Agar Salmonella Shigella také známý jako SS agar je selektivní a diferenciální médium mírně, určené zejména pro izolaci enteropatogenních bakterií rodu Salmonella a Shigella, oba vzorky na životní prostředí, jako je klinická.
Agar SS má komplexní složení; Skládá se z masového výtažku, peptonu, laktózy, žlučových solí, citranu sodného, thiosíranu sodného, citronanu železitého, agaru, neutrální červené, jasně zelené a destilované vody. Vzhledem k jeho velké selektivitě je možné vysévat vzorky s bohatou směsnou flórou.
SS agar s koloniemi Salmonella sp. Zdroj: Manurx27, z Wikimedia Commons
V mikrobiologických laboratořích se médium Salmonella-Shigella široce používá ke zkoumání přítomnosti Salmonella a Shigella ve vzorcích průjmových stolic, odpadních vod, pitné vody a potravy.
Někdy je nutné použít před obohacovací vývar (laktózový vývar) a obohacující vývar (selenitový cystinový vývar) k získání kmenů Salmonella.
Tyto kroky jsou vyžadovány, pokud existuje podezření na existenci salmonel ve velmi malém množství nebo pokud může být kmen zneužíván procesy průmyslové výroby, zejména zpracovanými potravinami. Je také vhodné obohatit vzorky stolice od pacientů, kteří byli léčeni antibiotiky.
Následně může být obohacený bujón naočkován na Salmonella-Shigella agar a další podobná média, jako je xylózový agar, lysin deoxycholát (XLD) a enterický Hektoenův agar (HE).
Základ
Každá složka kultivačního média Salmonella-Shigella má specifickou funkci a směs jako celek poskytuje vlastnosti, které ji charakterizují.
Výživná síla
Extrakt z masa a pepton (štěpený z kaseinu a živočišné tkáně) poskytují potřebné živiny (nitrogeny, uhlík a vitaminy) pro vývoj mikroorganismů schopných tolerovat zbytek složek.
Konzistence
Agar-agar je zodpovědný za zajištění pevné konzistence média.
Selektivní
Toto médium je vysoce selektivní, protože obsahuje žlučové soli, citrát sodný a jasně zelenou. Inhibuje proto růst všech grampozitivních bakterií a většiny gramnegativních bacilů, včetně některých koliform.
Zatímco bakterie rodu Salmonella a některé kmeny Shigella tyto sloučeniny podporují.
Hlavně rod Salmonella je velmi odolný vůči žlučovým solím, a to natolik, že jsou schopni žít ve žlučníku u některých nosných pacientů, kteří neustále prolévají bakterie ve svých stolicích.
Rozdíl
Laktóza je fermentovatelný sacharid, který pomáhá odlišit kmeny fermentující laktózu od kmenů, které nekvasily. Tato vlastnost je doložena přítomností indikátoru pH, kterým je v tomto médiu fenolová červeň.
Kmenové fermentační kmeny dávají červené kolonie, zatímco nefermentující kmeny jsou bezbarvé. Tato vlastnost je důležitá, protože Salmonella a Shigella nefermentují laktózu.
Na druhé straně toto médium obsahuje thiosíran sodný jako zdroj sulfidu a citrát železitý jako zdroj železa. Obě sloučeniny jsou schopné rozlišit bakterie schopné produkovat sirovodík. Tyto reagují za vzniku viditelné, nerozpustné černé sraženiny sulfidu železitého.
Tato vlastnost se nachází u některých kmenů rodu Salmonella. Normálně jsou jejich kolonie ploché bezbarvé s černou tečkou uprostřed. Zbytek salmonelami neprodukují H 2 S a rozvíjet jako bezbarvé kolonie.
Na druhé straně kolonie rodu Shigella jsou ploché bezbarvé bez černění.
Příprava
Příprava tohoto média je velmi jednoduchá.
Naváží se 63 g dehydratovaného komerčního média a rozpustí se v litru destilované vody. Roztok se zahřeje a míchá. Směs může vařit až minuty.
Toto médium nesmí být autoklávováno. Po rozpuštění se podává přímo na jednoduché nebo dvojité sterilní plotny.
Když ztuhnou, jsou uspořádány obráceně na destičkách a až do použití jsou uchovávány v lednici (2-8 ° C).
Médium po přípravě by mělo zůstat při pH 7,2 ± 0,2 a oranžově červené barvy.
Před naočkováním vzorků je důležité nechat desky zahřát se. Původní vzorek může být vyséván přímo, vypouští materiál na část agaru a odtud odtéká.
V případě použití obohaceného bujónu proveďte část selenitového bujónu a zasejte drigalskou špachtlí.
Inkubujte při 37 ° C po dobu 24 hodin v aerobióze.
Mějte na paměti, že počet gramů, které mají být zváženy, a konečné pH média se mohou v jednotlivých komerčních domech lišit. Střední základna vždy přináší indikace pro její přípravu.
Použití
Používá se často při analýze kultury stolice a při mikrobiologickém studiu vzorků odpadních vod, pitné vody a potravin.
Často se připravují dvojité misky, na jedné straně se umístí agar Salmonella-Shigella a na druhé XLD agar.
Omezení
- Některé kmeny Shigella nerostou v tomto médiu. Proto se nedoporučuje k primární izolaci tohoto rodu.
Ne každá průhledná kolonie s černým středem ukazuje na Salmonellu; Biochemické testy musí být provedeny pro správnou identifikaci, protože kolonie některých kmenů Proteus jsou nerozeznatelné od kolonií Salmonella.
- Dehydratované médium se musí postarat o vystavení životnímu prostředí, protože je velmi hygroskopické. Proto musí být uchováván v suchém a dobře uzavřeném prostředí. Otevřeno na velmi krátkou dobu.
-V době, kdy se žlučové soli v médiu mohou vysrážet, vytvoří na agaru obraz podobný podložce, ale to neovlivní výsledky.
- Některé kmeny Shigella mohou pomalu fermentovat laktózu.
QA
Aby se prokázalo, že médium pracuje správně, je vhodné pěstovat známé nebo certifikované kontrolní kmeny a sledovat, zda růst splňuje očekávané vlastnosti.
K tomu lze použít kmeny E. coli, Enterobacter sp, Klebsiella pneumoniae, Shigella flexneri, Salmonella typhimurium nebo Enterococcus faecalis.
Očekávané výsledky jsou:
Enterobacter a Klebsiella ------ velké kolonie a červené nebo růžové mukoidy.
Shigella flexneri ---------- transparentní nebo bezbarvé ploché kolonie.
Salmonella typhimurium ------ bezbarvé kolonie s černými centry.
Enterococcus faecalis -------- celková inhibice.
Reference
- Difco Francisco Soria Melguizo Laboratories. Agar Salmonella-Shigella. 2009. K dispozici na adrese: f-soria.es
- Laboratoř BD. Agar BD Salmonella-Shigella. 2013. K dispozici na adrese: bd.com
- Britannia Laboratories. Agar Salmonella-Shigella. 2015.K dispozici na: britanialab.com
- Valtekova diagnostika. Agar Salmonella-Shigella (SS Agar). K dispozici na adrese: andinamedica.com
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey a Scott Mikrobiologická diagnostika. 12 ed. Editorial Panamericana SA Argentina.
- Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologická diagnostika. 5. ed. Editorial Panamericana SA Argentina.