Agar mannitol sůl nebo manitol sůl je pevný střední selektivní a diferenční kultury. Byl vytvořen společností Chapman pro izolaci patogenních grampozitivních koků, zejména Staphylococcus aureus.
Je však také užitečné izolovat Staphylococus epidermidis, který může být někdy přítomen jako oportunní patogen, a Staphylococcus saprophyticus, uznávaný močový patogen, mezi jinými druhy.
A. Fiola s připraveným slaným agarovým agarovým médiem. B. Desky agarového solného mannitolu naočkované fermentujícími a nefermentujícími bakteriálními kmeny mannitolu. Zdroj: A a B: Fotografie pořízené autorem MSc. Marielsa Gil.
Některé Enterococcus jsou schopné růst na tomto médiu, stejně jako určité Gram-pozitivní tyče tvořící spory.
Toto médium je velmi užitečné při analýze klinických vzorků, ale používá se také v mikrobiologické studii potravin a při kontrole kvality průmyslových výrobků, jako jsou kosmetika, léčiva a další.
Slaný mannitolový agar se skládá z výtažků a peptonů z hovězího, tripteinu, mannitolu, chloridu sodného, fenolové červeně a agaru.
Základ
Mannitolový agar je selektivní díky vysoké koncentraci soli. Slanost působí jako inhibiční látka a zabraňuje růstu gramnegativních bakterií.
Rozdíl je také v důsledku přítomnosti uhlohydrátového mannitolu a indikátoru pH fenolové červeně. Z toho bakterie schopné fermentovat mannitol produkují kyseliny, okyselují médium, mění kolonie a médium žluté.
Na druhé straně kolonie, které nekvasí mannitol, rostou v médiu, přičemž živiny získávají masové výtažky a peptony a triptein. Odtud bakterie získávají uhlík, dusík, vitamíny a minerály nezbytné pro jejich růst.
Kolonie v tomto případě mohou být slabé nebo silné růžové a médium zůstává stejné barvy nebo se změní na fuchsii.
Agar je látka poskytující konzistenci média.
Příprava
K přípravě litru slaného mannitolového agaru se pomocí baňky zváží 111 g dehydratovaného média z výhodné komerční společnosti a rozpustí se v 1000 ml destilované vody.
Teplo se aplikuje za častého míchání média, aby se zlepšil proces rozpouštění. Vařte minutu.
Baňka se umístí do autoklávu při 121 ° C po dobu 15 minut.
Na konci této doby vyjměte lahvičku z autoklávu, nechte ji odpočívat a podávejte mezi 15 až 20 ml na sterilních Petriho miskách, když je teplota přibližně 50 až 55 ° C.
Je povoleno ztuhnout, objednávat obráceně na plakárech a ponechat v lednici až do použití. Před naočkováním vzorku počkejte, až destička dosáhne pokojové teploty.
Desky jsou naočkovány pruhováním nebo povrchovým výsevem špachtlí drigalski. Konečné pH připraveného média musí být 7,4 ± 0,2
Barva dehydratovaného média je světle béžová a barva připraveného média je oranžově červená.
Aplikace
Díky své vysoké selektivitě je toto médium ideální pro setí vzorků se smíšenou flórou, v nichž se hledá přítomnost Staphylococus aureus jako hlavního patogenu tohoto rodu.
V tomto smyslu je jedním z nejčastějších způsobů použití mikrobiologické analýzy exsudátů hltanu a výtoků z nosu, zejména k detekci asymptomatických nosičů S. aureus.
Některé země provedly tuto analýzu jako povinný požadavek pro lidi, kteří chtějí pracovat jako prodejci potravin.
Tato kontrola zabraňuje najímání osob, které jsou nositeli S. aureus, čímž se zabrání masivnímu otravě jídlem v důsledku konzumace potravin kontaminovaných stafylokokovým enterotoxinem.
Může být také zahrnut mezi jiným v očkování infekcí rány, krevních kultur, CSF, bronchoalveolárního výplachu.
Solený mannitolový agar je užitečný pro opětnou izolaci kolonií z močových kultur z agaru CLED nebo krevního agaru, jehož Gram odhalil grampozitivní koky ve shlucích.
Platí mimo jiné v mikrobiologické analýze potravin, pitné vody, půdy.
QA
Po přípravě šarže destiček se slaným mannitolovým agarem je vhodné provést kontrolu kvality. Kontrolní kmeny jsou zasety, aby se prokázalo, zda dochází k růstu nebo ne.
Známé kmeny Staphylococcus aureus mohou být použity jako pozitivní kontrola. Měl by uspokojivě růst a vyvíjet žluté kolonie a médium také obrací stejnou barvu.
Podobně je vhodné zahrnout známý kmen Staphylococcus epidermidis. Měl by uspokojivě růst růžovými koloniemi a médium zůstane stejné barvy nebo ztmavne na silnější růžovou.
Jako negativní kontrola se používají kmeny, které by na tomto médiu neměly růst. Například může být pěstován známý kmen Escherichia coli nebo Klebsiella pneumoniae. Očekávaným výsledkem je úplná inhibice, tj. Žádný růst.
Kromě toho musí být inkubována neinokulovaná destička. V něm by neměl být žádný růst ani změna barvy.
Je důležité, aby destička nebyla používána, pokud existují známky poškození, například kontaminace, dehydratace, změna barvy.
Závěrečné myšlenky
Při použití slaného manitolového agarového média je třeba zvážit některé důležité aspekty:
- Získání růstu žlutých kolonií neznamená, že se jedná o Staphylococcus aureus. Je třeba si uvědomit, že některé kmeny Enterococcus jsou schopné růst v tomto médiu a fermentují mannitol, jakož i určité grampozitivní tyčinky vytvářející spóry.
Proto je důležité provést kolonii a test na katalázu.
- Na druhou stranu je třeba vzít v úvahu, že jiné druhy Staphylococcus jiné než aureus jsou také schopné fermentovat mannitol. Proto je důležité subkultivovat kolonii do živného vývaru, který odtamtud vezme a provede koagulační test.
Mezi druhy Staphylococcus klinicky významné pro člověka, který fermentuje mannitol, patří: S. aureus, S. simulans, S. capitis ssp capitis, S. capitis ssp urealyticus, S. xylosus, S. cohnii ssp urealyticum.
Jiní mohou dát variabilní reakci, to je, někdy pozitivní a někdy negativní. Některé z nich jsou S. saprophyticus, S. haemolyticus, S. warneri, S. intermedius.
- Nedoporučuje se odebírat kolonie přímo z mannitolového agaru za účelem provedení koagulačního testu, protože vysoká koncentrace soli v médiu může ovlivnit výsledek.
- Nakonec se doporučuje inkubovat destičky naočkované solným mannitolem po dobu až 48 hodin, protože některé kmeny S. aureus mohou mannitol pomalu fermentovat, i když to není příliš časté.
Reference
- Britannia Laboratories. Agar slaného mannitolu. 2015.K dispozici na: britanialab.com
- "Slaný mannitolový agar". Wikipedia, encyklopedie zdarma. 31. října 2018, 19:08 UTC. 17. ledna 2019, 20:55, k dispozici na adrese: es.wikipedia.org.
- Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologická diagnostika. (5. vydání). Argentina, Editorial Panamericana SA
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey a Scott Mikrobiologická diagnostika. 12 ed. Argentina. Editorial Panamericana SA
- Laboratoře BD. BD mannitolový solný agar. 2013. K dispozici na adrese: bd.com.