MŮŽE GRÜNWALD-GIEMSA SKVRNA: ZDŮVODNĚNÍ, TECHNIKA A POUŽITÍ - BIOLOGIE - 2025

May Grünwald-Giemsa nebo Pappenheim skvrna je diferenciální barvení technika, která směsi Giemsa a May Grünwald činidla. Používá se pro diferenciaci normálních a abnormálních krvinek v nátěrech periferní krve a kostní dřeně, jakož i pro barvení histologických řezů a cytologických vzorků.

Obě činidla - Gemsa a May Grünwald - jsou odvozena od barvení Romanowského typu, což je technika, která je založena na kombinaci kyselých a zásaditých barviv.

Roztěr, který vykazuje segmentovaný neutrofil a milleocyt v případě chronické myeloidní leukémie, obarvený barvením May Grünwald Giemsa. Dr. Ramon Simon-Lopez (https://es.m.wikipedia.org/wiki/Archivo:LMC-1.JPG) prostřednictvím Wikipedia.org.

Giemsa zlepšil tuto techniku ​​stabilizací směsi eosinu, methylenové modři a jejich derivátů s glycerolem. Místo toho May Grünwald používá eosin a methylenovou modrou a jako rozpouštědlo používá methanol. Tato strategická kombinace přinesla vynikající výsledky.

Ačkoli co se týče pozorování buněčné morfologie, působí podobně jako Giemsa a Wrightovy skvrny, tato technika zlepšuje ty předchozí tím, že vylepšuje barvení parazitů, které způsobují malárii, Chagasovu chorobu, leishmaniózu a trichomoniázu.

Kromě toho se ukázalo jako velmi užitečná technika pro cytologické studium spermatické tekutiny. Vyniká nejen tím, že vykazuje morfologické vlastnosti spermií, ale také umožňuje s velkou účinností diferenciaci leukocytů, epiteliálních buněk a buněk spermatogeneze.

Základ

Tato technika sleduje založení Romanowského skvrny, ve kterém kyselá barviva mají selektivní afinitu k základním buněčným složkám a kyselé složky přitahují základní skvrny.

Jinými slovy, jak buněčné struktury, tak barviva mají kladné nebo záporné elektrické náboje; jako poplatky odpuzují a různé poplatky přitahují.

Například základní barviva, jako je methylenová modrá, jsou kladně nabity a přitahovány k negativně nabitým strukturám. Proto toto barvivo obarví jádra bohatá na DNA a RNA, které mají negativně nabité fosfátové skupiny.

Rovněž jsou obarveny granule segmentovaných bazofilů a cytoplazmy mononukleárních bílých krvinek obsahujících RNA.

Podobně kyselé barvivo nese záporný náboj, a proto se váže na pozitivně nabité struktury, jako jsou erytrocyty a granule segmentovaných eosinofilů. Pokud jde o granule segmentovaných neutrofilů, tyto fixují obě barvy.

Rozmanitost barviv

V této technice koexistuje kombinace reakcí mezi ortochromatickými a metachromatickými barvivy. Orthochromatika (eosin a methylenová modrá) se váže na buněčnou strukturu, ke které se vztahují, a poskytuje stabilní barvu, která se nemění.

Na druhé straně, metachromaty (deriváty methylenové modři azurové A a azurové B) mění svou původní barvu, jakmile jsou připojeny ke specifické struktuře, a dokonce mohou existovat různé odstíny.

Nakonec, krok, který májové řešení Grünwalda vyžaduje, vyžaduje přítomnost vody, protože bez tohoto by barvivo proniklo strukturami, ale neopravilo se. Aby k tomu došlo, musí se barvivo stát polárním nebo ionizujícím, a tak musí být schopno srážet a vázat se na příbuzné struktury.

Technika

materiály

- Posuňte snímky.

- Mosty zbarvení.

- May-Grünwaldovo řešení.

- Giemsa skvrna.

- Destilovaná voda.

Může koncentrovaný roztok barviva Grünwald

Naváží se 0,25 g eosin-methylenové modři (barvení podle May Grünwalda) a rozpustí se ve 100 ml methanolu. Poté se přípravek míchá po dobu 1 hodiny a nechá se odpočívat po dobu 24 hodin. Když čas vyprší, filtruje se.

K použití této techniky musí být May Grünwaldovo barvivo zředěno takto: pro 200 ml zředěného barviva změřte 30 ml koncentrovaného roztoku, přidejte 20 ml tlumivého roztoku a 150 ml destilované vody upravené na pH 7,2–7,3.. Později je smíchán a filtrován.

Koncentrát skvrny Giemsa

Naváží se 0,5 g azurově-eosin-methylenové modři (barvení podle Giemsy), rozpustí se v 50 ml methanolu a ke směsi se přidá 50 ml glycerinu.

Chcete-li provést tuto techniku, zřeďte 1:10 pufrovacím roztokem a nechte ji 10 minut odpočívat. V případě potřeby lze filtrovat.

Příprava pufrového roztoku při pH 7,2

Měly by být zváženy:

- 40 mg dihydrogenfosforečnanu draselného (KH2PO4).

- 151 mg 12-hydrátu hydrogenfosforečnanu sodného (Na2HP04).

Obě sloučeniny se rozpustí ve 100 ml vody.

Postup barvení stěrem krve nebo kostní dřeně

Existují dva režimy: klasický a rychlý.

Klasický režim

1. Nátěry zakryjte 2 až 3 minuty zředěným roztokem May-Grünwalda.
2. Promyje se pufrovanou destilovanou vodou, aby se odstranil předchozí roztok.
3. Zakryjte stejným pufrovaným promývacím roztokem a nechte působit 1 minutu. Myšlenka je taková, že předchozí barvivo se váže ke strukturám a současně jsou buňky hydratovány.
4. Přidejte 12 kapek zředěné tinktury Giemsa do pufrované vody a vyfukujte, aby se promíchala a homogenizovala. Nechte ji odpočívat po dobu 15 až 20 minut.
5. Omyjte stěrky destilovanou vodou a nechte je uschnout na vzduchu.
6. Zaostřete a prohlédněte si obarvené krvinky pod světelným mikroskopem pomocí objektivu 40X. V případě potřeby lze použít 100X.

Rychlý režim

1. Potěr zakryjte zředěnou May Grünwaldovou skvrnou po dobu 1 minuty.
2. Promyjte pufrovanou destilovanou vodou.
3. Zakryjte pufrovanou vodou a nechte 1 minutu odpočívat.
4. Přidejte zředěnou skvrnu Giemsa a nechte působit 5 minut.
5. Promyjte pufrovanou destilovanou vodou a nechte uschnout na vzduchu.

Techniky popsané v tomto dokumentu jsou vodítkem, ale je třeba vzít v úvahu, že postupy a doby barvení se liší podle komerční společnosti, která distribuuje činidla. Je vhodné dodržovat kroky přísně uvedené v každém obchodním domě.

Technika pro barvení nátěrů spermatických tekutin

1 - Potěr zakryjte tenkou vrstvou roztoku May Grünwald po dobu 4 minut.

2 - Odstraňte barvivo a omyjte destilovanou vodou.

3 - Umístěte vrstvu zředěné Giemsy (1:10) do destilované vody po dobu 15 minut.

4. Odstraňte barvivo a omyjte destilovanou vodou.

5- Nechte zaschnout a pozorujte pod mikroskopem.

Očekávané barvy s květnovou skvrnou Grünwald Giemsa

Důležité specifikace

Tato technika vyžaduje, aby reagencie a promývací roztoky měly pH upravené na 7,2 až 7,3, takže afinity barev k buněčným strukturám nebudou zkresleny a očekávaná konečná barva se nemění.

Aplikace

Tuto techniku ​​používají klinické laboratoře k barvení nátěrů periferní krve a kostní dřeně, tkáňových řezů a cytologií.

V hematologické oblasti má tato technika zásadní význam při studiu abnormalit buněk z hlediska tvaru, velikosti a počtu. Je to velmi cenný nástroj pro diagnostiku určitých nemocí, jako jsou leukémie a anémie.

Kromě toho má vynikající využití při hledání parazitů v hematologických oblastech (Plasmodium sp a Trypanosoma cruzi) nebo histologických (Leishmanias sp).

Vaginální cytologie

Pokud jde o vaginální cytologii, je tato technika zvláště výhodná pro pozorování Trichomonas vaginalis. Toto je důležité zjištění, protože jeho přítomnost simuluje karcinomové obrazy in situ, které později zmizí, když je parazit odstraněn.

Vzorek spermie

Byl to ideální nástroj pro studium vzorků spermií, protože poskytuje cenné informace o kvalitě spermatu.

Údaje, které nabízí, se týkají hlavně počtu a morfologie, jakož i souběžných buněk, které mohou být přítomny a které jsou životně důležité, jako jsou zárodečné buňky, leukocyty a epitelové buňky.

Touto analýzou je možné popsat abnormality pozorované ve spermiích v hlavě, krku, střední části a hlavní části.

Kromě toho mohou také pomoci ukázat případy hemospermie (přítomnost červených krvinek v spermatu) a leukospermie nebo piospermie (zvýšený počet leukocytů v spermatu).

Reference

1. Costamagna S, Prado M. Validace čerstvého testu, květen Grünwald-Giemsa a Gram, barvení a kultivační média pro diagnostiku Trichomonas vaginalis. Parasitol. 2001; 25 (1-2): 60-64. K dispozici v: scielo.
2. Merck KGaA Laboratory. Může Grünwald eosin methylenová modrá pro mikroskopii.
3. "May-Grünwald-Giemsa skvrna." Wikipedia, encyklopedie zdarma. 15. listopadu 2018, 14:37 UTC. 8. ledna 2019, 04:29: en.wikipedia.org
4. Laboratoř skleněných chemikálií Panreac. Činidla pro histologické techniky, hematologii a mikrobiologii. K dispozici na adrese: glasschemicals.com
5. Retamales E, Manzo V. Doporučení pro barvení krevních nátěrů pro čtení hemogramu. Národní a referenční biomedicínská laboratoř. Ústav veřejného zdraví Chile.
6. Sarabia L. Spermiogram podle kritérií WHO. Program vývojové anatomie a biologie. Lékařská fakulta. Chilská univerzita. K dispozici na adrese: pp.centramerica.com