Stěr je diagnostický nástroj pro aktivní plicní tuberkulózy. Jedná se o laboratorní techniku, která umožňuje detekci a měření kyselých rychlých bacilů, jako je Mycobacterium tuberculosis. Je to nejrozšířenější metoda na světě pro stanovení diagnózy aktivní plicní tuberkulózy v komunitě a pro vyhodnocení přínosů léčby.
Plicní tuberkulóza je infekční onemocnění způsobené Mycobacterium tuberculosis, které infikuje plíce, ale může ovlivnit jiné orgány a systémy. Na celém světě trpí plicní tuberkulózou (TB) více než 6 milionů lidí.
Buňky M. tuberculosis ve spútu (Zdroj: Microrao / CC BY-SA (https://creativecommons.org/licenses/by-sa/4.0) přes Wikimedia Commons)
Mycobacterium tuberculosis a další netuberkulózní druhy Mycobacterium mají na buněčné stěně lipidový povlak, který je bohatý na kyselinu mykolovou, která je po obarvení zásaditými barvivy rezistentní vůči zbarvení kyselého alkoholu.
Proto se používají speciální metody barvení, jako je Ziehl-Neelsenova metoda. Tyto jednoduché a levné metody umožňují stěně udržet skvrnu, když je vzorek opláchnut kyselým roztokem, a zeď Mycobacterium zčervená na rozdíl od jiných bakterií, které se modří.
Chcete-li provést mikroskopii stěr, je třeba vzorek sputa, nejlépe odebraný ráno, když vstáváte. Lze také použít vzorky tkáně nebo tělesné tekutiny.
Proces
Vzorky, které mají být zpracovány pro mikroskopii stěrem, jsou vzorky sputa, vzorky tkání nebo vzorky tělních tekutin. Tkáňové vzorky mohou být extrahovány bronchoskopií nebo biopsií lymfatických uzlin nebo jiných tkání.
Protože tuberkulóza může ovlivnit jakýkoli orgán nebo systém, vzorky se mohou velmi lišit, včetně: vzorků moči, mozkomíšního moku, pleurální tekutiny, ascitu, krve, hnisu z otevřených dutin, biopsie, atd.
Vzorky extrapulmonální léze by měly být také zpracovány pro kultivaci. Vzorky sputa se shromažďují v ranních hodinách po vzestupu.
Několik vzorků lze odebrat v řadě nebo v po sobě jdoucích dnech. Vzorky by měly být označeny v uzavřených širokoúhlých lahvích. Měli by mít údaje o pacientovi, typ vzorku a datum odběru vzorku.
Technický postup
- Jakmile je vzorek získán, může být odstředěn za účelem koncentrace nebo přímo použit. Počáteční postup spočívá v umístění několika kapek vzorku a rozprostření na sklíčko.
- Vzorek se zakryje filtrovaným fuchsinem (barvicí roztok).
- Pak se zahřívá, dokud nezíská asi tři emise bělavé páry.
- Počkejte pět minut, než vzorek vychladne a omyjte jej vodou.
- Je pokryta bělícím roztokem (kyselý alkohol) po dobu 2 minut.
- Promývá se znovu vodou.
- Vzorek se pokryje methylenovou modří a nechá se stát jednu minutu.
- Omyjte vodou.
- Nechte je uschnout na vzduchu a pokračujte k pozorování pod mikroskopem.
Fotografie z mikroskopu (Obrázek Konstantin Kolosov na www.pixabay.com)
Tento postup je rychlý, jednoduchý, levný a umožňuje barvení buněk Mycobacterium tuberculosis červeně. Tato technika se nazývá Ziehl-Neelsenova barvicí technika.
Mikroskopické pozorování spočívá v identifikaci přítomnosti kyselých rychlých bacilů a jejich kvantifikaci podle pole.
Buňky Mycobacterium tuberculosis se objevují jako červené, zrnité, zakřivené tyče na modrém pozadí. Mohou být izolovány, spárovány nebo seskupeny. Pozorování by se mělo provádět po polích a pro každý nátěr by mělo být vyšetřeno nejméně 100 polí.
Výsledek se považuje za pozitivní, pokud v každém poli existuje více než 10 buněk M. tuberculosis. To odpovídá 5 000 až 100 000 bacilů na každý mililitr vzorku.
V těchto případech je považován za pozitivní na Mycobacterium tuberculosis, protože netuberkulózní Mycobacterium nebo jiné bakterie rezistentní na kyseliny mají různé formy a obecně je množství pozorované na poli menší než 10.
Osoba, která zkoumá vzorek, musí mít zkušenost nebo odbornost v detekci a rozpoznávání těchto mikroorganismů, protože ve výsledcích mohou existovat falešné negativy nebo falešné pozitivy.
Existují i jiné fluoroskopické techniky, které jsou citlivější, ale mnohem dražší. Jedna taková technika používá obarvení Auramin-O pro získání zelené fluorescence nebo obarvení Auramin O / Rhodamin B pro pozorování žluté / oranžové fluorescence.
Pozitivní případy se obvykle provádějí u kultury a antibiogramu, aby se potvrdila diagnóza a vhodný výběr léčby.
Na co je mikroskopie stěr?
Tuberkulóza je infekční onemocnění, které postihuje plíce a další orgány a orgánové systémy těla. Jedná se o nakažlivé onemocnění, které způsobuje vážná zranění dýchacího systému, a pokud není správně léčeno, může způsobit smrt pacienta.
Tuberkulóza je přenášena téměř výhradně kapičkami suspendovanými ve vzduchu z expektorace pacienta infikovaného plicní tuberkulózou. Tyto malé kapičky mohou zůstat ve vzduchu a mají schopnost infikovat osobu, která je vdechuje.
Buňky M. tuberculosis (Zdroj: NIAID / CC BY (https://creativecommons.org/licenses/by/2.0) přes Wikimedia Commons)
Infekce vyžaduje prodlouženou dobu kontaktu s infikovaným pacientem, který neustále plivá bacily ve špatně větraném prostředí. U lidí s imunodeficiencí je větší pravděpodobnost nakažení.
U HIV pozitivních pacientů je větší pravděpodobnost, že u zbytku populace vyvine vážné respirační infekce, včetně plicní tuberkulózy. Z toho důvodu je důležitost mikroskopické mikroskopie jako rychlé a levné diagnostické metody pro tuberkulózu.
Mikroskopie smear umožňuje bakteriologickou diagnostiku tuberkulózy, pozitivní výsledek však musí být potvrzen jinými studiemi.
Studie, které potvrzují diagnózu tuberkulózy, zahrnují radiologická vyšetření, která ukazují charakteristické obrazy v horních lalocích plic, pozitivní tuberkulinové testy a pozitivní vzorky kultur.
Rozmazat negativně
Negativní stěrová mikroskopie nutně nevylučuje diagnózu tuberkulózy, protože zejména když je vzorek sputum, není eliminace bacil konstantní. Proto v těchto případech, kdy je podezření na diagnózu, jsou nezbytné sériové vzorky.
Pozitivní nátěr
Pozitivní stěrová mikroskopie svědčí o tuberkulóze a musí být potvrzena dalšími doplňkovými studiemi. Kdykoli je výsledek pozitivní, měla by být provedena kultura a antibiogram.
Jakmile je léčba zavedena, umožňuje trvalé snížení měřítka pozitivity mikroskopické skvrny až do získání negativních výsledků kontrolu přínosu léčby.
Reference
- Aziz, MA (2002). Externí hodnocení kvality AFB mikroskopie.
- Desikan, P. (2013). Sputum mikroskopie při tuberkulóze: je to stále relevantní? Indický časopis lékařského výzkumu, 137 (3), 442.
- Fauci, AS, Kasper, DL, Hauser, SL, Jameson, JL a Loscalzo, J. (2012). Harrisonovy principy vnitřního lékařství (roč. 2012). DL Longo (Ed.). New York: Mcgraw-hill.
- Ngabonziza, JCS, Ssengooba, W., Mutua, F., Torrea, G., Dushime, A., Gasana, M.,… & Muvunyi, CM (2016). Diagnostický výkon mikroskopu skvrny a inkrementálního výnosu Xpertu v detekci plicní tuberkulózy v Rwandě. Infekční choroby BMC, 16 (1), 660.
- Sardiñas, M., García, G., Rosarys, MM, Díaz, R., & Mederos, LM (2016). Význam kontroly kvality bacilskopie v laboratořích, které provádějí diagnostiku tuberkulózy. Chilean Journal of Infectology: Úřední orgán Chilean Society of Infectology, 33 (3), 282-286.
- Sequeira de Latini, MD, a Barrera, L. (2008). Manuál pro bakteriologickou diagnostiku tuberkulózy: standardy a technická příručka: mikroskopie stěrkou 1. V Příručce pro bakteriologickou diagnostiku tuberkulózy: standardy a technická příručka: mikroskopie stěrkou 1 (str. 64–64).