destičky se inkubují při teplotě místnosti (25 ° C) po dobu 24, 48 a 72 hodin a inkubační doba může být prodloužena až na 5 dní.
Každý druh Candidy rozvíjí určité vlastnosti, díky nimž se od sebe liší. Výrobci média popisují pro každý druh tyto vlastnosti:
- Komplex albida albánský: na tomto agaru se vyvíjí jako hladké, kulaté, hnědé nebo černé kolonie, s mírným myceliálním okrajem. S tou výjimkou, že tmavá barva se nerozptyluje do středu.
- Candida tropicalis: světlé, malé, tmavě hnědé kolonie s černým středem a mírným myceliálním okrajem. Tmavá barva se rozprostírá směrem do středu, což je pro tento druh typické, po inkubaci 72 hodin.
-Candida krusei vyvíjí velké, ploché, drsně vypadající kolonie s hnědou až černou barvou.
-Candida parakrusei: středně velké kolonie, většinou drsné, ploché. Barva se může lišit od světle tmavě červenohnědé až světle červenohnědé. Hranice kolonií má rozsáhlé, nažloutlé mycelium.
-Candida stellatoidea: vyvíjí se střední, ploché kolonie, tmavě hnědé, téměř černé. Myceliální vývoj je velmi vzácný.
Studie provedená Yücesoyem a Marolem v roce 2003 ukázala, že médium CHROMagar má lepší citlivost a specificitu pro diferenciaci a identifikaci různých druhů Candida než agar BIGGY.
QA
Pro kontrolu sterility se neinokulované plotny inkubují při 25 ° C, ve tmě po dobu 24 až 48 hodin, očekává se, že nedojde k žádnému růstu ani ke změně barvy.
Kmeny ATCC doporučené pro kontrolu kvality média jsou:
Candida albicans ATCC 60193 komplex, Candida glabrata ATCC 2001, Candida krusei ATCC 34135. Růst se očekává u všech z nich, jak je popsáno výše.
Lze použít také následující kmeny:
Escherichia coli ATCC 25922, Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 a Staphylococcus epidermidis ATCC 12228. V prvních dvou se očekává úplná inhibice, ale v případě částečného růstu budou kolonie krémově zbarvené.
V případě S. aureus se očekává úplná inhibice, ale pokud roste částečně, jeho kolonie jsou bílé.
Omezení
Některé bakterie jsou schopné růst v tomto médiu a mohou dokonce ztmavnout, což simuluje kolonii Candida, ale když je kolonie rozmazává a pozoruje pod mikroskopem, snadno se odstraní.
Tabulka: Charakteristika kolonií některých kvasinek na agaru BIGGY podle práce Yücesoye M. a Marol S.
Zdroj: Yücesoy M, Marol S. Výkon CHROMAGAR candida a BIGGY agar pro identifikaci kvasinek. Ann Clin Microbiol Antimicrob. 2003; 2 (8): 1-7
Reference
- Yücesoy M, Marol S. Výkon CHROMAGAR candida a BIGGY agaru pro identifikaci druhů kvasinek. Ann Clin Microbiol Antimicrob. 2003; 2 (8): 1-7.
- MCD LAB. Technický list BIGGY Agar. K dispozici na adrese: mcdlab.net/
- Lab Neogen. BIGGY Agar. K dispozici na adrese: foodsafety.neogen.com
- Conda Pronadisa Laboratories. VELKÝ agar. K dispozici na adrese: condalab.com
- Laboratoře BD. Agar BD BiGGY (agar z kvasnicové glukózy a glycinu a kvasinek). 2011. K dispozici na adrese: bd.com