VOGEL-JOHNSONŮV AGAR: ODŮVODNĚNÍ, PŘÍPRAVA A POUŽITÍ - BIOLOGIE - 2025

Agar Vogel-Johnson je pevná střední selektivní a diferenciální kultura, speciálně vyvinut pro izolaci Staphylococcus aureus. Toto médium vytvořili Vogel a Johnson v roce 1960 z modifikace teluritového glycinového agaru formulovaného v roce 1955 Zebovitzem, Evansem a Nivenem.

Modifikace spočívala ve zvýšení koncentrace mannitolu přítomného v médiu a inkorporaci indikátoru pH. Současný vzorec se skládá z tripteinu, kvasničného extraktu, mannitolu, fosforečnanu draselného, ​​chloridu lithného, ​​glycinu, fenolové červeně, agaru, 1% roztoku teluritu draselného a vody.

Zdroj: Pixinio.com/Laboratorio de la Clínica ProcreaTec. Flickr.

Je třeba poznamenat, že existují jiná média, která, stejně jako agar Vogel-Johnson, jsou selektivní pro izolaci S. aureus, jako je například slaný manitolový agar a agar Baird Parker. V tomto smyslu lze říci, že základem agaru Vogel-Johnson je směs agaru slaného mannitolu a agaru Baird Parker.

V první se kolonie S. aureus vyznačují fermentací mannitolu a změnou indikátoru pH na žlutou. Na druhé straně je S. aureus charakterizován redukcí teluritu na telur a formováním šedých až černých kolonií. Obě vlastnosti jsou pozorovány na agaru Vogel-Johnson.

Toto médium, stejně jako jeho protějšky, je užitečné pro detekci Staphylococcus aureus ve vzorcích potravin, hygienických kontrolách průmyslových produktů a v klinických vzorcích.

Základ

Dodávka živin

Médium Vogel-Johnson obsahuje triptein a kvasnicový extrakt; Obě látky poskytují aminokyseliny s dlouhým řetězcem, které slouží jako zdroje uhlíku a dusíku nezbytné pro bakteriální růst. Bakterie schopné růstu v tomto médiu budou z těchto látek odebírat živiny.

Selektivní síla

Agar Vogel-Johnson je schopen inhibovat růst gramnegativních bakterií a dokonce i některých grampozitivních bakterií, což podporuje vývoj koagulázově pozitivních stafylokoků. Inhibičními látkami jsou telurit draselný, chlorid lithný a glycin.

Diferenciální síla

Látky, které vytvářejí toto diferenciální médium, jsou mannitol a telurit draselný. Mannitol je uhlohydrát, a když se fermentuje, vznikají kyseliny, které způsobují, že se médium mění z červené na žluté, což se děje díky přítomnosti indikátoru pH červeného fenolu.

Zatímco bezbarvý tellurit, když je redukován na volné kovové tellurium, má tmavě šedou až černou barvu.

Staphylococcus aureus fermentuje mannitol a redukuje tellurit na tellur. Z tohoto důvodu jsou typické kolonie S. aureus v tomto médiu šedé nebo černé obklopené žlutým médiem.

Bakterie, které rostou v tomto médiu a nesnižují tellurit nebo fermentují mannitol, vytvoří v důsledku alkalizace média pomocí peptonů průhledné kolonie obklopené červeně zbarveným médiem, ještě intenzivnější než původní barva.

Na druhé straně bakterie, které redukují tellurit, ale nefermentují mannitol, porostou jako šedé nebo černé kolonie obklopené temně červeným médiem.

Pokud by bylo médium připraveno bez přidání teluritu draselného, ​​vytvořily by se kolonie S. aureus jako žluté kolonie obklopené žlutým médiem jako ve slaném mannitolovém agaru.

Osmotická rovnováha a zpevňující činidlo

Fosforečnan draselný udržuje osmotickou rovnováhu média a upravuje pH na neutralitu 7.2. Zatímco agar dává kultivačnímu médiu pevnou konzistenci.

Příprava

Roztok teluritanu draselného 1% m / v

Tento roztok není obsažen v dehydratovaném médiu, protože nemůže být sterilizován v autoklávu. Z tohoto důvodu se připravuje samostatně a přidává se k již sterilizovanému médiu.

Některé komerční domy prodávají hotový 1% roztok teluritu draselného. Pokud se chcete připravit v laboratoři, postupujte takto:

Naváží se 1,0 g teluritu draselného a odměří se 100 ml destilované vody. Rozpusťte draselný telurit v části vody a potom doplňte množství vody, dokud nedosáhnete 100 ml. Roztok sterilizujte filtrací.

Základní médium Vogel-Johnson Agar

Naváží se 60 g dehydratovaného média a rozpustí se v 1 litru destilované vody. Směs se zahřívá do varu, aby se usnadnilo úplné rozpuštění. Během procesu rozpouštění se médium často míchá.

Sterilizujte v autoklávu při tlaku 15 liber a 121 ° C po dobu 15 minut. Vyjměte z autoklávu a nechte jej odpočinout, dokud médium nedosáhne teploty přibližně 45 až 50 ° C. Přidá se 20 ml předem připraveného 1% roztoku teluritu draselného.

Smíchejte a nalijte do sterilních Petriho misek. Nechte ztuhnout a na opačném místě držte destičky, abyste je mohli až do použití uskladnit v lednici.

Konečné pH připraveného média by mělo být 7,2 ± 0,2.

Před výsevem vzorku počkejte, až destička dosáhne pokojové teploty.

Barva připraveného média je červená.

Použití

Ačkoli může být použit pro izolaci S. aureus v jakémkoli typu vzorků, používá se hlavně pro mikrobiologickou analýzu farmaceutických výrobků, kosmetiky a potravin.

Doporučuje se, aby bylo inokulum husté. Očkování lze provést rýhováním pomocí platinové rukojeti nebo povrchem špachtlí Drigalski.

Destičky se inkubují při 35 - 37 ° C po dobu 24 až 48 hodin aerobiózy.

QA

K provedení kontroly kvality na médiu Vogel-Johnson lze použít následující kontrolní kmeny:

Staphylococcus aureus ATCC 25923, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Staphylococcus epidermidis ATCC 12228, Escherichia coli ATCC 25922 nebo Proteus mirabilis ATCC 43071.

Očekávaný výsledek je následující: u kmenů S. aureus uspokojivý růst s černými koloniemi obklopenými žlutým médiem. Pro S. epidermidis pravidelný růst s průsvitnými nebo černými koloniemi obklopenými červeným médiem.

Podobně se očekává úplná inhibice pro E. coli a částečná nebo celková inhibice pro Proteus mirabilis; pokud roste, bude to střídmě a kolonie budou černé obklopené červenou barvou.

Reference

1. Laboratoře BD. VJ (Vogel a Johnson Agar). 2006. K dispozici na adrese: bd.com
2. Britannia Laboratories. Vogel - Johnson Agar. 2015.K dispozici na: britanialab.com
3. Britannia Laboratories. Tellurit draselný. 2015.K dispozici na: britania.com
4. Himedia Laboratory. Vogel - Johnson Agar Medium. 2018. K dispozici na adrese: himedialabs.com/TD/MU023.pdf
5. Vogel - Johnson Agar Base. Manuál pro mikrobiologii společnosti Merck. 12. vydání, str. 502-503. K dispozici na adrese: Users / Team / Downloads
6. Přispěvatelé Wikipédie, „Ágar Vogel Jonhson“, Wikipédia a encyklopedie zdarma, k dispozici na adrese: wikipedia.org.
7. Venezuelský standardní Covenin 1292-89. (1989). Potraviny. Izolace a stanovení počtu Staphylococcus aureus. K dispozici na adrese: sencamer.gob.ve