Agar cetrimid nebo cetrimid je selektivní pevné kultivační médium určen pro izolaci Pseudomonas aeruginosa. Je založen na ukázání produkce charakteristických pigmentů tohoto druhu a byl vyroben z modifikace tech agaru, vytvořeného Kingem, Wardem a Raneyem.
Původní vzorec obsahoval soli chloridu hořečnatého, síranu draselného, pankreatické trávení želatiny a agar-agar. Modifikace vzorce spočívala v přidání cetrimidu (cetyltrimethylamoniumbromidu) a glycerolu.
Agar cetrimidu naočkovaný Pseudomonas aeruginosa Zdroj: BiotechMichael, od Wikimedia Commons
Cetrimidový agar je užitečný pro mikrobiologickou studii vzorků, u nichž existuje podezření na přítomnost Pseudomonas aeruginosa. Je třeba poznamenat, že tato bakterie je nesmírně důležitá, protože ačkoli je součástí normální mikrobioty prostředí, často se chová jako oportunní patogen.
Z tohoto důvodu je jedním z nejčastějších problémů způsobených tímto zárodkem nozokomiální infekce, tj. Ty, které se vyskytují v nemocničním prostředí, útočí na pacienty, kteří mají oslabený imunitní systém.
Na druhou stranu, vzhledem k afinitě, kterou má tento mikroorganismus s vlhkostí, jsou nejzranitelnějšími cíli kontaminace: asistovaná dýchací zařízení, léky, nebulizéry, vodní zdroje, klimatizace, dezinfekční prostředky, mýdlové roztoky, injekční roztoky, otevřené rány, mezi jiným katétry, močové trubice.
V tomto smyslu je cetrimidový agar užitečný pro provádění mikrobiologických kontrol a kultur výše uvedených prvků.
Základ
Cetrimidový agar je založen na schopnosti média podporovat růst P. aeruginosa, stimulovat produkci jeho pigmentů a následně inhibovat růst dalších mikroorganismů.
Tyto vlastnosti jsou způsobeny funkcí každé z jejích složek. Přítomný želatinový pepton slouží jako zdroj dusíku, vitamínů a minerálů. Glycerol nebo glycerin funguje jako zdroj uhlíku.
Cetrimid (cetyltrimethylamoniumbromid) je látka, která inhibuje růst bakterií jiných než P. aeruginosa, včetně jiných druhů patřících do stejného rodu.
K inhibici dochází, protože cetramid působí jako kationtový detergent, který dokáže destabilizovat plazmatickou membránu většiny bakterií, s výjimkou P. aeruginosa a některých dalších, které dokáží přežít.
Na druhé straně obsahuje chlorid hořečnatý a síran draselný. Tyto sloučeniny stimulují fenotypovou expresi související se schopností Pseudomonas aeruginosa produkovat různé pigmenty, včetně: pyocyaninu, pyoverdinu, pyorrubinu, pyomelaninu a fluoresceinu. Nakonec obsahuje agar-agar, který mu dává pevnou konzistenci.
Výklad
Interpretace růstu získaného v tomto agaru se provádí takto:
Pozorování kulatých, hladkých kolonií s pravidelnými okraji, produkce modrozelených, zelených, hnědých nebo načervenalých pigmentů, plus emise ovocného zápachu (aminoacetofenon), je předpokladem přítomnosti této bakterie v uvedeném vzorku.
Na druhé straně pozorování jasně zeleno-žlutého pigmentu na koloniích svědčí o P. aeruginosa, když je destička vystavena ultrafialovému světlu.
Fluorescence kolonií P. aeruginosa na agaru cetrimidu za ultrafialového záření.
Je třeba poznamenat, že každá pozorovaná barva je způsobena tvorbou specifického pigmentu. Modrozelený pigment odpovídá produkci pyocyaninu, zeleného až pyoverdinu, načervenalého na pyorubin, hnědého na pyomelanin a zářivě žlutozelené fluorescence pod UV světlem na fluorescein.
Příprava
Naváží se 43 g dehydratovaného média a rozpustí se v destilované vodě. Přidá se 10 ml glycerolu. Vezměte směs ke zdroji tepla. Nechte ji několik minut vařit, dokud se nerozpustí.
Autoklávujte při 121 ° C po dobu 15 minut. Při teplotě kolem 50 ° C nechte stát a podávejte ve sterilních Petriho miskách.
Nechte ztuhnout, převrátit, objednat na plakrech a skladovat v chladničce až do použití. Destičky s agarem cetrimidu by měly být vyjmuty z chladničky před nasazením a ponechány při pokojové teplotě.
Konečné pH média by mělo být 7,2 ± 0,2.
Barva dehydratovaného média je béžová a přípravek je neprůhledný bílý.
Aplikace
Všechny druhy vzorků, u nichž existuje podezření na přítomnost Pseudomonas aeruginosa, mohou být vysety na agar cetrimidu. Proto je užitečná ve všech oblastech mikrobiologie (environmentální, průmyslová, klinická, voda a potraviny).
Je velmi důležité analyzovat nemocniční prostředí a být tedy schopen provádět nápravná opatření, protože tento mikroorganismus se dostává k pacientům prostřednictvím kontaminovaných zařízení, léků, roztoků a dodávek, které pacient používá.
Tímto způsobem může mikroorganismus infikovat dolní dýchací cesty, močové cesty a rány pacientů s potlačenou imunitou.
Počty kolonií P. aeruginosa lze také provádět v mikrobiálních limitních testech.
Zaseté
Cetrimidový agar lze použít jako primární kulturu. Deska se naočkuje na jednu ze svých hran a odtud se vyčerpáním rozdělí na zbytek destičky. Tekuté vzorky mohou být naočkovány špachtlí drigalski.
Destičky se inkubují aerobně při 37 ° C po dobu 24 hodin inkubace.
Omezení
- Malé procento kmenů Pseudomonas aeruginosas neprodukuje pyocyanin, takže lze interpretovat falešně negativní.
- V tomto médiu je inhibováno několik druhů klinického významu Pseudomonas.
- Bez ohledu na vlastnosti popsané pro Pseudomonas aeruginosa musí být potvrzeny dalšími identifikačními testy. Zkouška, která by neměla chybět, je test oxidázy, musí být pozitivní.
- Některé Enterobacteriaceae mohou růst v tomto médiu a vyvinout žlutý pigment, ale liší se od Pseudomonas aeruginosa v tom, že když je destička vystavena ultrafialovému světlu, neexistuje fluorescence.
- Serratia marcescens dokáže vyvíjet a produkovat růžový pigment.
- Pokud jsou misky naočkované cetrimidovým agarem vystaveny po určitou dobu při pokojové teplotě, mohou kmeny P. aeruginosa ztratit fluorescenci pozorovanou pod ultrafialovým světlem, ale vlastnost se získá, pokud se inkubují znovu při 37 ° C.
QA
K analýze dobrého výkonu agaru cetrimidu lze použít kontrolní kmeny, jako například: Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Stenotrophomonas maltophilia ATCC 13637, Escherichia coli ATCC 25922 a Staphylococcus aureus ATCC 25923.
Očekávané výsledky jsou:
- Dobrý růst pro P. aeruginosa, s modrozeleným pigmentem a pozitivním fluoresceinem.
- S. maltophilia a S. aureus budou částečně zcela inhibovány.
- Očekává se, že Escherichia coli bude zcela inhibována.
Reference
- Callicó A, Cedré B, Sifontes S, Torres V, Pino Y, Callís A, Esnard S. Fenotypová a sérologická charakterizace klinických izolátů Pseudomonas aeruginosa. VacciMonitor. 2004; 13 (3): 1-9.
- Conda Pronadisa Laboratories. Cetrimidový agarový základ. 2014. K dispozici na adrese: condalab.com
- Britannia Laboratories. Cetrimidový agar. 2015.K dispozici na: britanialab.com
- Laboratoře BD. BD pseudoselový agar (Cetrimidový agar). 2013. K dispozici na adrese: bd.com
- Francisco Soria Melguizo Laboratory, CA Cetrimide agar. 2009. K dispozici na adrese: