XLD AGAR: ZDŮVODNĚNÍ, PŘÍPRAVA A POUŽITÍ - BIOLOGIE - 2025

Agar XLD nebo xylóza lysin desoxycholátu agarovém médiu je selektivní a diferenciální pevné živné pro izolaci enteropatogenů. Taylor navrhl XL agar (Xylose, Lysine) vzorec, aby se zlepšila izolace rodu Shigella.

Poznamenal, že tento rod byl inhibován ve většině médií určených k izolaci enteropatogenů. Následně byly přidány deoxycholát sodný, thiosíran sodný a citrát železito-amonný, aby se zvýšila jeho selektivita. Tento vzorec se ukázal být užitečným pro izolaci Shigella a Salmonella.

Rozdíly kolonií Shigella, Salmonella a koliformních bakterií na XLD agaru. A. Shigella sp, B. Salmonella sp, C. Coliforms. Zdroje: A. Autor: CDC / Amanda Moore, MT; Todd Parker, PhD; Audra Marsh, se svolením: Knihovna obrazů veřejného zdraví B. https://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/1/1f/Salmonella_species_growing_on_XLD_agar_-_Showing_H2S_production_-_Detail.jpg C. Autor: CDC / Dr. Farmář JJ, se svolením: Knihovna obrazů veřejného zdraví

XLD agar se skládá z kvasničného extraktu, deoxycholátu sodného, ​​xylózy, lysinu, laktózy, sacharózy, thiosíranu sodného, ​​citronanu železito-amonného, ​​chloridu sodného, ​​fenolové červeně a agaru. XLD Agar a SS Agar duo se používají ve většině bakteriologických laboratoří ke studiu fekálních vzorků pro Shigella a Salmonella.

Jiné laboratoře dávají přednost mimo jiné kombinaci CHROMagar Salmonella a XLD agaru. Tato dua mohou být připravena ve dvou Petriho miskách. Na jedné straně umístí XLD agar a na druhé straně druhé vybrané médium.

Základ

-Nutritivní síla

XLD agar obsahuje kvasnicový extrakt, který slouží jako zdroj živin pro mikroorganismy, které na tomto agaru rostou. Kromě toho přítomnost uhlohydrátů (xylózy, sacharózy a laktózy) dodává energii bakteriím, které je mohou fermentovat.

- Selektivita média

Jako inhibující látka představuje deoxycholát sodný; Tím se zabrání růstu grampozitivních bakterií, což dává médiu selektivní charakter.

-Diferenciální síla

Typické kolonie Shigella

Jak již bylo uvedeno, agar XLD obsahuje xylózu; Tento uhlohydrát je fermentován všemi bakteriemi, které rostou v tomto médiu, s výjimkou rodu Shigella.

Toto je jedna z charakteristik, která mu dává svůj odlišný charakter, protože kolonie Shigella se odlišují od ostatních vyvíjením červených kolonií, zatímco ostatní bakterie produkují žluté kolonie.

Typické kolonie Salmonella

Rod Salmonella také fermentuje xylózu, zpočátku vytváří žluté kolonie. Po vyčerpání uhlohydrátové xylózy však útočí na lysin na enzym lysin dekarboxylázu. Dekarboxylace lysinu generuje zásady, které mění barvu kolonie a okolního média na původní červenou.

Toto chování provádí pouze Salmonella, protože koliformní formy, které dekarboxylátují lysin, nemohou médium alkalizovat. Je to proto, že koliformy také fermentují přítomnou laktózu a sacharózu; proto je produkce kyselin velmi vysoká, takže v těchto bakteriích zůstává žlutá kolonie.

Je třeba poznamenat, že rod Salmonella nekvasí sacharózu ani laktózu.

Výroba H

XLD agar také umožňuje detekci H ₂ S- výroby Salmonella; Z tohoto důvodu spoléhá na zdroj síry představovaný thiosíranem sodným a reakčním vývojářem, kterým je citronan železitý amonný.

Druhé reaguje s H ₂ S (bezbarvý plyn) a tvoří viditelný nerozpustné černé sraženiny síranu železa. V tomto smyslu budou charakteristiky kolonií lososů červené s černým středem.

Je třeba poznamenat, že pro H ₂ S nastat reakce formování, je zapotřebí alkalické pH. To je důvod, proč další Enterobacteriaceae, že forma H ₂ S nemůže udělat, nebo to udělat špatně v tomto médiu, protože vysokou kyselost vyrobené fermentací sacharidů přítomné inhibuje nebo brání reakci.

- Chlorid sodný, agar a fenolová červeň

Nakonec chlorid sodný udržuje osmotickou rovnováhu; agar je ztužující činidlo a fenolová červeň detekuje změny pH a mění barvu kolonií a média.

Příprava

Naváží se 55 g dehydratovaného média XLD a rozpustí se v 1 litru vody. Směs se zahřívá a míchá, dokud nedosáhne bodu varu. Nepřehřívejte se, protože teplo poškozuje médium a vytváří sraženinu, která mění morfologii typických kolonií.

Toto médium nesmí být autoklávováno. Při rozpouštění musí být předán do vodní lázně při 50 ° C. Při chlazení se podává přímo na sterilní Petriho misky. Mohou být nality do jednoduchých nebo dvojitých desek. Nechají ztuhnout a až do použití se uchovávají v lednici.

Před použitím temperujte. Vzhledem k tomu, že se jedná o nesterilní médium, doporučuje se jej připravit blíže k datu použití.

Konečné pH média by mělo být 7,4 ± 0,2. Barva připraveného média je oranžově-červená, průsvitná, bez sraženiny.

Pokud máte základní agar xylózy lysinu (XL), můžete přidat deoxycholát sodný, thiosíran sodný a citrát železo-amonný. Tímto způsobem se získá XLD agarová formulace.

Aplikace

XLD agar se používá k regeneraci enteropatogenů, zejména rodu Shigella a sekundárně rodu Salmonella. Je užitečný pro vyhodnocení vzorků stolice, vody a potravin.

Druhy vzorků

Výkaly

Vzorky stolice mohou být vysety přímo na XLD agaru, což umožňuje dobrou distribuci materiálu pro získání izolovaných kolonií.

Pro zlepšení regenerace salmonel může být XLD agar vylisován z média obohacujícího salmonely.

Jídlo

V případě potravin lze použít obohacovací bujóny pro Salmonella a Shigella. Pro Salmonellu můžete použít mimo jiné seleničitý cystinový vývar, světle zelený tetrathionátový vývar.

V případě Shigella může být obohacen vývarem Shigella o 0,5 µ / ml novobiocinu, inkubován při 42 ° ± 1 ° C po dobu 16-20 hodin.

Voda

Při analýze vody se mimo jiné doporučuje technika membránové filtrace a použití XLD agaru.

Podmínky výsadby a identifikace

Očkované médium se inkubuje aerobně při 35 ° C po dobu 24 až 48 hodin.

Jsou pozorovány typické kolonie každého rodu, podezřelé kolonie by měly být podrobeny biochemickým testům pro jejich identifikaci.

QA

K vyhodnocení kontroly kvality média lze použít následující bakteriální kmeny: Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella abony DSM 4224, Shigella flexneri ATCC 12022, Shigella sonnei ATCC 25931, Escherichia coli ATCC 25922, Proteus mirabilis 4, Klebsiella pneumoniae ATCC 33495.

Rod Salmonella se vyznačuje tím, že na tomto médiu prezentuje červené kolonie s černým středem nebo zcela černé kolonie. Zatímco v rodu Shigella musí být kolonie červené, tj. Barva média.

V případě Escherichia coli se očekává, že bude zcela nebo částečně inhibována; pokud roste, kolonie jsou žluté. U Proteus mirabilis se očekává růžový růst u růžových kolonií s černým středem nebo bez něj. Nakonec rod Klebsiella poroste jako žluté kolonie.

Závěrečné myšlenky

XLD agar je široce používán v bakteriologických laboratořích pro svou vysokou účinnost pro regeneraci Shigella a také má dobré zotavení z rodu Salmonella.

Rall et al. (2005) ve své práci nazvané „Vyhodnocení tří obohacovacích bujónů a pěti pevných médií pro detekci salmonely u drůbeže“ prokázali, že ze tří testovaných klasických médií (jasně zelený agar, SS agar a XLD agar), XLD agar měl nejlepší návratnost.

Procenta výtěžnosti byla následující: 13,8% pro jasně zelený agar, 27,6% pro SS a 34,5% pro XLD. Rambachův agar s 48% výtěžností a CHROMagar s 79,3% byl překonán pouze chromogenními médii.

Reference

1. Nemoci způsobené potravinami. Shigellosis. K dispozici na adrese: anmat.gov.ar
2. "XLD agar." Wikipedia, encyklopedie zdarma. 9. února 2019, 11:46 UTC. 10. dubna 2019, 19:25 wikipedia.org
3. BBL Laboratories. CHROMagar Salmonella / BD XLD Agar (biplate). 2013 K dispozici na adrese: bd.com
4. Laboratoř Neogen. Agar XLD. K dispozici na adrese: foodsafety.neogen
5. Laboratoř Francisco Soria Melguizo. Agar XLD. K dispozici na adrese:
6. Rall L, Rall R, Aragon C, Silva M. Vyhodnocení tří obohacovacích bujónů a pěti kultivačních médií pro detekci salmonel u drůbeže. Braz. J. Microbiol. 2005; 36 (2): 147-150. K dispozici od: scielo.br
7. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey a Scott Mikrobiologická diagnostika. 12 ed. Editorial Panamericana SA Argentina.