KREVNÍ KULTURA: K ČEMU SLOUŽÍ, ZDŮVODNĚNÍ, POSTUP, VÝSLEDKY - BIOLOGIE - 2025

Kultivace krve je bakteriologické vyšetření, která se snaží detekovat přítomnost mikroorganismů v krvi. Krev je svou povahou sterilní tekutinou, a proto musí být uchovávána ve fyziologických podmínkách, takže přítomnost bakterií nebo hub v krvi je vždy patologická.

Když se v krvi nacházejí bakterie nebo houby, ale množení nepřesahuje eliminaci mikroorganismů imunitním systémem, nazývá se bakterémie (pro bakterie) nebo fungémie (pro houby); Pokud se však počet mikroorganismů nekontrolovatelně zvýší, nazývá se septikémie.

Lahve na kultivaci krve (žlutá: dětská aerobióza, zelená: aerobióza dospělých a červená: anaerobióza dospělých). Zdroj: fotografie pořízená autorem MSc Marielsa Gil.

Bakterémie, fungémie a septikémie ohrožují život pacienta, a proto musí být okamžitě léčeny. Proto, když existuje podezření na infekci v krvi, lékaři požádají o studii kultivace krve.

Tato bakteriologická analýza umožňuje zjistit, zda v krvi existuje infekce a který mikroorganismus je přítomen. Pokud je navíc pozitivní, provede se test citlivosti, aby se zjistilo, které antibiotikum nebo antimykotikum by se mohlo použít při léčbě.

Pokud je naopak krevní kultura po 24 hodinách inkubace negativní, neměla by být odstraněna, dokud nedosáhne 240 hodin negativního. Tím je zajištěno, že neexistují žádné pomalu rostoucí mikroorganismy.

Aby byla krevní kultura spolehlivá, musí být při odběru vzorku přijata extrémní aseptická opatření a ke zvýšení spolehlivosti a citlivosti testu by měly být odebrány nejméně dva vzorky během vrcholu horečky nebo v jeho blízkosti.

K čemu to je?

Krev je sterilní kapalina, a když se v ní nacházejí mikroorganismy, je to 100% patologické. Tato situace představuje velmi choulostivý klinický obraz, který ohrožuje život pacienta.

Krevní kultura je důležitý bakteriologický test, který detekuje přítomnost mikroorganismů v krevním řečišti.

Mikroorganismy se mohou dostat do krve různými cestami, kterými mohou být mimo jiné extravaskulární infekce, jako jsou: pneumonie, intraabdominální infekce, pyelonefritida, vážné infekce kůže, měkkých tkání nebo artritidy.

Nebo to může být také intravenózní, například kontaminace intravenózních nebo arteriálních katétrů, endokarditida, intravenózní drogová závislost, podávání kontaminovaných drog nebo roztoků atd.

Pro zajištění přežití pacienta je nezbytná včasná detekce a léčba původce sepse.

V tomto smyslu by měl lékař označit realizaci krevní kultury, když pozoruje příznaky a příznaky, které způsobují podezření na septikémii, jako například: horečka (vyšší než 38 ° C) bez zjevného infekčního zaměření nebo naopak hypotermie (<de 36 ° C).

Dalšími znaky mohou být: zimnice, zvýšením počtu bílých krvinek (> 10,000 buněk / mm ³), nebo významné snížení v polymorfonukleárních buněk (<1000 PMN / mm ³). Stejně jako multiorgánové zhoršení nebo ztráta vitality, mimo jiné varovné signály.

Bakterémie může být konstantní, přechodná nebo přerušovaná. To je důležité při odběru vzorku, protože je nutné ho odebrat, pokud existuje větší pravděpodobnost, že mikroorganismus cirkuluje.

Proto se doporučuje odebrat alespoň 2 vzorky na různých místech. Ideální je také to, že vzorek je odebírán v horečnatých vrcholcích nebo když pacient vykazuje třes, extrémní podchlazení, pocení nebo tachykardii.

Aby však byla krevní kultura skutečně užitečným nástrojem, musí být vzorek odebrán s mimořádnou péčí. Špatná manipulace nebo špatná asepsie v okamžiku odběru vzorku mohou test zneplatnit a získat falešně pozitivní výsledky.

Základ

Studie spočívá v aseptickém odběru dvou nebo tří vzorků krve a jejich umístění do zvláštních lahví.

Speciální zařízení pro kultivaci vzorků krve se nazývají láhve na kultivaci krve. Jsou rozděleny do:

Podle věku pacienta

-Pediatrické použití

-Pro dospělé.

Podle typu mikroorganismu

- Baňky pro aerobní mikroorganismy (aerobní bakterie, fakultativní bakterie a houby).

-Krevné kultivační láhve pro anaerobní mikroorganismy (přísné anaerobní bakterie).

Některé obsahují kapalné kultivační médium a jiné obsahují pevné a kapalné kultivační médium současně. Existují také s částicemi aktivního uhlí.

Proces

Doporučení pro odběr vzorků

- Vzorek, který má odebrat vysoce vyškolený a vyškolený personál v oblasti mikrobiologie.

- Asepsa nebo důkladné vyčištění místa odběru vzorků je nepochybně nejdůležitějším krokem.

- Stejně jako u všech odběrů vzorků musí zdravotnický personál během procesu plně dodržovat opatření biologické bezpečnosti (mimo jiné použití rukavic, oděvů, brýlí).

- Dbejte na to, aby byly k dispozici všechny potřebné nástroje pro odběr vzorků.

- Označte lahvičky celým jménem pacienta, datem, číslem lékařského záznamu, dobou odběru vzorku a sekvenčním číslem laboratoře.

- Ideální je odebrat vzorek dříve, než pacient zahájí antimikrobiální terapii. Pouze v případě podezření na nefunkčnost probíhající léčby. V tomto případě by měl být vzorek odebrán před změnou léčiva pomocí lahví na kultivaci krve s inhibitory antibiotik (částice aktivního uhlí).

- Nejméně 2 vzorky musí být odebrány na různých anatomických místech, jako je pravá paže a levá paže. U podezření na endokarditidu se doporučuje 3 vzorky. Do každého vzorku budou zahrnuty dvě láhve (jedna pro aerobiózu a druhá pro anaerobiózu).

Množství vzorku

Množství vzorku se liší podle věku pacienta, ale poměr 1: 5 až 1:10 by se měl vždy udržovat s ohledem na ředění vývaru krve / kultury.

U novorozenců je doporučené množství vzorku 1 ml krve na lahvičku. Používá se dětská láhev.

V případě kojenců od jednoho měsíce do jednoho roku může být zvýšena na 1,5 ml krve na láhev. Používá se dětská láhev.

U dětí starších než 2 roky je odpovídající množství vzorku 2,5 ml krve na lahvičku. Používá se dětská láhev.

Od dospívání se může zvýšit na krevní objem mezi 5 - 10 ml v lahvi. Používá se láhev pro dospělé.

Nakonec v dospělosti je potřebné množství 8-10 ml na láhev. Používá se láhev pro dospělé.

Vzorkování

- Vzorek krve může být žilní nebo arteriální. Arteriální krev se však odebírá pouze v případě, že není možné odebrat žilní odběr.

- Nedoporučuje se odebírat vzorek z centrálního žilního katétru, pokud:

1. Je nemožné odebrat vzorek periferně (žilní nebo arteriální).
2. Pacienti s rizikem krvácení.
3. Když lékař má podezření na bakterémii kvůli kontaminaci centrálního žilního katétru.
4. Když se horečka znovu objeví po horečnatém ukončení 4 až 5 dnů, bez ohledu na to, zda je pacient na antimikrobiální léčbě.

Asepsa před odběrem vzorků

- Vyberte anatomická místa pro odběr vzorků. Obecně se vybírají žíly nejlepšího kalibru (bazilická nebo cefalická žíla).

- Podle Centers for Disease Control (CDC) v Atlantě (USA) musí obsluha kromě odběru rukavic ještě před odběrem vzorků umýt ruce 2% chlorhexidinem nebo 10% povidon jodem.

-Palujte a vyhledejte žílu, která má být použita.

- Očistěte oblast vpichu rotačním způsobem a pohyby od středu směrem ven pomocí mýdlového chlorhexidinu nebo antiseptického mýdla. Opláchněte sterilním fyziologickým roztokem.

Následně naneste antiseptikum a nechte ho působit. Příklad chlorhexidin glukonát 0,5% po dobu 1 minuty nebo povidon jod 10% po dobu 2 minut. U posledně jmenovaných se nejprve zeptejte, zda je pacient alergický na jód. Pokud jste alergický, můžete nahradit 70% alkoholu.

Extrakce vzorku

- Umístěte turniket, aby se zhoršil průtok krve a vylíhla žíla.

- Nedotýkejte se místa vpichu prstem. Pokud je to nezbytně nutné, měl by se prst prát stejným způsobem jako oblast vpichu.

-Vložte injekční jehlu nebo pokožku hlavy do žíly a extrahujte potřebné množství krve.

- Při vyjímání jehly nedávejte na jehlu bavlnu ani gázu, pokud není sterilní.

- Odstraňte bezpečnostní pečeť z lahví velmi pečlivě a bez doteku víčka. Někteří autoři doporučují provést dezinfekci víčka před naočkováním vzorku.

- Rozdělte příslušné množství krve do lahviček. Pokud je vzorek odebrán injektorem, potřebné množství se nejprve nalije do anaerobní baňky a poté do aerobní baňky. Pokud se odběr provádí pomocí vlasové pokožky (motýla), nalije se opačným způsobem.

- Invertujte lahvičku s kultivační krví jemně.

- Vyměňte rukavice a opakujte předchozí kroky pro druhý odběr vzorků.

- Pokud je druhý vzorek odebrán z jiného webu, lze to provést okamžitě, ale pokud je ze stejného místa, musíte počkat 30 až 90 minut mezi jedním vzorkem a druhým.

- Vzorek musí být odebrán do laboratoře co nejdříve, pokud to není možné, musí být ponechán při pokojové teplotě po dobu až 18 hodin.

Kultura

Jednou v laboratoři se baňky inkubují při 37 ° C za podmínek každé baňky, tj. V aerobióze a anaerobióze.

Podle manuální metody by mělo být zazvonění zahájeno po 24 hodinách inkubace a poté zazvoněno denně. Kroužky se provádějí následujícím způsobem: nejprve se dezinfikuje uzávěr láhve a vloží se jehla sterilního injektoru. Kapalina se extrahuje z baňky a setí se na krevním agaru a čokoládovém agaru.

Pokud dojde k růstu, provede se Gram, subkultury ve specifických médiích, biochemické testy a antibiogram.

U automatizovaných metod vydává zařízení Bact / Alert poplach, když zjistí, že je lahvička pozitivní. Stejným způsobem by měl být poklepán na krevní agar a čokoládový agar.

Další metodou, která získává půdu, je analýza baňky po 6 hodinách inkubace pomocí hmotnostní spektrometrie. Tato metoda pomohla zvýšit citlivost a rychlost diagnostiky.

Výsledek

Dokud je lahvička na kultivaci krve negativní, mohou být ošetřujícímu lékaři podány předběžné průběžné zprávy. Zpráva naznačuje, že je negativní v hodinách, kdy byla inkubována. Například, pokud bude negativní až do čtvrtého dne, bude to hlášeno následovně:

Předběžný výsledek: negativní kultura po 96 hodinách inkubace.

Poznámka: studie pokračuje 240 hodin.

Pokud je krevní kultura pozitivní, je ošetřující lékař okamžitě informován a je odeslána zpráva s alespoň gramem kolonie. Příklad:

Předběžný výsledek: v pozitivní kultuře po 48 hodinách inkubace jsou pozorovány gramnegativní bacily a negativní oxidáza. Probíhá testování identifikace a citlivosti.

Tato informace vede ošetřujícího lékaře k zahájení empirické terapie směrem k možnému mikroorganismu, zatímco čeká na konečný výsledek laboratoře.

Po ukončení bakteriologické studie, to znamená, že byl identifikován mikroorganismus a je k dispozici antibiogram, by měla být závěrečná zpráva odeslána co nejdříve.

Zvláštní pozornost by měla být věnována, pokud je cílovým mikroorganismem Neisseria gonorrhoeae nebo Neisseria meningitidis, protože tyto bakterie jsou inhibovány v přítomnosti vysokých koncentrací polyanethosulfonátu sodného (SPS).

Proto by tato sloučenina neměla překročit 0,025% v lahvích na kultivaci krve.

Na druhé straně, pokud je vzorek krve poprvé odebrán do Vacutainerových zkumavek, mají tyto zkumavky koncentrace SPS toxické pro meningokoky a gonokoky, takže krev musí být přenesena do 1 hodiny do živného kultivačního systému.

Jak zjistit, zda je krevní kultura pozitivní nebo kontaminovaná

Krevní kultura je považována za kontaminovanou, pokud z celkového odebraného množství roste pouze jedna lahvička s krevní kulturou. A podezření na kontaminaci se zvyšuje, pokud je izolovaný mikroorganismus obvyklou kožní mikrobiotou: příklad: Staphylococcus coagulase negativní, Propionibacterium spp.

U imunokompromitovaných pacientů by se však neměl zanedbávat žádný mikroorganismus, ale v tomto případě by se měl mikroorganismus objevit v několika vzorcích.

Na druhou stranu, pokud citlivost stejného mikroorganismu izolovaného ve dvou různých vzorcích na antibiotika trvá současně, infekce je skutečná.

Další charakteristikou je bakteriální zátěž, protože kontaminované krevní kultury rostou pozdě, zatímco skutečné infekce u neléčených pacientů jsou obecně pozitivní po 14 hodinách inkubace, když je mikroorganismus neruší.

Na druhé straně u pacientů léčených antimikrobiálními látkami může růst mikroorganismů trvat dlouho, protože zátěž je velmi nízká.

Vzhled více než jednoho mikroorganismu může naznačovat kontaminaci, ale pokud se stejný výsledek opakuje na několika záběrech z různých míst, pak je skutečný.

Reference

1. "Krevní kultura." Wikipedia, encyklopedie zdarma. 3. července 2019, 17:28 UTC. 14. července 2019, 19:05 en.wikipedia.org
2. Hervé B. Nové technologie v mikrobiologické diagnostice: automatizace a některé aplikace v mikrobiální identifikaci a studii citlivosti. Med. Clin. Se počítá. 2015; 26 (6) 753-763. K dispozici na adrese: reader.elsevier.com
3. Villarroel P. Kapitola 20: Sepse a riziko kardiovaskulárních chorob. Kardiovaskulární zdraví. str. 187-194. K dispozici na adrese: fbbva.es
4. Sánchez R, Rincón B, Cortés C, Fernández E, Peña S, Heras EM Krevní kultury: Co ti řekli a co děláš? Nemocný glob. 2012; 11 (26): 146-163. K dispozici na adrese: scielo.isc
5. Pardinas-Llergo M, Alarcón-Sotelo A, Ramírez-Angulo C, Rodríguez-Weber F, Díaz-Greene E. Pravděpodobnost úspěchu získání pozitivní krevní kultury. Med. Interna Mex. 2017; 33 (1): 28-40. K dispozici na adrese: scielo.org