JASNĚ ZELENÝ AGAR: ZDŮVODNĚNÍ, PŘÍPRAVA A POUŽITÍ - BIOLOGIE - 2025

Brilantní zelené agar je pevné kultivační médium s vysokým stupněm selektivity. Používá se výhradně k izolaci kmenů rodu Salmonella, existují však určité výjimky, jako jsou druhy typhi a paratyphi, které na tomto médiu nerostou.

Hledání rodu Salmonella je časté ve stolici, vodě nebo ve vzorcích potravin. V tomto smyslu může být toto médium velmi užitečné. Tento agar vytvořil v roce 1925 Kristensen, Lester a Jurgens, později jej upravil Kauffmann.

Světle zelený agar. Fermentující a nefermentující kolonie. Zdroj: Výstava MJ Richardson / Invisible Worlds - 2012geograph.org.uk/photo/2815842 Creative Commons License.

Skládá se z pluripeptonů z peptického trávení živočišných tkání a pankreatického trávení kaseinu, obsahuje také kvasnicový extrakt, chlorid sodný, laktózu, sacharózu, fenolovou červenou, jasně zelenou a agar-agar.

Vyznačuje se tím, že je pro většinu bakterií spíše nehostinným prostředím, což podporuje růst salmonel, nicméně některé koliformní formy v něm mohou existovat a slabě se vyvíjet.

Je důležité si uvědomit, že rod Shigella neroste na tomto médiu a nevyskytuje se ani Salmonella typhimurium ani Salmonella paratyphi. Pokud tedy chcete tyto mikroorganismy izolovat, měla by se použít jiná média, například agar XLD.

Základ

Světle zelený agar

Každá ze složek, které tvoří médium, plní specifickou funkci, která určuje vlastnosti a vlastnosti agaru.

Pluripeptony a kvasnicový extrakt jsou zdrojem živin, z nichž mikroorganismy odebírají dusík a minerály nezbytné pro jejich vývoj. Laktóza a sacharóza jsou zdrojem energie pro mikroorganismy, které jsou schopny je fermentovat.

Světle zelená je inhibiční látka, která zabraňuje růstu grampozitivních bakterií a velkého počtu gramnegativních mikroorganismů.

Chlorid sodný zajišťuje osmotickou stabilitu média. Zatímco fenolová červená je indikátorem pH, změní barvu při detekci produkce kyseliny fermentací uhlovodíků.

Nefermentující kolonie laktózy a sacharózy rostou na tomto médiu v narůžovělé nebo průhledné bílé barvě, na červeném pozadí. Například bakterie rodu Salmonella.

Zatímco bakterie fermentující laktózu nebo sacharózu schopné růst na tomto médiu, vznikají na zeleno-žlutém pozadí žluto-zelené nebo žluto-zelené kolonie. Například Escherichia coli a Klebsiella pneumoniae.

Varianty jasně zeleného agaru (BGA)

Existují i ​​jiné varianty jasně zeleného agaru; Agar Novobiocin Brilliant Green Glucose (NBG) a Agob Novobiocin Brilliant Green Glycerol Lactose (NBGL).

Novobiocin jasně zelený glukózový agar

Obsahuje sójový agar tryptikázy, citrát železitý amonný, pentahydrát thiosíranu sodného, ​​fenolickou červeň, glukózu, jasně zelenou, novobiocinovou a destilovanou vodu.

Používá se pro izolaci kolonií Salmonella ze vzorků stolice.

V tomto případě jsou jasně zelené a novobiocin inhibičními látkami, které brání růstu grampozitivních bakterií a některých gramnegativních mikroorganismů.

Thiosíran sodný je zdrojem sulfidu a citrát železitý je zdrojem železa, což je nutné k odhalení produkce sirovodíku vytvořením černé sraženiny síranu železitého.

Glukóza je fermentovatelný uhlohydrát a indikátorem pH je fenolová červeň.

Na tomto médiu se kolonie Salmonella vyvíjejí velké s černým středem obklopeným načervenalým halo a následovaným jasně viditelnou oblastí. Některé kmeny Citrobacter freundii produkují kolonie identické s koloniemi Salmonella.

Novobiocin brilantní zelený glycerol laktátový agar (NBGL)

Toto médium obsahuje sójový agar tryptikázy, citrát železito-amonný, thiosíran sodný, laktózu, glycerol, jasně zelenou, novobiocin a destilovanou vodu.

Rozdíl mezi tímto médiem a předchozím médiem spočívá v tom, že glukóza je nahrazena laktózou a glycerolem a fenolová červeň se nepoužívá.

Médium se také používá k izolaci druhů salmonel, kolonie se vyvíjejí černé díky produkci sirovodíku.

Pouze kolonie, které neprodukují kyseliny z glycerolu nebo laktóza dosažení dostatečné H ₂ S produkci, protože nízké pH interferuje s H ₂ S tvorby. To má za následek bezbarvé kolonie pro většinu druhů Proteus a Citrobacter.

Příprava

- Odvážte 58 gramů komerčně získaného dehydratovaného média. Přidejte ji do litru redestilované vody. Promíchejte, nechte několik minut stát a směs umístěte na zdroj tepla, dokud se úplně nerozpustí.

-Autokláv při 15 ° C po dobu 15 minut, nepřekračujte dobu sterilizace.

- Nechte to odpočívat a podávejte za horka ve sterilních Petriho miskách. Konečné pH by mělo být 6,9 ± 0,2.

-Ztuhněte a uložte do chladničky až do použití. Před naočkováním by měly mít talíře pokojovou teplotu.

- Práškové médium je zelené barvy a připravené má oranžovohnědou nebo červeno-zelenou barvu v závislosti na pH a obchodní společnosti. Velmi hnědá barva ukazuje, že agar byl přehřátý.

- Jakmile ztuhne agar, nedoporučuje se přepracovávat, protože se médium zhoršuje.

Použití / aplikace

Toto médium se mimo jiné používá k vyhledávání kmenů rodu Salmonella ze vzorků stolice a mléčných potravin.

Protože se jedná o poněkud nehostinné prostředí, doporučuje se zasít hojné inokulum, pokud se použije přímý vzorek. Jinak by mělo být provedeno předbočení a obohacení vzorků před setím do tohoto média.

Protože některé kmeny Salmonella jsou inhibovány nebo rostou obtížně, je vhodné doprovázet toto médium jiným selektivním agarem pro Salmonella.

Každá kolonie s typickou salmonelskou charakteristikou musí být podrobena biochemickým testům pro její definitivní identifikaci.

QA

K testování dobrého výkonu jasně zeleného agarového média lze použít kmeny ATCC k pozorování jejich vývoje na něm.

Nejčastější kmeny použité pro kontrolu kvality jsou: Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Proteus mirabilis ATCC 43071, Klebsiella pneumoniae ATCC 700603, Escherichia coli ATCC 25922, Shigella flexneri ATCC 12022, Staphylococcus aureus ATCC 6538.

První 3 by měly dát růžové a průhledné bílé kolonie na červeném pozadí. Salmonella s dobrým vývojem a Proteus s malým nebo pravidelným růstem.

U Klebsielly a Escherichie se očekávají žluto-zelené kolonie se žlutým pozadím a v případě Shigella a Staphylococcus by měly být inhibovány.

Dehydratované médium musí být skladováno při pokojové teplotě, na suchém místě, protože je velmi hygroskopické.

Reference

1. Laboratorio Difco Francisco Soria Melguizo SA brilantní zelený agar. 2009
2. Britannia Laboratory. Jasně zelený agar. 2015.
3. Laboratoř BD. BD brilantní zelený agar. 2013.
4. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologická diagnostika. (5. vydání). Argentina, Editorial Panamericana SA
5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Bailey & Scott Mikrobiologická diagnostika. 12 ed. Argentina. Editorial Panamericana SA