KREVNÍ NÁTĚR: VLASTNOSTI, TYPY, TECHNIKY A HISTOLOGIE - BIOLOGIE - 2025

Krevní nátěr je nátěr z periferní krve, které se používá k analýze komponenty přítomné v krevním oběhu. Pozorování krevního nátěru poskytuje hematologické údaje, které jsou velmi užitečné pro diagnostiku a sledování mnoha patologií.

Krevní nátěr umožňuje kvantifikovat počet různých typů bílých krvinek (vzorec leukocytů) a analyzovat morfologii a tvar erytrocytů, leukocytů a krevních destiček.

Příprava krevního nátěru. Zdroj: Krev v laboratorním skle. Public DomainPictures.net

V něm lze detekovat abnormality v počtu buněk, jako jsou: leukocytóza nebo leukopenie, lymfocytóza nebo lymfopenie, neutrofie nebo neutropenie, trombocytóza nebo trombocytopenie a eosinofilie. Mohou být také pozorovány abnormality velikosti buněk a tvaru.

Kromě toho je možné detekovat různé typy anémií, leukémií a bakteriálních nebo krevních parazitárních infekcí.

K tomu existují různé typy nátěrů, které se provádějí v závislosti na účelu studie. Existují tenké nátěry a silné nátěry. Tyto nátěry se liší technikou provádění a účelem studie.

Ti s jemnými kapkami se používají jako doplněk k dokončení hematologie. To poskytuje údaje o vzorci leukocytů, kromě analýzy tvaru a morfologie tří buněčných řad, které tvoří krev: červená řada, bílá řada a krevní destičky. I když také slouží jako doplněk ke studiu tlustého krevního filmu.

Hustý film se používá k diagnostice nemocí způsobených hemoparazity, jako je malárie nebo malárie, toxoplasmóza, leishmanióza, Chagasova choroba, babesióza a mikrofilarióza.

Charakteristiky krevního nátěru

Dobrý krevní nátěr musí splňovat určité vlastnosti. Mezi nimi můžeme zmínit:

- Vzorek musí splňovat minimální požadavky na kvalitu, aby byl reprezentativní.

- Vzorkování musí být dobře provedeno.

-Časné provedení nátěru.

-Je-li prováděno žilní krví, použijte antikoagulační činidlo, které nedeformuje buňky a před smícháním zkumavku promíchejte.

-Je-li to provedeno kapilární krví, první kapku zlikvidujte.

- Rozpětí musí být homogenní. To zajišťuje, že buňky jsou rovnoměrně distribuovány a že krevní buňky mohou být dobře analyzovány na tvar a počet.

- Strany nátěru by měly být hladké od začátku do konce.

- Roztěr musí respektovat okraj 1 až 2 mm po stranách skluzu.

- Vrstva nátěru by měla postupně snižovat tloušťku od začátku do konce (nátěr jemným poklesem metodou skluzu).

- Musí být řádně označen, aby nedošlo k záměně vzorku.

-Připravte a zafarďte správně pro jasné pozorování krevních prvků.

- Před nasazením přípravku pod mikroskopem nechte stěr velmi dobře uschnout. Umístění imerzního oleje na mokrý nátěr způsobí tvorbu micel, které brání vidění buněk.

Druhy krevního nátěru

Periferní krevní nátěry lze rozdělit na tenké a silné nátěry. Ti s tenkou vrstvou se používají ke studiu leukocytového vzorce a morfologickému pozorování krvinek. Lze také pozorovat extracelulární bakterie, jako je borrelia a intracelulární hemoparazity, jako je například plazodium.

V jemném bloku lze identifikovat druh parazita, jedná se tedy o specifičtější techniku ​​než tlustý blob, ale tlustý blob je citlivější, protože se jedná o koncentrační techniku, která se používá k vyčerpávajícímu hledání extracelulárních hemoparazitů.

Existují dva typy nátěrů jemných kapek: ty, které se provádějí na sklíčcích a ty na krycích sklech. Silné nátěry se provádějí na sklíčcích.

Techniky odběru vzorků krve

Krevní nátěry mohou být vyrobeny kapilárním vpichem nebo žilním vzorkem odebraným s antikoagulantem. Pokud se provádí z krve pomocí antikoagulantu, může být nátěr připraven až 2 hodiny po odběru vzorku.

Je třeba věnovat pozornost použití antikoagulancií, které nedeformují krvinky. Nejlepší volbou je EDTA. Naopak je třeba se vyhnout použití antikoagulancií, jako je citrát trisodný.

Pokud je vzorek odebrán kapilárním vpichem, měl by být nátěr okamžitě prodloužen, než se krev srazí.

První kapka by měla být zlikvidována, aby další kapka mohla spontánně uniknout, aby se zabránilo zředění vzorku tkáňovou tekutinou. Je to nejvíce doporučovaná technika pro pozorování buněčné morfologie, protože krev neobsahuje žádné přísady.

Pro pozorování hemoparazitů Solari et al. Ve své výzkumné práci dospěli k závěru, že obě techniky (venipunktura a kapilára) jsou stejně účinné.

Druhy odběru krve: A. Kapilární propíchnutí. B. Žilní vpich. Zdroj: A. Flickr.com B. Pxhere.com

Techniky přípravy krevního nátěru

Krevní nátěr lze provádět ručně na mikroskopických sklíčcích nebo na krycím sklíčku nebo sklíčku. To je také možné prostřednictvím automatizovaného vybavení.

-Slides skvrny

Jedná se o techniku, kterou většina laboratoří preferuje díky své snadné manipulaci.

Pomocí Pasteurovy pipety umístěte do středu jednoho konce čistého sklíčka ne příliš silnou nebo velmi jemnou kapku krve.

Roztěr se provádí pomocí dalšího sklíčka se zemním koncem. Broušené sklíčko je umístěno kolmo k opačnému konci místa, kde je kapka umístěna.

Nakloní se do úhlu mezi 30 - 45 ° a klouže směrem ke spádu; Když se dotkne, roztahuje se lineárně přes okraj zemního skluzu a konstantním a definovaným pohybem se plech vrací; před dosažením konce se sklíčko zvedne.

Tímto způsobem je homogenní vrstva rozprostřena po povrchu přijímacího sklíčka.

Nátěr se nechá uschnout. Poté se fixuje a obarví se preferovaným barvením. Před pozorováním pod mikroskopem nechte dobře uschnout. Na obličej se umístí kapka oleje, která ukazuje skvrny a pozoruje se pod světelným mikroskopem.

Krevní skvrna na sklíčku. Horní obrázek: nelakovaný nátěr. Dolní obrázek: potřísněný nátěr. Zdroj: Coinmac

Části nátěru vyrobené na sklíčcích

U tohoto typu nátěru lze rozlišit tři definované oblasti: hlavu, tělo a ocas. Hlava odpovídá oblasti, kde začíná nátěr, je to nejsilnější oblast a není dobré ji pozorovat.

Tělo je střední nebo střední částí nátěru, je to nejlepší oblast pozorovaná pod mikroskopem, protože tam jsou buňky rovnoměrně rozmístěny a jejich morfologie je zachována.

Ocas odpovídá poslední části nátěru; zde distribuce již není jednotná a morfologie erytrocytů bývá ztracena.

Kontrola kvality ve skluzové technice

V této technice hraje zásadní roli:

-Čištění a odmaštění sklíčka: zaručuje dobré sklouznutí vzorku.

- Velikost kapky: s velmi velkými kapkami se získá silnější a delší nátěr, s velmi malou kapkou bude rozpětí kratší a velmi jemné.

- Rychlost použitá v prodloužení: čím nižší je rychlost, tím bude nátěr tenčí, tím vyšší bude rychlost.

- Úhel provedení: čím menší je úhel, tím jemnější je nátěr, tím větší je úhel.

-Step na krycím sklíčku

To není široce používáno, protože manipulace s křehkými krycími sklíčky je těžkopádná, nicméně nabízí velké výhody, protože lepší rozložení buněk je dosaženo skrz nátěr.

Uprostřed krycího sklíčka se umístí nepříliš silná, málo jemná kapka. Okamžitě se na něj umístí další krycí sklíčko tak, aby špičky obou krycích sklíčků vyčnívaly a vytvářely hvězdu.

Kapka se spontánně rozšíří po povrchu obou krycích sklíčků. Na konci prodloužení je každý posuvný díl rychle posunut na opačnou stranu (jedna doprava a druhá doleva).

Tato technika poskytuje dva nátěry místo jednoho.

Jsou umístěny do sucha s roztaženou stranou nahoru. Jakmile je suchý, je fixován a obarven technikou výběru. Nech to zaschnout. Kapka imerzního oleje se umístí na sklíčko, nátěr se umístí sklem dolů a prohlíží se pod mikroskopem.

Kontrola kvality technikou krycího sklíčka

Pro získání dobrého nátěru pro tuto techniku ​​je důležité:

-Čištění krycích sklíček (pomáhá hladce posunout vzorek).

- Velikost kapky (ovlivňuje tloušťku nátěru).

- Rychlost, se kterou jsou krycí sklíčka oddělena (ovlivňuje homogenitu šíření).

- S automatickým zařízením

Lze je provést prostřednictvím některého z těchto týmů: Spinner a Autoslide.

Spinner spočívá v umístění sklíčka s kapkou krve na speciální odstředivkovou desku. Vzorek se odstředí při vysokých rychlostech; tímto způsobem se vytvoří homogenní a jemný nátěr vzorku. Nevýhodou je možnost hemolýzy vzorku.

Autoslide je nástroj, který mechanicky provádí pohyby pro provádění nátěru na sklíčcích. Můžete také opravit a obarvit nátěr. Lze jej dokonce přizpůsobit některým automatickým hematologickým čítačům.

Silná stěrová technika

Pro hledání hemoparazitů se doporučuje použít dva nátěry: jeden s jemnou kapkou a druhý s hustou kapkou.

Proveďte kapilární propíchnutí, očistěte první kapku. Umístěte jemnou kapku na sklíčko a rozmazejte ji, jak bylo vysvětleno výše. U tlustého korálku položte velkou korálku na další sklíčko a rozprostřete jej na čtverec o velikosti 1,55 mm. Nechte oba nátěry zaschnout.

Skvrny od stěr

Na jemné kapky lze použít mimo jiné skvrny Giemsa nebo Wright. Na silné nátěry se doporučuje barvení Giemsa nebo May-Grunwald.

Giemsa skvrna

Stěr se fixuje po dobu 3 minut metanolem, vypustí se a nechá se znovu zaschnout. Nátěr je pak potažen Giemsovou skvrnou po dobu 10-15 minut. Promývá se destilovanou vodou a nechá se vyschnout. Pro pozorování pod mikroskopem je umístěna kapka imerzního oleje.

Wrightova skvrna

Roztěr je potažen Wrightovou skvrnou po dobu 5 minut. Zlikvidujte a umístěte tlumivý roztok na pH 6,8 po dobu 6 minut. Vyfoukněte přípravek pro homogenizaci. Omyjte destilovanou vodou a nechte uschnout. Pozorujte pod mikroskopem.

Druhy vadných nátěrů

Vyskytuje se u žáků v technice jemných kapek se skluzavkami.

Roztěry s oblastmi různé tloušťky (tenké a silné rozptýlené)

Je to proto, že provedený pohyb nebyl během šíření konstantní, takže se zastavil a restartoval.

Velmi krátký nátěr

Mají 2 příčiny: jedna je způsobena tím, že zemní skluzavka byla zvednuta před dosažením druhého konce skluzavky. V tomto případě je extrémně silný a krátký.

Na druhé straně, pokud je nátěr krátký, ale tenký, je to proto, že velikost kapky byla velmi malá.

Na konci nátěru se roztrhněte se shrnovanou oblastí

To má několik příčin: jednou je to, že zemnící hrana je vadná, že tlak vyvíjený na přijímací skluz je zvýšen v době rozmetání nebo že je opotřebená zemní hrana skluzavky.

Roztěr s tvorbou vakuol nebo čirými zaoblenými nebo eliptickými oblastmi

Jsou způsobeny použitím mastných nátěrů (špatně omytých a odmaštěných).

Velmi silné nebo velmi tenké nátěry

Kapky, které jsou příliš velké, vytvoří velmi silné nátěry od začátku do konce a velmi malé kapky vytvoří velmi jemné nátěry.

Histologie

Krevní buňky jsou vidět v krevním nátěru. Mezi ně patří:

- erytrocyty nebo červené krvinky

Lidská krev, erytrocyty nebo červené krvinky a dvě bílé krvinky. Převzato a upraveno z: Viascos Vaše pozorování je nanejvýš důležité. Na této úrovni mohou být detekovány anémie, talasémie, onemocnění kostní dřeně atd.

Počet erytrocytů nebo červených krvinek je přibližně 5 x 10 ⁶ mm3 ve mužů a 4,5 x 10 ⁶ u žen. Červené krvinky jsou tvarovány jako bikonkávní disky s centrálním fyziologickým blednutím. Lze je vidět samostatně (normální) nebo tvořící komíny rouleaux (neobvyklé).

Nátěry také vykazují poikilocytózu (červené krvinky různých tvarů), anisocytózu (červené krvinky různých velikostí), anisopoikilocytózu (různé tvary a velikosti), anisochromii (různé barvy), erytroblasty (nezralé červené krvinky), mikrocytózu (menší červené krvinky)) a makrocyty (větší erytrocyty).

Když představují nedostatek v množství hemoglobinu a zvyšuje se centrální bledost, říká se, že existuje hypochromie. Pokud je pozorována normální červená řada, bude hlášena jako normocytární a normochromní.

-Bílé krvinky nebo leukocyty

bílé krvinky

Normální množství se pohybuje od 5 000 do 10 000 mm ³. Mění se v infekčních procesech, alergiích a leukémii. V krevním nátěru lze rozlišit několik typů, které jsou vysvětleny níže.

Segmentované neutrofily

Představují 55-65% celkových leukocytů. Měří mezi 10-15 μm. Mají segmentované nebo lobované jádro, které přijímá různé morfologie, proto se nazývá polymorfonukleární.

Ve své cytoplazmě mají bohaté neutrofilní granule a některé azurofily. Zvyšují bakteriální infekce (neutrofie), snižují virové infekce (neutropenie).

Lze pozorovat morfologické abnormality, jako je pleokaryocytóza (hypersegmentovaná jádra), oblouky (nezralé buňky) nebo makropoly (oválné a velké).

Další úpravy:

-Toxické granulace

-Pseudo Pelger neutrofily (jádro nepředstavuje lobulace nebo jsou bilobované).

-Döhleova těla: tmavě modré cytoplazmatické inkluze.

- Zvýšená cytoplazmatická basofilie.

-Intracytoplazmatické vakuoly.

- Buněčná piknóza (ztráta internuclear mostů).

Segmentované eozinofily

Představují 1-3% celkových bílých krvinek. Měří 9-10 μm. Vyznačují se přítomností hojných acidofilních cytoplazmatických granulí a několika azurofilů. Jádro má dvě lobulace. Jejich počet roste u alergií a onemocnění parazitického původu.

Segmentované basofily

Jsou extrémně vzácné a představují 0-1% leukocytů. Měří 10-12μm. Jádro je obvykle nepravidelné v okrajích a může být bilobedové, ale není vidět kvůli velkému počtu bazofilních hrubých granulací v cytoplazmě. Velmi zřídka lze vidět basofilii.

Lymfocyty

Jsou to malé buňky s bazofilní cytoplazmou, s jádrem, dobře definované, kulaté, s kondenzovaným chromatinem. Jádro zahrnuje téměř celou buňku. Představují 26-40% krevních leukocytů. Zvyšují virové infekce (lymfocytóza). Lze vidět reaktivní lymfocyty.

Monocyty

Buňky větší než lymfocyty, s větší cytoplazmou a volnějším oválným jádrem chromatinu. Měří 9-12μm. Cytoplazma je hojná a obvykle se jeví jako světle šedavě modrá se standardními barvicími technikami. Mezi změnami lze pozorovat vakuované monocyty a monocytózu.

-Tabulky

Měří mezi 1,5-3 μm. Jeho tvar je kulatý nebo oválný. Normální hodnota se pohybuje od 150 000 do 350 000 destiček / mm3. Mohou snížit některé virové infekce. Nemají jádro a jsou zbarveny fialově. V této řadě mohou být pozorovány abnormality, jako jsou makro nebo mikro destičky, trombocytóza nebo trombocytopenie a fragmenty destiček.

Patologické prvky

Krevní paraziti

Hemoparazity, jako původce malárie nebo malárie (paraziti rodu Plasmodium), mohou být pozorovány v krevních nátěrech. Z tohoto důvodu je důležité, aby nátěr byl analyzován ručně, protože automatizované zařízení toto zjištění nevyužívá.

Bakterie

V patologiích, jako je recidivující horečka nebo Lymeova choroba, lze pozorovat její původce. V tomto případě to odpovídá Borrelia recurrenti spirochetes a Borrelia burgdorferi v krevním nátěru.

Nezralé buňky

Závažné případy jsou pozorovány mimo jiné v leukémiích, leukemoidních reakcích a leukoerytroblastických reakcích. U bakteriálních infekcí mohou být mírné odchylky vlevo (přítomnost podvodníků). U některých anémií mohou být také pozorovány erytroblasty.

Reference

1. Krev a hematopoetická tkáň. K dispozici na adrese: sld.cu
2. Gomez A, Casas M. 2014. Angel. Interpretace klinické laboratoře. 8. vydání. Editorial Médica Panamericana.
3. Solari Soto L, Soto Tarazona A, Mendoza Requena D, Llanos účty A. Porovnání parazitických hustot v husté žilní kapce krve versus akupresura v diagnostice malárie vivax. Rev Med Hered 2002; 13 (4): 140-143. K dispozici na adrese: scielo.org.
4. Terry Leonard Nelson, Mendoza Hernández Carlos. Význam studia nátěru periferní krve u starších osob. Medisur 2017; 15 (3): 362-382. K dispozici na adrese: scielo.sld
5. Grinspan S. Studium nátěru periferní krve. Další vzdělávání lékařů. K dispozici na adrese: bvs.hn/RMH