CLED AGAR: ZDŮVODNĚNÍ, POUŽITÍ A PŘÍPRAVA - BIOLOGIE - 2025

CLED agar (cystin-laktózy elektrolytu deficitní) je pevná látka kultivační médium rozdíl, který se používá pro diagnostiku infekcí močových cest. Složení kultivačního média je navrženo pro dobrý růst močových patogenů a je ideální pro kvantifikaci jednotek tvořících kolonie (CFU).

Kultivační médium CLED je neselektivní, protože v něm mohou růst gram-negativní a gram-pozitivní mikroorganismy. To však není problém, protože většina UTI je způsobena pouze jedním typem mikroorganismu.

Agar CLED

V případě polymikrobiálních infekcí můžete získat 2 nebo 3 různé bakterie, ale je to velmi vzácné a většinou kontaminované vzorky.

Mezi gramnegativní bakterie, které v tomto médiu mohou růst, patří bacily patřící do čeledi Enterobacteriaceae a další enterické bacily, přičemž nejčastěji izolovanými uropatogeny ve vzorcích moči jsou: Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Proteus mirabilis, Morganella morganii, Pseudomonas aeruginosa, mimo jiné.

Podobně mezi grampozitivními bakteriemi, které mohou růst v tomto médiu, mohou růst Staphylococcus aureus, Staphylococcus saprophyticus, Enterococcus faecalis, Streptococcus agalactiae, Corynebacterium sp, Lactobacillus sp a dokonce i kvasinky, jako je Candida albicans complex.

Vzhledem k chemickému složení média však neumožňuje růst některých náročných genitourinárních patogenů, jako je Neisseria gonorrhoeae, Gardnerella vaginalis.

Odůvodnění agaru CLED

Kultivační médium CLED má jako zdroj energie masový extrakt, pankreatický hydrolyzát kaseinu a hydrolyzát želatiny. Poskytují živiny pro vývoj nenáročných bakterií.

Obsahuje také cystin, aminokyselinu, která umožňuje růst koliformních bakterií, rozlišitelných podle jejich malé velikosti.

Podobně obsahuje laktózu jako fermentovatelný uhlohydrát, z tohoto důvodu je toto médium rozdílné; být schopen odlišit fermentující bakterie od fermentace bez laktózy.

Fermentující bakterie způsobují změnu pH média v důsledku produkce kyselin, vyvíjení žlutých kolonií, zatímco nefermentující bakterie nevytvářejí změny v médiu, proto přijímají barvu původního agaru, zelenou.

Fermentační reakce je odhalena díky přítomnosti indikátoru pH, kterým je v tomto médiu bromtymolová modrá.

Na druhé straně nízká koncentrace elektrolytu v médiu inhibuje typický invazivní růst rodu Proteus, nazývaný rojový efekt. To vytváří výhodu oproti jiným médiím, protože umožňuje počítání CFU, včetně toho, zda je přítomen rod Proteus.

Nízká koncentrace elektrolytů však inhibuje růst některých druhů rodu Shigella, což je ve srovnání s jinými médii nevýhodou.

Odůvodnění agaru CLED (Bevis)

Existuje varianta nebo modifikace tohoto média provedená Bevisem, který do původní kompozice začlenil kyselý fuchsin (Andradeho indikátor). Funguje ve spojení s bromtymolovou modrou k odlišení fermentace od nefermentujících bakterií.

Rozdíl mezi konvenčním a modifikovaným médiem je barva, kterou kolonie nabývají. V případě bakterií fermentujících laktosu se kolonie zbarví červeno-oranžové s růžovým nebo červeným halo, zatímco nefermentující jsou modrošedé.

Aplikace

Aged CLED se používá výhradně k očkování vzorků moči. Používání tohoto média je zvláště časté v evropských laboratořích, zatímco v Americe je méně využíváno.

Odběr vzorků musí splňovat určité parametry, aby bylo možné získat spolehlivé výsledky, včetně:

• Neužívejte antibiotika před odběrem vzorků.
• Moč si nejlépe vezměte první věc ráno, protože je koncentrovanější, když není možné odebrat vzorek invazivními metodami.
• Před odebráním vzorku důkladně omyjte genitálie.
• Zlikvidujte první proud moči a poté nádobu umístěte.
• Sbírejte 25 až 30 ml moči do dobře značené sterilní nádoby.
• Vezměte okamžitě do laboratoře obklopené ledem.
• Musí být zpracováno do 2 hodin po vydání nebo chlazeno při 4 ° C po dobu maximálně 24 hodin.

Očkování vzorků moči

Vzorek moči by měl být naředěn 1:50.

Pro ředění vložte 0,5 ml moči pacienta a zřeďte 24,5 ml sterilního fyziologického roztoku.

Změřte 0,1 ml zředěné moči a povrchovou pomazánku pomocí drigalski špachtle na médiu CLED. Toto je nejlepší metoda očkování pro počítání kolonií. Z tohoto důvodu se používá ve vzorcích moči, protože výsledky musí být vyjádřeny v CFU / ml.

Chcete-li kvantifikovat získané kolonie, postupujte takto: spočítejte kolonie na destičce a vynásobte 10 a potom 50. Tím získáte množství CFU / ml moči.

Výklad

Počty nad 100 000 CFU / ml - indikuje infekci močí

Počty pod 1000 CFU / ml - žádná infekce

Počítá se mezi 1000 - 10 000 CFU / ml - pochybné, možné znečištění, opakujte odběr vzorků.

ID

Kolonie vypěstované na agaru CLED by měly mít gram a v závislosti na morfotintoriálních charakteristikách mikroorganismu se provádí určitá subkultura.

Například, pokud se jedná o gram-negativní bacil, bude vyséván na agaru MacConkey, kde je potvrzena fermentace laktózy nebo nikoli. Kromě toho je k provádění testu oxidázy připojen živný agar.

Pokud Gram odhalí grampozitivní koky, může být subkultivován na slaném mannitolovém agaru a na živném agaru. U posledně jmenovaného se provádí katalázový test. Nakonec, pokud jsou pozorovány kvasinky, bude vyseta na agaru Sabouraud.

Mnoho laboratoří se vyhýbá použití média CLED a dává přednost použití krevního agaru, MacConkey a živného agaru pro vzorky moči.

Příprava

V baňce s jedním litrem destilované vody rozpusťte 36,2 g práškového agaru CLED. Po 5 minutách stání se resuspendovaný agar zahřívá za stálého míchání k varu po dobu 1 minuty.

Potom sterilizujte při 121 ° C po dobu 15 minut v autoklávu. Na konci této doby se vyjme z autoklávu a nechá se ochladit na teplotu 45 ° C. Následně se v každé sterilní Petriho misce podává 15 až 20 ml.

Postup podávání talířů musí být proveden uvnitř laminárního digestoru nebo před Bunsenovým hořákem, aby nedošlo ke kontaminaci.

Podávané talíře se nechají ztuhnout, uspořádají se v převráceném stojanu a až do použití se skladují v lednici (2-8 ° C).

Konečné pH připraveného média by mělo být 7,3 ± 0,2.

Reference

1. Doporučení pro mikrobiologickou diagnostiku infekce moči. chil. infectol. 2001; 18 (1): 57-63. K dispozici na adrese: scielo.org.
2. Panchi J. Identifikace mikrobiální látky způsobující infekce močových cest u pacientů podstupujících katetrizaci močového měchýře. 2016. Bakalářská práce pro získání titulu bakaláře v klinické laboratoři. Technická univerzita v Ambato. Ekvádor.
3. Britannia Laboratories. CLED střední. K dispozici na adrese: britanialab.com.
4. Renylab Laboratories. Návod k použití, CLED Agar. 2013 K dispozici na adrese: es.renylab.ind.br.
5. Kultivované laboratoře. Základní příručka mikrobiologie. K dispozici na adrese: ictsl.net.
6. Muñoz P, Cercenado E, Rodríguez-Créixems M, Díaz MD, Vicente T, Bouza E. Volba agaru CLED v kultivaci moči. Perspektivní a srovnávací hodnocení. Diagn Microbiol Infect Dis. 1992; 15 (4): 287-90.
7. García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Praktická klinická mikrobiologie. University of Cadiz, 2. vydání. UCA Publications Service.