ŽLUČOVÝ ESKULINOVÝ AGAR: ZDŮVODNĚNÍ, PŘÍPRAVA A POUŽITÍ - BIOLOGIE - 2025

Žluč eskulin agar je selektivní a diferenciální médium pevné kultuře. Používá se jako diagnostický test ke stanovení schopnosti určitého mikroorganismu růst v médiu, které obsahuje žluč a také štěpí glukosidový esculin na esculetin a glukózu.

Tento diagnostický test se používá k odlišení druhů rodu Streptococcus patřících do skupiny D (žlučový esculin pozitivní), od ostatních skupin Streptococcus, které na tento test reagují negativně.

Destička se žlučovým agarem, naočkovaná kmenem Enterococcus (test pozitivní). Zdroj: Nebyl poskytnut žádný strojově čitelný autor. Philippinjl převzato (na základě nároků na autorská práva).

Je třeba poznamenat, že některé streptokoky skupiny viridans mohou hydrolyzovat eskulin, ale nejsou schopné růst v přítomnosti žluči v koncentraci 40%, proto je v tomto médiu reakce pro tuto skupinu negativní.

Na druhé straně, žlučové eskulinové médium je také užitečné pro diagnózu Listeria monocytogenes nebo Aerococcus sp, protože tyto mikroorganismy jsou žlučové esculin pozitivní.

Esculin žlučový agar se skládá z peptonu, masového výtažku, ox žluči, esculinu, citrátu železa, agaru a destilované vody. Některé komerční domy zahrnují azid sodný ve složení média.

Médium lze připravit v laboratoři, pokud máte všechny sloučeniny samostatně nebo je lze připravit z komerčního dehydratovaného média.

Základ

Žlučové eskulinové médium obsahuje peptony a masový extrakt, obě sloučeniny poskytují potřebné živiny pro růst mikroorganismů.

Obsahuje také esculin; Tato sloučenina je glykosid vytvořený spojením jednoduchého monosacharidu (glukózy) se sloučeninou zvanou 6,7-dihydroxycoumarin nebo esculetin (aglukon), spojenou acetálovou nebo glukosidickou vazbou.

Test je založen na prokázání, zda jsou bakterie schopny hydrolyzovat esculin. Pokud k tomu dojde, esculin se rozpadne na esculetin a glukózu. Esculetina reaguje s železem přítomným v médiu a vytváří tmavě hnědou, téměř černou sloučeninu.

To znamená, že citrát železitý působí jako vývojář reakce. Díky této vlastnosti je agar Bile Esculin diferenciálním médiem.

Žluč je naopak inhibitorem, který brání růstu některých mikroorganismů, proto musí být bakterie před rozštěpením esculinu schopny růst v přítomnosti žluči. Proto je toto médium považováno za selektivní.

Bakterie, které se v tomto prostředí mohou vyvíjet, jsou hlavně ty, které žijí ve střevním prostředí.

V tomto smyslu některé komerční společnosti přidávají do média azid sodný, aby dále inhibovaly růst enterálních gramnegativních bacilů, což zvyšuje selektivitu média pro růst Streptococcus.

Nakonec agar dává pevné konzistenci médiu a voda je rozpouštědlem sloučenin.

Příprava

Domácí příprava žlučového agaru

Vážit:

5 g peptonů

3 g masového výtažku

40 g hovězí žluči

1 g esculinu

0,5 g citrátu železa

15 g agaru

1000 ml destilované vody

V případě přidání azidu sodného se zváží 0,25 g / l a přidá se ke směsi.

Rozpusťte složky v litru destilované vody, zahřívejte, dokud se sloučeniny úplně nerozpustí. Rozdělte 5 ml do zkumavek se šroubovacím uzávěrem 16 x 125 mm. Autokláv při 121 ° C, 15 liber tlaku po dobu 15 minut.

Vyjměte z autoklávu a naklopte zkumavky na držák tak, aby agar ztuhl v širokém zobáku na flétnu.

Skladujte v chladničce až do použití. Před výsevem přiveďte na pokojovou teplotu.

Mohou být také připraveny destičky se žlučovým agarem; v tomto případě je celá směs autoklávována v baňce a následně distribuována do sterilních Petriho misek. Nechte je ztuhnout a uložit v lednici.

PH média musí být 6,6 ± 0,2.

Příprava žlučového eskulinového agaru z komerčního média

Navážte množství určené vložkou. To se může lišit od jednoho obchodního domu k druhému. Následně postupujte stejně jako výše uvedený postup.

PH média by mělo být 6,6 ± 0,2. Barva dehydratovaného média je světle béžová a připravené médium je tmavě jantarové.

Komerční žlučové eskulinové médium. Zdroj: Fotografie pořízená autorem MSc. Marielsa Gil.

Aplikace

Žlučové eskulinové médium se používá hlavně k rozlišení Streptococcus D skupiny (žlučový esculin pozitivní), od zbytku streptokokových skupin (žlučový esculin negativní).

Kombinací testu růstu bujónu s hypersaltem a testu na žlučový esculin lze identifikovat speciální skupinu streptokoků skupiny D zvanou Enterococcus.

Tato zvláštní skupina Streptococcus patří do skupiny D výše uvedeného rodu a jsou schopna hydrolyzovat esculin v přítomnosti žluči stejně jako ostatní členové skupiny D, ale jsou také schopni se vyvíjet v hypersaltovém médiu (BHI s chloridem 6,5% sodíku), vlastnost, která dělá rozdíl.

Proto se streptokoky, které hydrolyzují žluč esculinů, ale nerostou v nadzemním bujónu, nazývají streptokoky skupiny D enterokoky.

Zaseté

Inokulujte médium nejlépe z čistého 24 hodinového vývaru Todd-Hewitt.

Přidejte 2 kapky na povrch média pomocí Pasteurovy pipety a rozprostřete do média pomocí platinové smyčky.

Inkubujte při 35 ° C po dobu 48 hodin, zatímco je dodržena doba inkubace, lze monitorovat, zda nedošlo k pozitivní reakci. Pokud na konci této doby zůstává reakce negativní, může být inkubována až 72 hodin.

Výklad

Pozitivní reakce: výskyt tmavě hnědé, téměř černé barvy ve zobáku na flétnu (v případě zkumavky) nebo zčernění agaru kolem kolonií (v případě testu na destičce).

Negativní reakce: nedochází k černění média nebo dochází k černému vzhledu v méně než polovině zkumavky po 72 hodinách inkubace. Na druhé straně by bakteriální růst v médiu bez výskytu černé barvy měl být považován za negativní test.

QA

Pro vyhodnocení kvality média musí být kmen pozitivní na Enterococcus faecalis ATCC 29212 k dispozici jako pozitivní kontrola a kmen Streptococcus, který nepatří do skupiny D, jako negativní kontrola.

Omezení

-Média, která neobsahují azid sodný, umožňují růst enterálních gramnegativních bacilů. Někteří z nich mohou čerpat střed.

- Některé komerční domy přidávají nízkou koncentraci žluči (10%), a proto se některé streptokoky, které nepatří do skupiny D, mohou vyvíjet v médiu a hydrolyzovat esculin, což může způsobit chyby při interpretaci.

Reference

1. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologická diagnostika. 5. ed. Editorial Panamericana SA Argentina.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey a Scott Mikrobiologická diagnostika. 12 ed. Editorial Panamericana SA Argentina.
3. Mac Faddin J. (2003). Biochemické testy pro identifikaci bakterií klinického významu. 3. ed. Editorial Panamericana. Buenos Aires. Argentina.
4. Lab. Britannia. Esculinová žluč s azidovým agarem. 2015.K dispozici na: britanialab.com
5. "Žlučový eskulinový agar." Wikipedia, encyklopedie zdarma. 22. srpna 2017, 17:30 UTC. 22. dubna 2019, 17:35. es.wikipedia.org.
6. Laboratorní test Bd Esculin Agar Slants. 2015.K dispozici na: bd.com
7. Neogen Laboratories. Žlučový eskulinový agar. K dispozici na adrese: foodsafety.neogen.com