Agar Hektoen nebo Hektoen enterický agar pevném médiu je selektivní a diferenciální kultury. Byl vytvořen v Hektoenově institutu Kingem a Metzgerem pro izolaci enteropatogenních bakterií rodů Shigella a Salmonella.
Médium se skládá z proteosového peptonu, kvasničného extraktu, žlučových solí, laktózy, sacharózy, salicinu, thiosíranu sodného, chloridu sodného, citrátu železa, citrátu amonného, bromtymolové modři, kyselého fuchsinu a agaru. Tato formulace umožňuje odlišit rody Shigella a Salmonella od zbytku bakterií schopných růstu v tomto médiu.
A. Virgin Hektoenův agar B. Naočkovaný Hektoenův agar. Zdroj: Flickr.com/ Původním uploaderem byl Philippinjl na francouzské Wikipedii.
Přestože existují jiná média se stejnou funkcí jako Hektoenův agar, má ve srovnání s jinými médii větší výhodu, zejména pokud chcete obnovit druh Shigella.
Druhy obou pohlaví způsobují závažné gastrointestinální problémy u lidí v důsledku konzumace kontaminované potravy; proto je přenos fekální - ústní. Proto je použití agaru Hektoen indikováno hlavně v mikrobiologické analýze vzorků stolice a potravin.
Základ
Hektoen Agar obsahuje peptony a kvasnicový extrakt jako zdroj živin a poskytuje základní prvky pro mikrobiální vývoj.
Má však také žlučové soli, které působí inhibicí růstu některých bakterií, zejména gram-pozitivních a některých gram-negativních. Z tohoto důvodu se považuje za selektivní médium.
Na druhé straně, Hektoenův agar je diferenciální médium. Tato vlastnost je dána přítomností fermentovatelných uhlohydrátů, jako je laktóza, sacharóza a salicin, spolu se systémem indikátoru pH, představovaným bromtymolovou modří a kyselým fuchsinem.
Všechny bakterie schopné růstu na tomto médiu, které nepatří do rodu Salmonella a Shigella, vyvinou kolonie lososa nebo pomeranče s výjimkou rodu Proteus. To je způsobeno fermentací jednoho nebo více přítomných sacharidů, které okysličují médium, což způsobí, že se indikátor pH změní.
Rod Shigella a Salmonella není schopen fermentovat žádný z přítomných uhlohydrátů, přičemž jako zdroj energie používá pouze peptony, které alkalizují médium, a proto jsou jejich kolonie modrozelené.
Bakterie schopné tvořit sirovodík (bezbarvý plyn) lze také rozlišit v tomto médiu. Thiosíran sodný působí jako zdroj síry, zatímco vývojem je citrát železa. Obě sloučeniny umožňují tvorbu černé sraženiny sulfidu železa, která ukazuje reakci.
Černá sraženina ve středu kolonie s průhledným halom kolem ní dává vzhled rybí oko. Tato charakteristika naznačuje přítomnost rodu Salmonella.
Nakonec chlorid sodný udržuje osmotickou rovnováhu a agar zajišťuje pevné konzistenci média.
Příprava
Naváží se 76 g dehydratovaného média a rozpustí se v litru destilované vody. Směs se důkladně protřepe a nechá se 10 až 15 minut odpočívat. Může být zahříván a vařen, což umožňuje rotační pohyby až do úplného rozpuštění. Toto médium není autoklávováno.
Když médium dosáhne teploty přibližně 45 ° C, nalije se přímo do sterilních Petriho misek objem 20 ml.
Agar se nechá ztuhnout. V té době jsou připraveni k použití. Doporučuje se používat ihned. Pokud to není možné, uchovávají se v chladničce až do použití.
Destičky by měly být vyjmuty z chladničky předem před naočkováním, aby byly zahřáté na pokojovou teplotu.
PH média by mělo být 7,5 ± 0,2. Barva dehydratovaného média je fialová a připravené médium je nahnědle zelené.
Použití
Pro vyhledávání bakterií rodu Shigella a Salmonella ve vzorcích stolice a potravin se doporučuje použití agaru Hektoen.
Možnost izolace těchto bakterií je značně zvýšena, pokud je vzorek předem obohacen o speciální vývary, jako je selenitový vývar, cystinový selenitový vývar, tetrathionátový vývar atd.
Inokulum musí být silné a setí se provádí pruhováním. Destičky se inkubují při 37 ° C po dobu 24 až 48 hodin v aerobióze.
Doporučuje se inkubace po dobu 48 hodin, protože charakteristiky kolonií jsou jasnější pro jejich interpretaci a diferenciaci v tomto okamžiku.
QA
K provedení kontroly kvality na tomto médiu se používají certifikované bakteriální kmeny, jako například: Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Shigella flexneri ATCC 12022 a Shigella sonnei ATCC 25931.
Očekávané výsledky jsou následující: Salmonella typhimurium a Salmonella enteritidis by se měly vyvinout modrozelené kolonie s černým středem nebo bez něj. Zatímco druh Shigella poroste jako modrozelené kolonie.
Mohou být také zahrnuty kmeny Escherichia coli ATCC 29212, Proteus mirabilis, Klebsiella pneumoniae ATCC 700603, Enterococcus faecalis ATCC 29212 a Staphylococcus aureus ATCC 25923.
V těchto případech jsou pozorovanými charakteristikami následující: E. coli a K. pneumoniae vyvinou v tomto médiu kolonie lososo-oranžové, přičemž kolem nich se vytvoří sraženina stejné barvy. Proteus bude vyvíjet modrozelené kolonie s černým středem nebo bez něj.
Zatímco S. aureus a E. faecalis musí být potlačeny, E. faecalis občas dokáže růst jako velmi malé, žluté kolonie.
Na druhé straně, protože toto médium není autoklávováno, je důležité vyhodnotit sterilitu média. Z každé připravené šarže by proto měla být inkubována jedna až dvě nenaočkované plotny při 37 ° C po dobu 24 hodin v aerobióze.
Na talíři se samozřejmě neočekává žádný růst.
Omezení
- Druhy Proteus se mohou vyvíjet v tomto médiu a vlastnosti jejich kolonií lze zaměňovat s druhy Salmonella nebo Shigella. Z tohoto důvodu musí být každá podezřelá kolonie potvrzena biochemickými testy.
- Je nezbytné doprovázet použití tohoto média s jinými méně selektivními agary, protože pokud je hledaný mikroorganismus nalezen v nízkých koncentracích, nemusí se v tomto médiu vyvíjet.
- Během přípravy se nepřehřívat, protože nadměrné teplo mění složení média.
- Obvykle se mohou objevit kolonie laktózy fermentující Salmonella, které mohou zůstat bez povšimnutí.
Reference
- Přispěvatelé Wikipedie. Hektoenský enterický agar. Wikipedia, encyklopedie zdarma. 13. března 2019, 23:38 UTC. K dispozici na:.wikipedia.org / Přístup k 16. březnu 2019.
- Laboratoře BD. Enterický agar BD Hektoen (HE Agar). 2013. K dispozici na adrese: bd.com
- Britannia Laboratories. Hektoenský enterický agar. 2015.K dispozici na: britanialab.com
- Difco Francisco Soria Melguizo Laboratories. Hektoenův agar. K dispozici na adrese: f-soria.es
- Difco & BBL Manual, Hektoen Enteric Agar. 2. vydání. K dispozici na adrese: bd.com/europe