MACCONKEY AGAR: ZDŮVODNĚNÍ, PŘÍPRAVA A POUŽITÍ - BIOLOGIE - 2025

Agar MacConkey je pevné médium, které umožňuje výlučné izolaci gramnegativních bakterií. Z tohoto důvodu je to selektivní médium a také umožňuje rozlišovat mezi fermentací laktózy a nefermentujícími bacily, což z něj činí diferenciální médium. Je to jedno z nejpoužívanějších kultivačních médií v mikrobiologické laboratoři.

Toto médium se používá hlavně k izolaci gramnegativních bacilů patřících do čeledi Enterobacteriaceae, včetně oportunních a enteropatogenních druhů.

Agar MacConkey naočkovaný dvěma typy bakterií. Na levé straně kolonie fermentující laktózu, na pravé straně kolonie ne laktózy.

Může být také použit k izolaci jiných enterických bacil, které žijí v gastrointestinálním traktu, ale nepatří k Enterobacteriaceae, jako jsou Aeromonas sp, Plesiomonas sp.

Konečně může izolovat i jiné ne-glukózově fermentující gramnegativní bacily, které se nacházejí v životním prostředí, vodě nebo půdě, ale mohou to být někdy i oportunní patogeny, jako jsou Pseudomonas sp, Acinetobacter sp, Alcaligenes sp, Chromobacterium violaceum, Stenotrophomonas maltophilia.

Základ

MacConkey agar

Základ tohoto média lze vysvětlit popisem jeho složek, protože každý z nich má účel, který určuje jeho vlastnost.

Žlučové soli a křišťálově fialová

V tomto smyslu má agar MacConkey komplexní složení. V první řadě obsahuje žlučové soli a křišťálovou fialovou.

Tyto prvky jsou zodpovědné za inhibici růstu grampozitivních bakterií a některých náročných gramnegativních bacilů. Na druhé straně upřednostňuje rozvoj gramnegativních bacilů, které nejsou těmito látkami ovlivněny. Jedná se tedy o selektivní médium.

Uvádí se, že je mírně selektivní ve srovnání s jinými médii, která rovněž inhibují růst grampozitivních bakterií a také většiny gramnegativních bakterií.

Peptony, polypektony a laktóza

Obsahuje látky, které poskytují nezbytné živiny mikroorganismům, které se v tomto prostředí vyvíjejí, jako jsou peptony, polypektony a laktóza.

Laktóza je klíčovým bodem pro to, aby médium bylo diferenciální médium, protože u mikroorganismů, které mají schopnost fermentovat laktózu, se vytvoří silné růžové kolonie.

Některé bakterie mohou fermentovat laktózu pomalu nebo slabě, vyvíjet světle růžové kolonie a zůstat laktózově pozitivní.

Ti, kteří nefermentují laktózu, používají jako zdroj energie peptony, produkují amoniak a alkalizují médium. Z tohoto důvodu jsou vzniklé kolonie bezbarvé nebo průhledné.

Indikátor PH

Změna barvy je dosažena pomocí jiné základní sloučeniny, kterou má agar MacConkey. Tato sloučenina je indikátor pH, který je v tomto případě neutrální červeně.

Fermentace laktózy vytváří produkci smíšených kyselin. Okyselují médium na pH pod 6,8.

To způsobí, že se indikátor pH změní na tmavě růžový odstín. Intenzita barvy se může lišit v závislosti na konečném pH.

Destilovaná voda, chlorid sodný a agar

Na druhé straně obsahuje destilovanou vodu a chlorid sodný, které dávají střední hydrataci a osmotickou rovnováhu. Nakonec médium obsahuje agar, což je základ, který zajišťuje konzistenci pevného média.

Připravené agarové médium MacConkey by mělo mít konečné pH upravené na 7,1 ± 0,2.

Příprava

Pro jeden litr MacConkey agaru musí být zváženo 50 g dehydratovaného média, poté vloženo do baňky a rozpuštěno v jednom litru destilované vody. Po 10 minutách stání se zahřívá, míchá se neustále do varu po dobu 1 minuty.

Baňka se poté umístí do autoklávu a sterilizuje se při 121 ° C po dobu 20 minut. Na konci této doby se vyjme z autoklávu a nechá se vychladnout, dokud nedosáhne teploty 45 ° C, aby později sloužil ve sterilních Petriho miskách uvnitř laminární digestoře nebo před Bunsenovým hořákem.

Nechejte ztuhnout a skladujte v převráceném držáku destiček a chraňte před použitím v chladničce při 2-8 ° C.

K získání agaru MacConkey, který inhibuje efekt Swarning produkovaný rodem Proteus, se používá agar MacConkey s nízkým obsahem soli.

Použití konvenčního agaru MacConkey

MacConkey Agar je součástí všech kultivačních médií uspořádaných pro setí klinických vzorků přijatých v laboratoři. Je také užitečný v mikrobiologii potravin a mikrobiologii životního prostředí.

Rozmanitost gramnegativních tyčinek, které rostou v tomto médiu, vyjadřuje fenotypové vlastnosti, které pomáhají stanovit předpokládanou diagnózu daného druhu. Například velikost, barva, konzistence a vůně kolonií jsou některé z charakteristik, které mohou vést.

V tomto médiu druhy Escherichia coli, Klebsiella sp a Enterobacter sp produkují silné růžové kolonie obklopené zónou vysrážené žluči.

Zatímco bakterie jako Citrobacter sp, Providencia sp, Serratia sp a Hafnia sp se mohou objevit po 24 hodinách bezbarvé nebo bledě růžové během 24 až 48 hodin.

Rovněž rod Proteus, Edwadsiella, Salmonella a Shigella produkují bezbarvé nebo průhledné kolonie.

Další varianty agaru MacConkey

Existují i ​​jiné varianty MacConkey Agar, které mají specifické účely. Jsou uvedeny níže:

MacConkey agar se sorbitolem

Toto médium bylo navrženo pro rozlišení enteropatogenního kmene (enterohemoragická Escherichia coli O157: H7) od zbytku kmenů Escherichia coli.

Toto médium vyměňuje uhlohydrát laktózu za sorbitol. Enterohemoragické kmeny E. coli O157: H7 se liší od zbytku, protože nekvasí sorbitol, a proto se získají průhledné kolonie, zatímco zbytek kmenů E. coli fermentuje sorbitol a kolonie jsou silně růžové.

MacConkey agar bez křišťálově fialové, ani soli

Tento agar se výrazně liší od klasického agaru MacConkey, protože nemá fialový krystal a grampozitivní bakterie mohou růst.

Na druhé straně nepřítomnost soli inhibuje výskyt roje na agaru produkovaném některými enterickými bacily, jako jsou bakterie rodu Proteus, a tak usnadňuje izolaci všech přítomných bakterií, včetně grampozitivních bakterií.

MacConkey agar s cefoperazonem

Tato varianta MacConkey agaru byla navržena tak, aby zpočátku izolovala Laribacter hongkongensis a později se ukázalo, že je užitečná pro izolaci Arcobacter butzleri. Oba jsou lehce zakřivené gramnegativní tyčinky odolné vůči cefoperazonu.

Tyto bakterie byly nedávno spojeny s příčinou gastroenteritidy a získaného průjmu u asijských a evropských jedinců, kteří se objevili jako dva silné objevující se patogeny.

Antibiotikum umožňuje inhibovat doprovodnou flóru gastrointestinálního traktu, což zvýhodňuje vývoj těchto bakterií a brání jim v nepovšimnutí, protože vyžadují růst 72 hodin.

Agar MacConkey připravený s mořskou vodou při 10% obj./obj

Tato varianta je užitečná pro hodnocení bakteriálních hygienických ukazatelů fekální kontaminace, včetně celkových koliformních bakterií a fekálních koliformních bakterií v rekreačních slaných vodách (pláže a zátoky).

Cortez et al v roce 2013 prokázali, že takto připravené médium výrazně zvyšuje regeneraci těchto mikroorganismů ve slaném prostředí ve srovnání s použitím agaru MacConkey připraveného destilovanou vodou.

To je způsobeno skutečností, že modifikované médium stimuluje růst bakterií, které jsou fyziologicky ve stavu latence „životaschopné, ale nekultivovatelné“, a proto nejsou obnovitelné v běžných médiích.

Reference

1. Lau SK, Woo PC, Hui WT, et al. Použití agaru cefoperazonu MacConkey pro selektivní izolaci Laribacter hongkongensis. J Clin Microbiol. 2003; 41 (10): 4839-41.
2. MacConkey agar. Wikipedia, encyklopedie zdarma. 4. dubna 2018, 18:16 UTC. 29. prosince 2018, 15:22 en.wikipedia.org
3. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey a Scott Mikrobiologická diagnostika. 12 ed. Argentina. Editorial Panamericana SA
4. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologická diagnostika. (5. vydání). Argentina, Editorial Panamericana SA
5. Cortez J, Ruiz Y, Medina L, Valbuena O. Vliv kultivačních médií připravených s mořskou vodou na zdravotní ukazatele v mořských vodách lázní v Chichiriviche, stát Falcón, Venezuela. Rev Soc Ven Microbiol 2013; 33: 122-128
6. García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Praktická klinická mikrobiologie. University of Cadiz, 2. vydání. UCA Publications Service.