CZAPEKŮV AGAR: ODŮVODNĚNÍ, PŘÍPRAVA, POUŽITÍ A OMEZENÍ - BIOLOGIE - 2025

Czapek (CZA) je selektivní pevné prostředí speciálně pro pěstování saprofytických bakterií a hub. Vytvořil ji botanik Friedrich Johann Franz Czapek, polského původu a americký chemik Arthur Wayland Dox; z tohoto důvodu je tento agar také známý jako médium Czapek-Dox.

Původní médium bylo kapalné, ale později byl přidán agar, aby se z něj stalo pevné médium. Czapekovo médium je složeno z dusičnanu sodného, ​​bifosforečnanu draselného, ​​síranu hořečnatého, chloridu draselného, ​​síranu železnatého, sacharózy, agaru a destilované vody.

Agap Czapek A. Aspergillus parasiticus B. Aspergillus fumigatus Zdroj: A. Medmyco / B. Foto: Dr. David Midgley. Wikipedia.com

PH agaru Czapek je 7,3, ale existuje varianta, do které se přidá 10% kyselina mléčná, jejíž pH zůstává 3,5. Toto kyselé médium se používá pro kultivaci acidofilních mikroorganismů.

Na druhé straně některé komerční domy upravily složení Czapekova agaru změnou síranu hořečnatého a fosforečnanu draselného za glycerofosfát; tato modifikace zabraňuje tvorbě sraženiny fosforečnanu hořečnatého pozorované u konvenčního vzorce. Stejně tak existuje další varianta, do které se přidává kvasnicový extrakt.

Nakonec je Czapekův agar doporučován Americkou asociací veřejného zdraví APHA pro studium Actinomycetes sp, Aspergillus sp, Paecilomyces sp a Penicillium sp. Tyto druhy jsou charakterizovány environmentálními mikroorganismy a oportunními patogeny.

Základ

Toto médium obsahuje sacharózu; Tento uhlohydrát slouží jako zdroj uhlíku, zatímco dusičnan sodný je zdrojem dusíku, ale na rozdíl od jiných médií je dodávaný dusík anorganický.

Z tohoto důvodu je Czapekovo médium považováno za selektivní, protože pouze mikroorganismy schopné používat anorganické sloučeniny jako jediný zdroj dusíku mohou růst.

Jako regulátor osmolarity média je bipotrasfosfát. Síran hořečnatý, chlorid draselný a síran železnatý poskytují zásadní minerály pro růst saprofytických (volně žijících) mikroorganismů. Tento vzorec tvoří sraženinu fosforečnanu hořečnatého.

Nakonec je agar-agar sloučenina, která poskytuje pevné konzistenci média a voda je rozpouštědlem pro všechny složky.

S modifikovaným vzorcem Czapek agaru nedochází k tvorbě sraženin a zlepšuje růstový výkon některých hub.

Extrémní kyselost Acid Czapek Agar z něj dělá selektivnější médium, umožňující pouze růst acidofilních mikroorganismů, schopných využívat anorganický dusík. Mezitím Czapek-kvasnicový agar zlepšuje výkonnost některých hub.

Příprava

Střední Czapek-Dox

Naváží se 49 g dehydratovaného kultivačního média a rozpustí se v destilované vodě. Teplo zahřejte až do varu. Směs se třepe, dokud se úplně nerozpustí.

-Zapek Agar Wedges

Rozpuštěná směs se rozdělí do zkumavek a autoklávuje se při 121 ° C po dobu 15 minut. Při vyjímání z autoklávu homogenizujte před položením zkumavek a nechte ztuhnout.

- Platební agarové desky

Rozpuštěná směs se autoklávuje při 121 ° C po dobu 15 minut a nechá se vychladnout na 50 ° C, homogenizuje se a nalije 20 ml do sterilních Petriho misek. Nechte ztuhnout, obraťte se a uložte do chladničky do použití.

Hodnota pH by měla zůstat na 7,3 ± 0,2. Barva dehydratovaného média je bílá a připravené médium je světle jantarové, mírně zakalené v důsledku přítomnosti flokulační sraženiny.

Czapekovo médium při kyselém pH

Připravte, jak již bylo popsáno, ale přidejte 10 ml sterilní 10% kyseliny mléčné na každý litr připraveného média. Upravené Czapekovo médium by mělo mít pH 3,5 ± 0,2.

Upravené Czapekovo médium

Naváží se 45,4 g dehydratovaného média a rozpustí se v 1 litru vody. Zbytek přípravku je stejný, jako je popsáno výše. Barva dehydratovaného média je bílá a připravené médium je bělavé. Konečné pH média je 6,8 ± 0,2.

Czapek-kvasinkové médium

Také se nazývá Czapek Yeast Extract Agar (CYA). Obsahuje prvky klasického Czapekova agaru plus kvasnicový extrakt.

Použití

Czapekovo médium se používá k vyhledávání saprofytických mikroorganismů ve vzorcích půdy, zeleniny, obilí, vzduchu, hmyzu.

Czapekův agar při kyselém pH se používá pro růst acidofilních mikroorganismů, zatímco modifikovaný Czapekův agar je zvláště užitečný pro tvorbu chlamydospor v druzích komplexu Candida albicans.

Nakonec je Czapek-kvasnicový agar velmi užitečný pro izolaci Aspergillus a Penicillium.

Zaseté

-Zapekový agar

Při hledání aktinomycet v půdě se postupuje takto: vzorek se po dobu 30 minut ošetří fenolizovanou vodou a potom se na Czapekův agar vyseje 1 ml suspenze. Inkubujte při 28 ° C po dobu 5 až 7 dnů.

U vzorků zeleniny, obilí a hmyzu jsou umístěny přímo na agar. Můžete také naředit a naočkovat 0,1 ml na povrch agaru.

-Modifikovaný Czapekův agar

Pro očkování se používá přímá smyčka nebo jehla, impregnuje se tamponem a agar se naočkuje propíchnutím, dokud se nedotkne základny destičky. Inkubujte po dobu 24 hodin při 28 ° C a zkoumejte pod mikroskopem nad a pod destičkou, zda se nevytvořily chlamydospory.

Inkubační teplota a čas

Inkubační teplota a doba se liší v závislosti na typu izolovaného mikroorganismu. Destičky se obvykle inkubují jeden až dva týdny v teplotním rozmezí 20 až 25 ° C.

Pro některé kmeny však existují specifické podmínky. Například většina druhů rodu Aspergillus roste optimálně při 30 ° C; avšak A. fumigatus roste při 50 ° C

Pokud jde o inkubační dobu, jeden nebo dva týdny je normální, Candida albicans se však může vyvinout za 24 až 48 hodin při 25 ° C.

Charakteristiky některých kolonií na tomto médiu

-Penicillium atrovenetum

Vyvíjí se za 12 dní inkubace při 27 ° C. Jejich kolonie jsou malé (25 mm).

Kolonie mají sametový vzhled, s definovaným bílým okrajem a modrozeleným odstínem ve středu, který s věkem zezeluje. Zadní strana kolonie je oranžová, díky níž je uprostřed stejná barva díky tvorbě pigmentu.

- Aspergillus niger

Vyvíjí se s bílými až žlutými myceliem a černými spory.

-Candida albicans

Vznikají krémové světle béžové kolonie. V modifikovaném Czapekově agaru tvoří chlamydospory.

- Aspergillus parasiticus

Tmavě zelené mycelium se vyvíjí za 7 dní při 25 ° C.

QA

Pro vyhodnocení kvality kultivačního média mohou být osety certifikované kontrolní kmeny, jako například: Aspergillus niger MKTA 16404, Candida albicans MKTA 10231.

Aspergillus niger vyvine bílé až žluté mycelium a černé spory přibližně za 5 dnů, zatímco Candida albicans bude mít uspokojivý růst během 24 hodin inkubace při 25 ° C; kolonie jsou krémově zbarvené.

Omezení

Některé studie odhalily, že pro získání Actinomycetes je agar s nejlepším výnosem bramborový dextrózový agar, přičemž Czapekův agar je na druhém místě, ale pro získání Aspergillus a Penicillium je agar Czapek ten, který poskytuje nejvyšší míru výtěžku.

Reference

1. Dávila M., et al. Antagonistické aktinomycety proti fytopatogenním hubám zemědělského významu. Mex. Věda. Agríc 2013, 4 (8): 1187-1196. K dispozici na adrese: scielo.org.
2. Luna M, Lozada Y, pšenice Á. Izolace kmenů Aspergillus niger produkujících ochratoxin A v uložené zelené kávě (Coffea arabica). Mex. Mic. 2010; 32: 63-68. K dispozici na adrese.scielo.org.
3. Přispěvatelé Wikipedie. Czapek střední. Wikipedia, encyklopedie zdarma. 13. ledna 2019, 20:30 UTC. K dispozici na adrese: en.wikipedia.org
4. Conda Pronadisa Laboratories. Upravený Czapek-Dox Agar. K dispozici na adrese: condalab.com
5. Kultura Media Microkit. Czapek-Dox Agar. Diosponible in: Medioscultivo.com