VÝŽIVNÝ AGAR: ZDŮVODNĚNÍ, PŘÍPRAVA A POUŽITÍ - BIOLOGIE - 2025

Živný agar je neselektivní médium a žádný rozdíl pevné kultuře. V tomto médiu rostou všechny druhy bakterií, které z nutričního hlediska nejsou náročné.

Je to jednoduché médium a navzdory svému názvu obsahuje nižší nutriční hodnotu ve srovnání s jinými podobnými médii, jako je mozkový infuzní agar nebo tryptikový sójový agar.

Kolonie počítá na živný agar

Jeho užitečnost v laboratoři je velmi různorodá. Používá se mimo jiné pro subkultivaci druhů, udržování kmenů, počítání kolonií, jako základ pro přípravu krevního agaru.

Podobně lze díky své světle béžové barvě výjimečně rozlišit produkci pigmentů generovaných některými bakteriálními kmeny, jako je například zelenkavý pigment Pseudomonas aeruginosa, cihlový červený pigment produkovaný Serratia marcescens při pokojové teplotě, zlatý žlutý pigment Staphylococcus aureus, mezi ostatními.

Kromě toho je to jedno z nejlevnějších rostoucích médií na trhu.

Základ

Jak již bylo uvedeno výše, jedná se o velmi jednoduché médium, které se při interpretaci spoléhá na poskytování živin pro bakteriální růst bez omezení a bez komplexních reakcí.

Protože je médium průsvitné, je ideální pro počítání kolonií metodou hloubkového výsevu.

Složení

Skládá se převážně z masového nebo kvasnicového extraktu, peptonů nebo želatiny, pankreatického trávení, agar-agaru, chloridu sodného a destilované vody.

Extrakt z masa nebo kvasinek a pepton představují základní zdroje uhlíku a minerálů (dusík, fosfor a síra), které budou bakterie používat jako zdroj energie a růstové faktory.

Podobně agar-agar je základem veškerých pevných kultivačních médií, která nahradí želatinu, která byla první základní sloučeninou používanou Robertem Kochem pro poskytnutí pevné konzistence jeho médiu.

Agar je polysacharid složený z galaktózy, galaktomananu, agarózy a agaropektinu. Nastaví se na 40 ° C a taje téměř 100 ° C.

Chlorid sodný poskytuje médiu osmolaritu nezbytnou pro vývoj bakterií.

Nakonec voda slouží k hydrataci a rozpuštění lyofilizovaných sloučenin. Měla by být použita destilovaná voda upravená na neutrální pH. Voda z vodovodu by neměla být používána, protože obsahuje vápník a hořčík, které mohou reagovat s fosfáty v médiu a tvoří nerozpustné soli.

Příprava

Pro jeden litr živného agaru musí být zváženo 31 g dehydratovaného média. Vložte ji do baňky a rozpusťte v litru destilované vody. Po 5 minutách stání zahřejte zdroj tepla a míchejte nepřetržitě až do varu po dobu 1 nebo 2 minut.

Příprava kultivačního média.

Baňka se poté umístí do autoklávu a sterilizuje se při 121 ° C po dobu 20 minut.

Sterilizace v autoklávu

Na konci této doby se vyjme z autoklávu a podává se ve sterilních Petriho miskách pomocí laminární proudové digestoře nebo Bunsenova hořáku.

Pokud jsou Petriho misky jednorázové (plastové), musí být médium distribuováno, když má agar teplotu přibližně 50 ° C, aby se zabránilo jejich deformaci nadměrným teplem.

Nechejte ztuhnout a skladujte na převráceném držáku destiček a chraňte před použitím do 2-8 ° C.

Před nasazením musí být desky temperovány. Destičky s nutričním agarem by se neměly používat, jsou-li kontaminovány nebo dehydratovány.

PH připraveného média musí být upraveno na 7,3 ± 0,2.

Aplikace

Je to nejjednodušší kultivační médium používané v mikrobiologické laboratoři. Jeho složení je vynikající pro růst nenáročných bakterií.

Jeho hlavní použití jsou vysvětlena níže:

Jako základ pro přípravu krevního agaru

Toto médium se někdy používá jako základ pro přípravu krevního agaru, nejedná se však o nejčastěji používanou bázi.

Stimulujte sporulaci bakterií vytvářejících spóry

Toto kultivační médium je zvláště užitečné pro stimulaci sporulace bakterií vytvářejících spóry, jako je Bacillus sp.

Za tímto účelem se kmen rodu Bacillus setí a inkubuje se 24 hodin při aerobióze při 37 ° C. Jakmile kolonie rostou, deska se vystaví teplotnímu stresu, to znamená, že se teplota v peci zvýší na 44 ° C a nechá se dalších 24 hodin nebo se umístí do chladničky na 24 hodin.

Na konci času se vytvoří skvrny kultury a obarví se Gramovým barvením nebo barvením spór Shaeffer-Fulton. V nich budou pozorovány bacily s endosporami (spory uvnitř bacilů) a exospory (spory mimo bacily).

Údržba kmene

Některé výzkumné nebo univerzitní laboratoře pro podporu výuky vyžadují udržení životaschopných bakterií klinického významu tak dlouho, jak je to možné, aby bylo možné použít bakteriální banku (bakterioteca) pro výzkumnou práci nebo pro přípravu výukových postupů, kde Studenti se naučí manipulovat a identifikovat tyto mikroorganismy.

K tomuto účelu lze použít živný agar, stejně jako infuzní agar mozku a srdce. Agar se připraví, nalije do zkumavek s bakelitovým víčkem a nakloní se na základnu tak, aby agar ztuhnul a vytvořil blok na dně a zkosený povrch (zobák na flétnu).

Každá zkumavka je označena názvem bakterií, které mají být naočkovány, a datem. Každá z bakterií bude naočkována na rámeček a inkubována po dobu 24 hodin. Jakmile kolonie rostou, zkumavky se uloží při pokojové teplotě.

Bakterioteca musí být obnovena od 1 do 3 měsíců, aby nedošlo ke kontaminaci a dehydrataci média a také ke smrti bakterií.

Tímto způsobem lze udržovat pouze nelepivé bakterie.

Počet kolonií

Ačkoli existují specializované prostředky pro počítání kolonií, jako je standardní agar pro počítání, může být pro tento účel použit živný agar, buď očkováním povrchu špachtlí drigalski nebo hloubkou. Z tohoto důvodu je velmi užitečný při mikrobiologické analýze potravin a vody.

Provádění diagnostických testů

Protože je to médium, které neobsahuje krev nebo jiné přísady, je ideální k odebrání kolonií vypěstovaných na tomto médiu k provedení katalázového testu.

Stejně tak je díky své světlé barvě indikováno provádět oxidázové testy přímo na ploše naočkovaného agaru, bez interference.

Obnova mezofilních aerobů z rekreačních slaných vod (Pláže)

Živný agar připravený z 10% mořské vody je užitečný pro hodnocení mezofilních aerobů v plážových vodách.

Tímto způsobem lze ocenit skutečnou úroveň kontaminace vody těmito mikroorganismy, protože u tohoto typu vzorků se výsledky překrývají, když se použijí kultivační média připravená konvenčním způsobem.

Toto bylo demonstrováno Cortezem et al. v roce 2013 ve výzkumné práci.

To lze vysvětlit v důsledku náhlé změny, kterou bakterie procházejí při přechodu z hypersaltedového prostředí do prostředí s nízkým obsahem solí, proto mikroorganismy vstupují do stavu letargie, ve které jsou životaschopné, ale ne kultivovatelné.

Reference

1. "Výživný agar." Wikipedia, encyklopedie zdarma. 13. září 2016, 20:33 UTC. 29. prosince 2018, 21:04 en.wikipedia.org
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey a Scott Mikrobiologická diagnostika. 12 ed. Argentina. Editorial Panamericana SA
3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologická diagnostika. (5. vydání). Argentina, Editorial Panamericana SA
4. Cortez J, Ruiz Y, Medina L, Valbuena O. Vliv kultivačních médií připravených s mořskou vodou na zdravotní ukazatele v mořských vodách lázní v Chichiriviche, stát Falcón, Venezuela. Rev Soc Ven Microbiol 2013; 33: 122-128
5. Paredes V, Dias V, Silva de Almeida M a Cardoso M. Mikrobiologická kvalita vody pro inseminující dávky, pro prasata. Cient.Agro.Amaz. 2013; 1 (2): 42-49.
6. García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Praktická klinická mikrobiologie. University of Cadiz, 2. vydání. UCA Publications Service.