Agar Endo nebo Endo médium je pevné médium, diferenciální a s určitou mírou selektivity kultury. Původní receptura byla vytvořena Endem v roce 1904 k odlišení fermentace laktózy od nefermentujících bakterií. Zpočátku to bylo navržené pro izolaci Salmonella typhi, ale později cíl média se obrátil k hledání koliform.
Princip endo agaru zůstal, ale jeho složení prošlo v průběhu let nespočetnými změnami. V současné době se médium skládá z peptického trávení živočišných tkání, laktózy, hydrogenfosforečnanu draselného, siřičitanu sodného, bazického fuchsinu a agaru.
A: Virgin Endo Agar B: Naočkovaný endo agar, uprostřed agaru si můžete všimnout kovového lesku kmene E. coli. Zdroj: A: Strolch1983 / B: LenkaM
Hlavní použití média bylo spojeno s izolací a diferenciací gramnegativních bacilů patřících do čeledi Enterobacteriaceae a do dalších blízkých rodin.
Po dlouhou dobu se používal při detekci koliformních bakterií ve vodě, mléčných výrobcích a ve vzorcích potravin, ale dnes bylo používání tohoto média nahrazeno jinými s podobnými funkcemi. Některé mikrobiologické laboratoře však tento agar používají k izolaci Enterobacteriaceae ze vzorků klinického původu.
Základ
Endo agar obsahuje peptony, které slouží jako zdroj aminokyselin, dusíku, uhlíku a energie, které jsou nezbytné pro růst nenáročných mikroorganismů.
Na druhé straně, mírně selektivní charakter agaru je zajištěn přidáním siřičitanu sodného a bazického fuchsinu; obě složky částečně nebo úplně inhibují růst většiny grampozitivních bakterií.
Rozdílný charakter je dán přítomností fermentovatelného uhlohydrátu, kterým je v tomto případě laktóza a bazický fuchsin, který také slouží jako indikátor pH.
Gramnegativní bakterie, které rostou na tomto agaru a jsou schopné fermentovat laktózu, vytvoří silné růžové kolonie; je patognomonií Escherichia coli a vytváří tmavě červené kolonie s duhovým nazelenalým kovovým leskem. To je způsobeno vysokou produkcí kyselin fermentací uhlohydrátů.
Je třeba poznamenat, že médium kolem kolonií také změní silnou růžovou barvu. Zatímco nelaktózové fermentující grampozitivní tyčinky tvoří bledě narůžovělé kolonie podobné středním nebo bezbarvým.
Hydrogenfosforečnan draselný vyrovnává pH média a agar je složkou, která poskytuje pevnou konzistenci.
Příprava
Endo agar
Naváží se 41,5 g dehydratovaného média a rozpustí se v 1 litru destilované vody. Směs se zahřívá za častého míchání až do úplného rozpuštění média. Sterilizujte v autoklávu při 121 ° C a tlaku 15 lb po dobu 15 minut.
Při vyjímání z autoklávu nechte vychladnout na teplotu přibližně 45 - 50 ° C, před podáváním protřepejte, aby se homogenizoval. Nalijte 20 ml do sterilních Petriho misek.
Před uskladněním v chladničce nechte destičky ztuhnout, převrátit a uložit na plaketu nebo zabalit do tmavého papíru. Je velmi důležité chránit připravené médium před přímým světlem. Nejlepší postup je připravit přesnou částku, kterou budete potřebovat.
Pokud jsou desky uloženy v chladničce, měly by se před použitím nechat zahřát.
PH média by mělo být mezi 7,2 a 7,6 a barva připraveného média je světle růžová.
Varianta agaru M-Endo
Existuje další verze endo agaru (m-Endo), která následuje vzorec McCarthy, Delaney a Grasso, který obsahuje více sloučenin a liší se ve formě přípravy.
Tato varianta obsahuje: laktózu, tryptózu, enzymatické štěpení kaseinu, enzymatické štěpení živočišné tkáně, chlorid sodný, hydrogenfosforečnan draselný, siričitan sodný, kvasnicový extrakt, monobazický fosforečnan draselný, bazický fuchsin, deoxycholát sodný, laurylsulfát sodík a agar.
V tomto případě se zváží 51 g dehydratovaného média a suspenduje se v 1 litru destilované vody obsahující 20 ml ethanolu.
Za stálého míchání mírně zahřívejte, dokud se médium úplně nerozpustí. Nemělo by být přehříváno a nemělo by být autoklávováno. Jakmile je směs homogenní, podávejte ji ve sterilních Petriho miskách a nechte ztuhnout.
Použití
V některých zemích se stále používá k počítání celkových a fekálních koliformních bakterií ve vzorcích potravin a vody, zejména přítomnost Escherichia coli jako hlavního ukazatele fekální kontaminace.
M-Endo Agar je doporučován Americkou asociací veřejného zdraví (APHA) pro monitorování a kontrolu programů dezinfekce a čištění odpadních vod, jakož i pro hodnocení kvality pitné vody.
Nejčastěji používanou metodou je membránová filtrace po obohacení vzorku laurylsulfátovým bujónem po dobu 2 až 4 hodin.
Může být také použit jako náhrada za EMB agar v mikrobiologické analýze potravin a vody nejpravděpodobnější technikou číslování (MPN), konkrétně v úplné potvrzovací fázi pro potvrzení přítomnosti E. coli z zakalených vývarů EC.
QA
Známé nebo certifikované kontrolní kmeny se vysejí, aby se vyhodnotila kvalita připravené endo agarové šarže.
Mezi kmeny, které mohou být použity pro tento účel, patří: Escherichia coli ATCC 25922, Escherichia coli ATCC 11775, Enterobacter cloacae ATCC 13047, Klebsiella pneumoniae ATCC 13883, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Shigella flexneri ATCC 12022, Proteus miracaliscus ATCC 1170014CCCC 1400314CCCC.
Kmeny jsou naočkovány vyčerpáním a inkubovány při aerobióze při 37 ° C po dobu 24 hodin.
Očekávané výsledky jsou:
- Pro Escherichia coli: silné červené kolonie s kovovým leskem.
- U E. cloacae a K. pneumoniae by kolonie měly být růžové mukoidy.
- V případě S. typhimurium, S. flexneri a P. mirabilis jsou kolonie obvykle světle růžové nebo bezbarvé.
- Očekává se, že E. faecalis bude částečně inhibován, a proto musí být jeho růst slabý s velmi malými růžovými koloniemi.
Omezení
-Endo médium má nízkou selektivní sílu, proto je možné, že některé grampozitivní mikroorganismy, jako je Staphylococcus, Enterococcus a dokonce i kvasinky, mohou růst.
- V tomto médiu se mohou vyvinout jiné bacily, které nepatří do rodiny Enterobacteriaceae, jako je Pseudomonas sp a Aeromonas sp. Charakteristiky těchto kmenů jsou bezbarvé nepravidelné kolonie.
- Toto připravené médium je velmi citlivé na světlo, proto jeho dlouhodobé vystavení zhoršuje indikátorový systém a nenávratně poškozuje médium.
- Složky média jsou považovány za karcinogenní, proto by se nemělo zabránit přímému kontaktu.
- Dehydratované médium je velmi hygroskopické a musí být uchováváno v původním obalu při pokojové teplotě, pevně uzavřeno a v suchém prostředí.
Reference
- Laboratoře BD. Endo Agar. 2013. K dispozici na adrese: bd.com
- Neogen Laboratories. M Endo Agar. K dispozici na adrese: foodsafety.neogen.com
- Endo Agar. Wikipedia, encyklopedie zdarma. 7. září 2017, 08:27 UTC. 28. února 2019, 22:55. K dispozici na adrese: en.wikipedia.
- MercK Laboratory. Endo agar. 2019. K dispozici na adrese: merckmillipore.com
- Technické listy Laboratoře. M –Endo Agar LES. 2015.K dispozici na: liofilchem.net