KUKUŘIČNÁ MOUKA: POZADÍ, PŘÍPRAVA A POUŽITÍ - BIOLOGIE - 2025

Agar kukuřičná moučka je pevný kultivační médium, nízká nutriční energie, což je užitečné pro subkultivaci určitých hub a pro demonstraci chlamydospór v kmenů Candida albicans komplex. V angličtině je znám jako Corn Meal Agar.

Běžné kukuřičné médium má velmi jednoduché složení, obsahuje kukuřičnou mouku, agar-agar a vodu. Díky nízké výživové hladině je ideální pro použití při udržování plísňových kmenů po střední dobu, zejména u černých hub.

A. Grafické znázornění komplexu Candida albicans na agaru kukuřičné mouky. B. Chlamydospory komplexu Candida albicans, pozorované pod mikroskopem, vytvořené na kukuřičném agaru. Zdroj: A. GrahamColm / B. Autor: CDC / Dr. William Kaplan, se svolením: Knihovna obrazů veřejného zdraví.

Sporulace komplexu Candida albicans je v tomto médiu zvýhodněna, pokud se během přípravy agaru přidá 1% Tween 80. Tvorba chlamydospor je charakteristická pro tento druh a prakticky jediný, který ovlivňuje člověka.

Existují i ​​jiné druhy, které tvoří chlamydospory, ale je nepravděpodobné, že by ovlivnily člověka, jako je Candida australis, přítomný v tučňákových trusech nebo C. clausenii, což je saprofyt jen zřídka. Podobně je mohou tvořit druhy C. stellatoidea a C. tropicalis.

Na druhé straně přidání glukózy do kukuřičného média podporuje tvorbu pigmentů v kmenech Trichophytom rubrum.

Je důležité zdůraznit, že v agaru kukuřičné mouky se vyskytují houby, které netvoří hyfy nebo pseudohyphae, například Cryptococcus neoformans, které se liší od ostatních rodů.

Kukuřičný agar lze připravovat doma v laboratoři nebo lze také použít komerční média.

Základ

Kukuřičná moučka je substrát, agar je ztužující činidlo a voda je rozpouštědlo.

Kukuřičný agar lze doplnit doplněním 80 (sorbitan monooleát nebo polysorbát polyester 80). Tato sloučenina snižuje povrchové napětí média díky jeho emulgační schopnosti.

Vytváří také nepřátelské prostředí, které inhibuje přehnané množení buněk a stimuluje růst hyf, a také podporuje produkci chlamydospor; ten považoval struktury odporu. Tato struktura pomáhá při identifikaci druhu Candida albicans.

Glukóza v tomto médiu zvyšuje pigmentovou kapacitu některých hub.

Je třeba poznamenat, že kukuřičné médium s glukózou není užitečné pro demonstraci chlamydospor v komplexu Candida albicans.

Příprava

Příprava kukuřičného agaru

Naváží se 47 g žluté kukuřičné mouky a rozpustí se v 500 ml destilované vody. Zahřívejte na 60 ° C za stálého míchání přípravku po dobu přibližně 1 hodiny. Poté se filtruje přes kus gázy a bavlny, případně se může znovu filtrovat průchodem přípravku přes filtrační papír Whatman č. 2.

Doplňte objem na 1000 ml destilovanou vodou. Přidá se 17 g agar-agaru, zahřívá se, dokud se nerozpustí. Autokláv po dobu 15 minut při 121 ° C.

Podávejte ve sterilních Petriho miskách. Uchovávejte v chladničce.

Barva připraveného média je bělavá s hrudkovitým vzhledem.

Pokud chcete připravit kukuřičnou mouku s glukózou na výše popsaný přípravek, přidejte 10 g glukózy.

Komerční kukuřičná mouka

Naváží se 17 g dehydratovaného média a rozpustí se v 1 litru destilované vody. Směs může být zahřátá, jemně se třepe, aby se úplně rozpustila. Sterilizujte v autoklávu při 121 ° C, 15 lb, po dobu 15 minut.

Nalijte do sterilních Petriho misek. Nechte ztuhnout. Obraťte se a uchovávejte v chladničce až do použití. Před použitím temperujte.

Hodnota pH by měla být 6,0 ± 0,2 při 25 ° C.

Kukuřičná mouka agar s Tween 80

Pro splnění normy ISO 18416 musí být kukuřičný agar připraven takto:

Navážte 65 gramů na litr a přidejte 10 ml Tween 80. Zahřívejte a vařte několik minut, dokud se nerozpustí, dávejte pozor, aby se příliš nepřehříval. Sterilizujte 15 minut při 121 ° C.

Kukuřičná mouka s glukózou

Aby se zlepšila chromogenní síla kolonií Trichophyton rubrum a odlišila se od T. mentagrophytes, lze do původního vzorce přidat 0,2% glukózy. Nemusíte mít Tween 80, protože glukóza inhibuje tvorbu chlamydospor.

Použití

Hlavně je použití kukuřičného agaru určeno ke studiu kmenů Candida, což pomáhá jejich identifikaci prostřednictvím charakteristického pozorování chlamydospor u druhů albicans. To znamená, že použití tohoto agaru slouží jako pomocný způsob identifikace těchto kvasinek.

Na tomto agaru se mohou vyvinout jak saprofytické, tak patogenní druhy, ale každý tvoří charakteristické myceliální struktury. Například druh rodu Torulopsis neprodukuje mycelium a množí se pouze blastokonidiemi.

Podobně druhy Trichosporon a Geotrichum produkují arthroconidia na kukuřičném agaru a někdy je obtížné rozlišovat mezi jedním a druhým.

Arthroconidia z rodu Geotrichum vytváří prodloužení hyf, které připomínají hokejku.

Také při identifikaci Trichophytom rubrum je užitečná výroba pigmentů pomocí kukuřičné mouky s přídavkem glukózy.

Zaseté

Podezřelé kolonie Candida získané v primárním kultivačním médiu - agar Sabouraud - z klinických vzorků, kosmetika, půda jsou mimo jiné kultivovány na agaru kukuřičné mouky. Médium se naočkuje a inkubuje se při 22 ° C po dobu 24 až 48 hodin. V případě potřeby lze inkubační dobu prodloužit.

Ukázka Chlamydospore

Za tímto účelem musí být kukuřičná mouka s Tween 80 naočkována technikou Dalmau. Tato metoda spočívá v odebrání části podezřelé kolonie platinovou rukojetí a provedením tří paralelních řezů uprostřed, přičemž rukojeť se udržuje na 45 °. Řezy by měly být od sebe odděleny vzdáleností 1 cm.

Následně se na zaseté pruhy položí předtím plamenný krycí předmět tak, že polovina je zakrytá a druhá je odkryta.

Inkubujte naočkované plotny při 30 ° C po dobu 48-72 hodin a poté prozkoumejte pod mikroskopem krycí sklíčko.

Údržba plísňových kmenů

Za účelem udržování kmenů se naočkované a pěstované plotny uchovávají v chladničce (4 až 8 ° C). Tímto způsobem mohou trvat několik týdnů a mohou být použity pro účely výuky nebo výzkumu.

QA

Pro kontrolu sterility je destička inkubována bez inokulace při pokojové teplotě, očekává se, že nedojde k žádnému růstu nebo změně barvy.

Pro kontrolu kvality mohou být zasety známé kmeny, jako například: Staphylococcus aureus, ATCC 6538, Escherichia coli ATCC 25922, Aspergillus niger ATCC 16404, Candida albicans ATCC 1023, Saccharomyces cerevisiae ATCC 9763.

Očekávané výsledky jsou částečnou inhibicí S. aureus a E. coli. U ostatních kmenů se očekává uspokojivý růst.

Aspergillus niger roste s černými a sporovanými koloniemi v přibližné době 5 dnů inkubace.

Kolonie kvasinek Candida albicans s produkcí chlamydospor.

Saccharomyces cerevisiae produkují velké kvasinkové buňky.

Omezení

Ve spodní části destičky se vytvoří žlutá sraženina, která by neměla být zaměňována s koloniemi.

Reference

1. Neogen Laboratories. Agar z kukuřičné mouky. K dispozici na adrese: foodsafety.neogen.com.
2. Kultura Media Microkit. Agar z kukuřičné mouky. K dispozici na adrese: Medioscultivo.com.
3. Linares M, Solís F. Průvodce kvasinkami. K dispozici na adrese: http: //www.guia.revibero.
4. Urcia F, Guevara M. Rev. Perú Med.Exp. Public Health, 2002; 19 (4): 206-208. K dispozici na adrese: Scielo.com
5. Casas-Rincón G. Obecná mykologie. 1994. 2. ed. Central University of Venezuela, Library Editions. Venezuela Caracas.
6. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey a Scott Mikrobiologická diagnostika. 12 ed. Editorial Panamericana SA Argentina.
7. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologická diagnostika. 5. ed. Editorial Panamericana SA Argentina.
8. Castillo E. Srovnávací studie některých makro a mikroskopických metod pro izolaci a rozpoznávání rodu Candida. Kolumbijský rev. Z Pharmaceutical Chemical Sciences. 1970; 3 (1): 33-57. K dispozici na adrese: Ciencias.unal.edu.co