TRYPTICASEINOVÝ SÓJOVÝ AGAR: ZDŮVODNĚNÍ, PŘÍPRAVA A POUŽITÍ - BIOLOGIE - 2025

Sojový agar trypton nebo Trypticase Soy Agar je pevné kultivační médium, a nutriční neselektivní. Je označen písmeny TSA pro jeho zkratku v anglickém Trypticase Soy Agar. Skládá se z tripteinu, sójového peptonu, chloridu sodného a agaru.

Díky své vysoké výživové síle je ideální pro pěstování středně náročných a nenáročných mikroorganismů. Médium bez dalších doplňků se nedoporučuje pro primární kultury, ale je užitečné mimo jiné pro subkultivování čistých kmenů a jejich udržení životaschopných.

Trypticasein sójový agar klíny v zkumavkách s bakelitovými uzávěry. Zdroj: Fotografie pořízená autorem MSc. Marielsa Gil.

Tento agar také slouží jako základ pro přípravu obohaceného média, jako je krevní agar, zejména pokud je třeba sledovat hemolytické vzorce a namontovat taxony optoquinu a bacitracinu, které jsou vyžadovány při diagnostice Streptococcus pneumoniae a Streptococcus pyogenes.

Na druhé straně je v kombinaci s antibiotiky užitečná pro izolaci klinicky důležitých fakultativních a přísných anaerobních mikroorganismů ze vzorků se smíšenou flórou.

Nakonec složení sójového agaru trypticaseinu a jeho výkonnost splňují požadavky stanovené různými lékopisy (evropským, japonským a severoamerickým).

Základ

Pro správný vývoj bakterií je nezbytná přítomnost energetických zdrojů, jako jsou aminokyseliny, vitamíny, purické a pyrimidinové báze.

V tomto smyslu triptein a sójový pepton poskytují tyto živiny mikroorganismům, což umožňuje jejich plný vývoj. U náročných bakterií je však nutné tento agar doplnit defibrinovanou nebo zahřátou krví, aby se zvýšilo jeho obohacení.

Na druhé straně, pokud se do média přidají antibiotika, stává se selektivním médiem. Lze také přidat 0,6% kvasničného extraktu, aby se podpořila izolace druhů rodu Listeria, zatímco přidání cystinu telluritu a jehněčí krve je ideální pro Corynebacterium diphteriae.

Nakonec chlorid sodný zajišťuje osmotickou rovnováhu média a agar poskytuje pevnou konzistenci.

Příprava

Desky Trypticasein Soy Agar

Pro přípravu sójového agaru tryptikasinu by mělo být v digitální stupnici zváženo 40 g dehydratovaného komerčního média. Je rozpuštěn v jednom litru destilované vody obsažené v baňce.

Směs se nechá 5 minut odpočívat a poté se převede na zdroj tepla, který napomáhá rozpuštění média. Měl by se často míchat a vařit po dobu 1 až 2 minut. Následně se médium sterilizuje v autoklávu při 121 ° C po dobu 15 minut.

Nechá se ochladit na 50 ° C a distribuuje se do sterilních Petriho misek. Nechte ztuhnout, převrátit, objednat na plaquerech a uložit do chladničky.

Konečné pH média by mělo být 7,3 ± 0,2.

Je třeba poznamenat, že barva dehydratovaného kultivačního média je světle béžová a měla by být skladována při teplotě 10 až 35 ° C na suchém místě.

Připravený agar má světlou jantarovou barvu. Připravené destičky by se měly až do použití skladovat v lednici (2-8 ° C).

Desky musí před použitím dosáhnout pokojové teploty.

Desky sójového agarového trypticaseinu doplněné krví

Krevní agar se připravuje přidáním 5% defibrinované krve v době ochlazení sójového agaru trypticaseinu na 50 ° C. Směs se homogenizuje otáčením jemnými pohyby.

Podávejte ve sterilních Petriho miskách. Střední barva by měla být třešňově červená.

Desky sójového agaru trypticaseinu doplněné zahřátou krví

Při přípravě krevního agaru na bázi TSA postupujte stejným způsobem jako výše popsané postupy, ale při opuštění autoklávu nechte jej odpočívat, dokud teplota média nedosáhne přibližně 56 až 70 ° C. V té době je krev umístěna a míchána, dokud médium nezhnědne.

Podávejte ve sterilních Petriho miskách. Barva média je čokoládově hnědá.

Trypticasein Soy Agar Wedges

Postup přípravy agaru je stejný jako postup popsaný pro desky, s tím rozdílem, že místo toho, aby bylo médium podáváno na Petriho miskách, je před sterilizací distribuováno mezi 10 až 12 ml v zkumavkách s bakelitovými kryty.

Následně se zkumavky autoklávují při 121 ° C po dobu 15 minut. Když odcházejí, jsou nakloněni pomocí podpory a nechá se ztuhnout.

Připravené klíny se vysévají podle plochy povrchu a slouží k udržení životaschopnosti některých nenáročných mikroorganismů po stanovenou dobu.

Aplikace

Trypticasein Soy Agar se používá v následujících případech:

-Je základna pro přípravu klasického krevního agaru, který se běžně používá ve většině laboratoří.

- Izolace náročných bakterií.

- Zachování hemolytického vzorce.

- Provádění diagnostických testů.

-Je základna pro přípravu speciálního krevního agaru pro Corynebacterium diphteriae s cystinovým teluritem a jehněčí krví.

- Jako základ pro přípravu jehněčího krevního agaru plus kanamycin-vankomycin pro růst anaerobů, zejména Bacteroides sp.

- Pro udržování nenáročných kmenů (Bacterioteca).

- Aerobní mikrobiální počet při studiu mikrobiálního limitu vzorků vody, životního prostředí, potravin a kosmetických přípravků.

Zaseté

Vzorky lze vysévat přímo na povrch trypticaseinového sójového agaru doplněného krví nebo jinými přísadami. Vysévá se vyčerpáním.

Vzhledem k tomu, že sójové agary s tryptikasinem bez přísad se obecně používají k subkultivaci mikrobiálních kmenů (bakterií nebo kvasinek).

QA

Kontrola sterility

Ke kontrole sterility různých médií připravených se sójovým agarem s tryptikasinovým základem se doporučuje následující: z každé připravené šarže by měly být 1 nebo 2 neinokulované plotny nebo zkumavky inkubovány při 37 ° C po dobu 24 hodin, aby se prokázala jejich sterilita. Ve všech případech musí zůstat bez růstu.

Pokud je zjištěna kontaminace, musí být celá šarže zlikvidována.

Kontrola růstu

Následující bakteriální kmeny mohou být použity ke studiu správného fungování tryptikasinového sójového agaru: Escherichia coli ATCC 8739, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Pseudomonas aerugiosa ATCC 9027 a Enterococcus faecalis ATCC 29212.

Kmeny jsou naočkovány a inkubovány aerobně při 37 ° C po dobu 24 hodin.

Ve všech případech musí být růst uspokojivý.

Lze také použít houby, jako je Candida albicans Complex ATCC 10231 a Aspergillus niger ATCC 16404. Očekává se dobrý růst u obou kmenů.

Regulace růstu a hemolýzy sójového agaru trypticaseinu doplněného krví

K ověření správné funkce krevního agaru připraveného s touto bází lze použít následující kmeny: Streptococcus pyogenes ATCC 19615, Streptococcus pneumoniae ATCC 6305 a Streptococcus pneumoniae ATCC 49619.

Očkují se a inkubují se při 37 ° C v mikroaerofilitě po dobu 24 hodin.

Ve všech případech by růst měl být uspokojivý, přičemž by se mělo brát v úvahu, že u S. pyogenes by měla být pozorována beta-hemolýza (světle halo kolem kolonie) a alfa hemolýza (nazelenalá halo kolem kolonie) by měla být pozorována u obou kmenů S. pneumoniae. kolonie).

Reference

1. Přispěvatelé Wikipedie. Trypticase já jsem agar. Wikipedia, encyklopedie zdarma. 17. prosince 2018, 15:47 UTC. K dispozici na adrese:
2. Britannia Laboratories. Tripteinový sójový agar. 2015.K dispozici na: britanialab.com
3. Neogen Laboratories. Tryptický sójový agar. K dispozici na adrese: foodsafety.neogen.com
4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey a Scott Mikrobiologická diagnostika. 12 ed. Argentina. Editorial Panamericana SA
5. Laboratoře BD. Trypticase já jsem Agar. 2014. K dispozici na:.bd.com