Vizmutu sulfitový agar je pevná střední selektivní a diferenciální kultura, speciálně vyvinutý pro izolaci Salmonella enterica poddruh enterica sérotyp Typhi, mimo jiné druhy Salmonella. Médium je známé jako BSA agar pro jeho zkratku v anglickém agaru bizmutu siřičitého.
Původní vzorec pro siřičitanový agar bizmutu byl vytvořen v roce 1927 Wilsonem a Blairem (Glukóza bizmutu siřičitého železného média); obsahoval siřičitan sodný, glukózu, roztok vizmutu, citrát amonný, síran železnatý a agar-agar.
Růst 48 hodin inkubace Salmonella sp na sulfitovém agaru bizmutu. Zdroj: Pixnio.com Autor: Dr. WR Erving, USCDCP
Dnes existuje modifikace původního média, složeného z masového výtažku, masných a kaseinových peptonů, indikátoru siřičitanu bizmutitého, glukózy, fosforečnanu disodného, síranu železnatého, jasně zelené a agar-agaru.
Existuje mnoho způsobů, jak izolovat druhy Salmonella, ale pokud jde o regeneraci sérotypu Typhi, má bismut-siřičitanový agar oproti nim značnou výhodu, protože ve většině případů se získá velmi nízká nebo žádná regenerace tohoto mikroorganismu..
Při izolaci enteropatogenů je však nutné použít více než jeden druh média, protože agar siřičitan bizmutitý je méně účinný pro jiné druhy salmonel a pro rod Shigella, které jsou inhibovány nebo se vyvíjejí velmi špatně. v tomto agaru.
Je třeba poznamenat, že ze všech druhů Salmonella je sérotyp Typhi jedním z nejdůležitějších enteropatogenů u lidí, což je jeho jediný rezervoár. Tento sérovar způsobuje tyfus, gastroenteritidu, bakterémii a septikémii.
Z tohoto důvodu je důležité tento agar zahrnout do analýzy vzorků vody, fekálií nebo potravin, u nichž existuje podezření na jeho přítomnost.
Základ
Stejně jako většina kultivačních médií obsahuje Bismuth Sulfite Agar živiny podporující bakteriální růst, jako jsou peptony a masový extrakt. Podobně glukóza funguje jako zdroj energie a uhlíku.
Ne všechny bakterie však na tomto médiu porostou, protože agar siričitan bizmutitý je selektivní médium. Obsahuje sloučeniny, které inhibují růst gram-pozitivních mikroorganismů a určitých gram-negativních bakterií. Jedná se o tyto sloučeniny: indikátor siřičitanu bizmutitého a jasně zelené.
Fosforečnan disodný udržuje osmolaritu a pH média.
Navíc, bismutu siřičitan agar je diferenciální střední díky přítomnosti síranu železnatého, což ukazuje, že tvorba H 2 S. H 2 S tvořené bakteriemi reaguje s síranu železnatého a tvoří jasně viditelný nerozpustné černé sraženiny.
Nakonec agar-agar zajišťuje pevné konzistenci média.
Příprava
Naváží se 52,3 g dehydratovaného média a rozpustí se v jednom litru vody. Směs se zahřívá k varu po dobu 1 minuty za častého míchání, dokud se úplně nerozpustí. Nepřehřívejte se příliš. Toto médium není autoklávovatelné, protože extrémní teplo poškozuje kultivační médium.
Před podáváním ve sterilních Petriho miskách se nechá vychladnout na 45 ° C a protřepe se. Doporučuje se vyrábět desky s dobrou tloušťkou. K tomu se do každé destičky nalije 25 ml. Nechte ztuhnout. Vzhledem k tomu, že se jedná o médium, které není sterilizováno, je normální, aby bylo navrženo jeho okamžité použití.
Studie provedená D'aoustem v roce 1977 však ukázala, že dochází k lepšímu zotavení Salmonella typhimurium a Salmonella enteritidis jako středního věku bismut sulfitového agaru, což neovlivňuje výkonnost serovarů Typhi a Paratyphi B.
D'aoust doporučuje používat destičky ve 4. dni chlazení, ačkoli varuje, že se stárnutím média se selektivita snižuje a kmeny Proteus vulgaris se snadněji vyvíjejí.
Z tohoto důvodu je pro vysoce kontaminované vzorky, jako jsou fekálie, výhodné použít čerstvě připravené médium. Jinak použijte 4. den přípravy. Ostatní autoři doporučují používat desky den po jejich přípravě, uložené v chladničce.
Chlazené desky musí být před použitím temperovány. PH média by mělo být 7,5 ± 0,2. Surové médium je béžové a připravené médium je zelenavě šedé opalescentní.
Aplikace
Mezi vzorky, které lze v tomto médiu vysadit, patří vzorky stolice, pitné nebo odpadní vody a potravin.
Aby se izoláty zlepšily, doporučuje se před naočkováním na siřičitanový agens bizmut provést před obohacení ošetření laktózovým bujónem a po obohacení bujónem tetrathionátu nebo seleničitanem cystinu.
Destičky se inkubují při 35 ° C ± 0,2 po dobu 24 až 48 hodin v aerobióze.
Charakteristika kolonií na sulfitovém agaru bizmutu
Na tomto agaru jsou obvykle pozorovány kolonie Salmonella Typhi do 24 hodin s černým středem a obklopené jasně zeleným halo. Zatímco za 48 hodin z důvodu tvorby sirovodíku zcela zčerná.
- Toto médium inhibuje většinu druhů rodu Shigella.
- S. Typhi a S. arizonae mohou dát velmi podobné kolonie.
-The koliformní bakterie, které produkují H 2 S, jako je Proteus a Citrobacter vyrobeny z kolonií podobnými jako u Salmonella, a proto je nutné provádět biochemické identifikačních testů.
- Pro získání izolovaných kolonií musí být provedeno dobré pruhování; Je to jediný způsob, jak sledovat typické vlastnosti kolonií rodu Salmonella.
QA
Pro kontrolu sterility je neinokulovaná destička inkubována při 37 ° C, očekává se, že nedojde k žádnému růstu nebo změně barvy.
Pro kontrolu kvality známé kmeny, jako například:
Escherichia coli ATCC 25922, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella Typhi ATCC 19430, Shigella flexneri ATCC 12022, Enterococcus faecalis ATCC 29212.
Očekává se, že Escherichia coli a Shigella flexneri budou částečně inhibovány vývojem zelenohnědých a hnědých kolonií. Zatímco oba salmonely musí mít vynikající vývoj s černými koloniemi s kovovým leskem a nakonec musí být úplně potlačen Enterococcus faecalis.
Reference
- Wilson, W., a EM McV. Blair. 1. Použití média železo-siřičitanu bizmutitého na izolaci B. typhosus a B. proteus. The Journal of Hygiene, 1927; 26 (4), 374-391. Citováno z.jstor.org
- D'aoust JY. Vliv skladovacích podmínek na výkon siřičitanu bizmutitého. J Clin Microbiol. 1977; 5 (2): 122–124. K dispozici na adrese: ncbi.nlm.nih.gov
- Laboratoře IVD. Bismuth-siřičitanový agar podle WILSON-BLAIR. 2009. K dispozici na: BismuthSulfitagar_span_Jan_2009% 20 (2).pdf
- Himedia Laboratories. Bismuth siřičitanový agar. 2017. K dispozici na adrese: himedialabs.com
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey a Scott Mikrobiologická diagnostika. 12 ed. Editorial Panamericana SA Argentina.
- Morales R, de la Cruz D, Leyva G a Ybarra M. Bakteriologická kvalita surového kozího mléka produkovaného v Miravalles, Puebla. Rev Mex de Ing Quím 2012; 11 (1): 45-54