PEPTONOVÁ VODA: ZDŮVODNĚNÍ, PŘÍPRAVA A POUŽITÍ - BIOLOGIE - 2025

Peptonové vody je kapalné médium obohacení, neselektivní, který se používá zejména jako ředící vzorcích potravin a jiných materiálů. Toto médium je z chemického hlediska velmi jednoduché, obsahuje masný pepton, chlorid sodný a vodu.

Má určitou nutriční hodnotu, což umožňuje obohatit vzorek. Pokud jsou zneužívány bakterie, má toto médium schopnost opravit životaschopnost. Je zvláště užitečný při regeneraci bakterií z čeledi Enterobacteriaceae.

Peptonová voda v lahvích. Zdroj: MSc. Marielsa gil

V případě zotavení Salmonellas se doporučuje použít variantu pufrované peptonové vody; Toto slouží jako médium pro obohacení vzorku, v tomto případě obsahuje další prvky, jako je hydrogenfosforečnan sodný a fosforečnan draselný.

Normálně se peptonová voda připravuje při neutrálním pH, existují však i jiné varianty, kde je nezbytné, aby pH bylo 8,5 ± 0,2 (alkalické), protože bakterie, která má být izolována, je alkifilní, jako je například Vibrio cholerae.

Dále může být toto médium použito jako základní médium pro testy fermentace uhlohydrátů.

Základ

Peptony poskytují živiny potřebné pro bakteriální růst, zejména dusík a aminokyseliny s krátkým řetězcem, zatímco chlorid sodný udržuje osmotickou rovnováhu.

Médium dále umožňuje dispergovat, homogenizovat a opravit bakteriální buňky, které byly poškozeny průmyslovými procesy.

Jako ředidlo je ideální, účinně nahrazující fyziologický roztok (SSF) nebo fosfátový pufrový roztok (PBS).

Bakteriální růst je patrný pozorováním jeho zákalu.

Příprava

Domácí příprava (neobchodní)

Naváží se 1 g peptonu a 8,5 g chloridu sodného, ​​rozpustí se v 1 litru destilované vody. Hodnota pH by měla být upravena na 7,0. K tomu lze použít 1N chlorid sodný.

Příprava za použití komerčního média

Naváží se 15 g dehydratovaného média a rozpustí se v litru destilované vody. Homogenizujte směs. V případě potřeby se směs vaří 1 minutu, aby se napomohlo úplnému rozpuštění. Podávejte ve 100 ml lahvích nebo 10 ml zkumavkách podle potřeby. Autoklávujte při 121 ° C po dobu 15 minut.

Chlazení a použití nebo skladování v lednici. Konečné pH média je 7,2 ± 0,2.

Barva dehydratovaného média je světle béžová a připravené médium je světle jantarové.

Příprava na fermentační testy

K předchozímu přípravku - před sterilizací - musí být uhlohydrát přidán do konečné koncentrace 1% plus indikátor Andrade (kyselý fuchsin) nebo fenolová červená (0,018 g / l). Zkumavky by měly být vybaveny zvonkem Durham, aby bylo možné sledovat tvorbu plynu.

Další varianty peptonové vody

Pufrovaná nebo pufrovaná peptonová voda

Obsahuje enzymatický hydrolyzát kaseinu, chlorid sodný, dihydrogenfosforečnan draselný a dodekahydrát hydrogenfosforečnanu sodného. Konečné pH je 7,0 ± 0,2.

K přípravě se naváží 20 g dehydratovaného média a rozpustí se v 1 litru destilované vody. Nechte ji asi 5 minut odpočívat. Zahřívejte 1 minutu, dokud se úplně nerozpustí.

Podle potřeby nalijte do vhodných nádob. Sterilizujte pomocí autoklávu při 121 ° C po dobu 15 minut.

- Alkalická peptonová voda

Naváží se 25 g dehydratovaného média a rozpustí se v 1 litru vody. Postupujte jak je popsáno výše. Hodnota pH se pohybuje od 8,3 do 8,7.

Použití

Inokulum se provádí přímým umístěním vzorku.

Používá se k ředění vzorků, zejména pokud existuje podezření, že mohou být poškozeny bakterie. Obvykle jsou ředění 1:10 a 1: 100.

Inkubujte 24 hodin v aerobióze při 35–37 ° C.

Vzorky stolice

U vzorků stolice na Salmonella se doporučuje použít pufrovanou nebo pufrovanou vodu jako médium pro obohacení.

Postupujte takto:

Pokud se vytvoří stolice, odeberte 1 g vzorku. Pokud jsou tekuté, vezměte 1 ml stolice a suspendujte ve zkumavce s 10 ml pufrované peptonové vody. V případě rektálních výtěrů vypusťte materiál obsažený v tamponu do zkumavky pufrovanou peptonovou vodou.

Ve všech případech vzorek dobře promíchejte a homogenizujte.

Inkubujte při 37 ° C po dobu 18 až 24 hodin. Následně se subkultura v obohacovacím bujónu, jako je seleničitanový cystinový bujón nebo tetrathionátový bujón při 37 ° C po dobu dalších 18 až 24 hodin. Nakonec kultivujte v selektivních médiích pro Salmonella, jako je SS agar, XLD agar, Hektoenův agar.

Vzorky potravin

Peptonová voda se používá jako obohacovací médium nebo jako jednoduché ředidlo, ale pokud se hledají druhy Salmonella, používá se jako médium před obohacením, jak již bylo popsáno.

Při jídle postupujte následovně:

U pevných potravin vážte 25 g vzorku a u tekutých potravin 25 ml vzorku. Tuto část vložte do baněk obsahujících 225 ml peptonové vody. Vzorek se promíchá a homogenizuje.

Pokud existuje podezření, že mikrobiální zatížení je vysoké, lze provést sériové nebo desetinné ředění, aby se usnadnilo počítání jednotek tvořících kolonie (CFU).

Počet ředění bude záviset na typu vzorku a zkušenostech analytika.

Pokud je naopak podezření, že mikrobiální zátěž je velmi nízká, není nutné ředění provádět. Následně subkultura na selektivních médiích.

V případě potravin z moře, jako jsou měkkýši, ryby, mj. Při hledání Vibrio cholerae nebo jiných druhů Vibria, by měla být použita peptonová voda upravená na pH 8,5 (alkalická peptonová voda).

QA

Z každé připravené šarže by měla být inkubována jedna až dvě zkumavky bez inokulace po dobu 24 hodin v aerobióze při 37 ° C. Na konci času by neměla být pozorována žádná zákal nebo změna barvy.

Známé kontrolní kmeny mohou být také použity k vyhodnocení jejich účinnosti:

K tomu lze použít následující bakteriální kmeny: Escherichia coli ATCC 25922, Escherichia coli ATCC 8927, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Salmonella typhimurium ATCC 1428, Salmonella enteritidis ATCC 13076.

Ve všech případech se očekává uspokojivý mikrobiální vývoj, který je pozorován zákalem média.

Omezení

- Dehydratované médium je velmi hygroskopické, proto je nutné jej udržovat mimo vlhkost.

-Médium by se nemělo používat, pokud je pozorováno jakékoli zhoršení kvality.

- Dehydratované kultivační médium by mělo být skladováno při teplotě 10 - 35 ° C

- Připravené médium se musí uchovávat v chladu (2-8 ° C).

Reference

1. Techniky Camacho A, Giles M, Ortegón A, Palao M, Serrano B a Velázquez O. pro mikrobiologickou analýzu potravin. 2009, 2. ed. Fakulta chemická, UNAM. Mexiko. Verze pro správce manuálů a dokumentů (AMyD) na Chemické fakultě, UNAM 1. K dispozici na adrese:
2. Britannia Laboratories. Buffeted peptone water. 2015.K dispozici na: britanialab.com
3. Neogen Laboratories. Peptonová voda. K dispozici na adrese: foodsafety.neogen.com
4. Britannia Laboratories. Peptonová voda. 2015.K dispozici na: britanialab.com
5. Merck Laboratories. Pufrovaná peptonová voda. K dispozici na adrese: merckmillipore.com
6. Conda Pronadisa Laboratories. Alkalická peptonová voda. K dispozici na adrese: condalab.com
7. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey a Scott Mikrobiologická diagnostika. 12 ed. Editorial Panamericana SA Argentina.