ČOKOLÁDOVÝ AGAR: ZÁKLAD, POUŽITÍ A PŘÍPRAVA - BIOLOGIE - 2025

Agar čokoláda je pevný kultivační médium obohacené, non - selektivní a non - rozdíl. Používá se hlavně k izolaci mikroorganismů náročných z nutričního hlediska, i když v nich může růst jakýkoli druh bakterií.

Z tohoto důvodu se jeho užitečnost zvyšuje zejména v očkování vzorků, které jsou normálně sterilní, jako je CSF a kloubní tekutina. I když je také zahrnut do zvolených prostředků pro setí polymikrobiálních vzorků, v těchto případech je však nutné přidat antibiotika, která inhibují doprovodnou flóru.

Čokoládový agar s bakteriálním růstem

Toto médium má charakteristickou hnědou barvu velmi podobnou čokoládě, odtud název. Přípravek je velmi podobný přípravku na krevním agaru, pouze v tomto případě musí být krev zahřátá, aby se červené krvinky rozpadly.

Jeho příprava, stejně jako krevní agar, je velmi choulostivá, protože je snadno kontaminovatelná. Z tohoto důvodu mnoho laboratoří upřednostňuje získání tohoto média již připraveného komerčními společnostmi, které zaručují jeho kvalitu.

Základ

Toto médium se skládá z agarového základu bohatého na živiny a zahřáté krve. Hemolýza červených krvinek poskytuje faktor X (hemin) a faktor V (NAD), nezbytný pro růst některých mikroorganismů, jako je rod Haemophilus. Je také velmi užitečný pro izolaci Neisserias sp.

Stejně jako krevní agar lze podle potřeby použít jako základní agar různá média. Mezi použitá média patří infúze mozku a srdce a sójový agar tryptikázy, i když nejvíce doporučovanými jsou agar Columbia, Müeller Hinton, GC agar a Thayer Martin agar.

Některé varianty čokoládového agaru zahrnují komerčně dostupný obohacený doplněk zvaný Isovitalex nebo Polivitex.

Tyto doplňky obsahují vitamín B ₁₂, L-glutamin, adenin, guanin hydrochlorid, kyselinu p-aminobenzoovou, nikotinamid adenin dinukleotid (NAD), thiamin pyrofosfát, dusičnan železitý, thiamin hydrochlorid, cystein hydrochlorid, L-cystin, a glukóza.

Je důležité si uvědomit, že čokoládový agar je obohacenější než krevní agar, ale neumožňuje pozorovat hemolytické vzorce.

Aplikace

Zdroj: pixnio.com. Autor:

Pete Seidel, Amanda Moore, MT, Todd Parker, PhD, Audra Marsh, USCDCP

Čokoládový agar připravený s agarem Columbia

Toto médium obsahuje pankreatický trávení kaseinu a srdce, peptický trávník masa, chlorid sodný, agar, kvasnicový extrakt a kukuřičný škrob. Je také bohatý na vitamíny, minerály a esenciální aminokyseliny.

Tato vyhřívaná krevní báze je ideální pro izolaci bakterií rodu Neisseria. Na druhé straně, pokud se do média navíc přidá doplněk Brucella, lze uvedený mikroorganismus izolovat. Výsledky se zlepšují pomocí koňské krve.

Čokoládový agar připravený s GC základním agarem (pro gonokoky)

Toto médium obsahuje peptony, kukuřičný škrob, monobazické a dibazické pufry, chlorid sodný a agar.

Většina komerčně připravených čokoládových agarových prezentací přichází s touto bází a neobsahují zahřátou krev, ale spíše syntetickou směs heminu a chemický doplněk růstových faktorů, vitamíny, minerály, aminokyseliny, faktor V a glukózu.

Čokoládový agar připravený s Müellerem Hintonovým agarem

Používá se k testování antimikrobiální citlivosti náročných mikroorganismů, jako je Streptococcus pneumoniae, za použití 5% zahřáté ovčí krve.

Používá se také pro primární izolaci Neisserias a Haemophilus, ale v konkrétním případě izolace Haemophilus je výhodné použití koňské krve, protože je bohatým zdrojem faktorů X a V.

Na druhé straně, pokud vzorek, který má být zaset, pochází z nesterilní oblasti, doporučuje se přidávat antibiotika k inhibici normální flóry oblasti.

Příklad pro vzorky dýchacích cest, u nichž existuje podezření na přítomnost bakterií rodu Haemophilus, se bacitracin používá k inhibici růstu Staphylococcus, Micrococcus, Streptococcus a saprophytic Neisserias.

V případě vzorků kanálních genitálií, u nichž existuje podezření na Haemophilus ducreyi, byl úspěšně použit čokoládový agar připravený následujícím způsobem: Müeller - Hintonův agar s 5% čokolády koňské krve, 1% obohacení Isovitalex a 3 ug / ml vankomycinu.

Čokoládový agar připravený s agarem Thayer Martin

Toto médium je zvláštní pro izolaci Neisseria gonorrhoeae. Musí obsahovat antibiotika, aby inhibovala doprovodnou flóru. Používá se jehněčí krev.

Příprava

Měli byste vidět indikace pro přípravu základního agaru, který se má použít. Nacházejí se na zadní straně nádoby dehydratovaného média. Obecně popisují, kolik musíte zvážit, abyste mohli připravit litr kultivačního média.

Přesné potřebné množství může být připraveno v laboratoři, může být více či méně než litr.

Výpočty

K výpočtu toho, kolik se má zvážit, aby se připravil požadovaný objem, se používá pravidlo tři. Příklad:

Je-li pro 1 litr nutné zvážit 40 g a laboratoř potřebuje 800 ml, říká se:

1000 ml ----------- 40 g

800 ml -----------– X

Vzorec bude následující:

X = 32 g (množství, které má být zváženo 800 ml).

Vážení a rozpuštění

Potřebné množství se zváží a umístí do baňky s vodou.

Zahřejte na mírné teplo a jemně míchejte rotačními pohyby, dokud se dehydratované médium úplně nerozpustí, nechte jej vařit 1 minutu.

Sterilizovat

Baňka se umístí do autoklávu, aby se médium sterilizovalo při 121 ° C po dobu 20 minut.

Krevní agregát

Při opuštění autoklávu se nechá stát, dokud teplota média není přibližně mezi 56 až 70 ° C, aby se krev umístila, a míchá se, dokud médium nezhnědne.

Pokud přidáváte doplňky, je čas to udělat. Následně promíchejte a podávejte 20 ml do každé sterilní Petriho misky.

Celý postup by měl být prováděn v laminárním krytu nebo kolem Bunsenova hořáku.

Nechte stát, dokud neztuhnou a uložte obráceně v lednici.

Další způsob, jak připravit čokoládový agar bez použití krve

Základní médium je připraveno jak je popsáno výše, komerčně získaný dehydratovaný hemoglobin je rozpuštěn a sterilizován v autoklávu.

Oba roztoky se nechají ochladit na 50 ° C, spojí se a přidá se doplněk. Smíchejte za aseptických podmínek a poté podávejte ve sterilních Petriho miskách.

QA

Je důležité, aby krev byla umístěna při uvedené teplotě, protože je ideální k lýze červených krvinek a současně k udržení faktoru V, který je citlivý na teplo.

Na povrchu agaru by neměly zůstat žádné bubliny. Z každé šarže 100 destiček by měla být inkubována jedna nebo dvě destičky v peci při 37 ° C po dobu 24 hodin, aby se ověřila jejich sterilita.

Pro dosažení nejlepších výsledků by měl být čokoládový agar použit krátce po přípravě.

Kontrolní bakteriální kmeny by měly být uchovávány v laboratoři, aby se vyhodnotila účinnost čerstvého média pro růst hlavních náročných mikroorganismů klinického významu.

Reference

1. García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Praktická klinická mikrobiologie. University of Cadiz, 2. vydání. UCA Publications Service.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey a Scott Mikrobiologická diagnostika. 12 ed. Argentina. Editorial Panamericana SA
3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologická diagnostika. (5. vydání). Argentina, Editorial Panamericana SA
4. Llanes R, Reyes A, Rodríguez C, Guzmán D, Llop A. Proveditelnost použití základního kultivačního média pro agar GC-Biocen v mikrobiologické laboratoři. Rev Cubana Med Trop, 2004; 56 (3): 237-238. K dispozici na adrese: scielo.sld.
5. Přispěvatelé Wikipedie. Čokoládový agar. Wikipedia, encyklopedie zdarma. 17. prosince 2018, 19:54 UTC. K dispozici na adrese: en.wikipedia.org.