KOAGULAČNÍ TEST: ZDŮVODNĚNÍ, POSTUP A POUŽITÍ - BIOLOGIE - 2025

Test koaguláza je laboratorní technika používaná ke zjišťování přítomnosti enzymu koaguláza. Tento enzym má vlastnost koagulace plazmy. Loeb v roce 1903 byl první, kdo popsal tento enzym.

Tento test se provádí na grampozitivních, katalázově pozitivních kokách, což umožňuje odlišit kmeny Staphylococcus aureus od zbytku stafylokoků, protože je jediným mikroorganismem klinického významu, který jej produkuje.

Oba obrázky ukazují pozitivní koagulační test. Zdroj: Levý obrázek: Philippinjl. Pravý obrázek: Fotografie pořízená autorem MSc. Marielsa Gil.

V tomto smyslu jsou členové rodiny Staphylococaceae, kteří testují negativní, často označováni jako koagulázově negativní Staphylococcus.

Existují i ​​jiné kmeny než S. aureus, které mohou produkovat koagulázu, jako jsou například koagulanty Staphylococcus schleiferi spp, S. hyicus, S. intermedius a S. delphini.

První tři jsou však na veterinární úrovni klinicky důležitá a lze je jen zřídka nalézt jako původce infekcí u lidí, zatímco S. delphini se vyskytuje pouze v mořském prostředí.

Kromě toho se snadno rozlišují, protože S. hyicus a S. intermedius nefermentují mannitol a S. schleiferi spp koagulanty nefertují maltózu ani trehalózu, zatímco S. aureus fermentuje tyto uhlohydráty.

Přítomnost enzymu koaguláza je spojena s virulencí kmenů. Tato teorie se však rozpadá, protože jsou pozorovány další virulentní koaguláza-negativní druhy schopné vyvolat významné infekce.

Základ

Výklad

Aglutinace během 5-20 sekund (silný pozitivní test).

Variabilní aglutinace nastávající mezi 20 sekundami a 1 minutou (pozitivní zpožděný test).

Určitý stupeň aglutinace po jedné minutě (pochybné důkazy). Doporučuje se opakovat test nebo potvrdit metodou zkumavky.

Neexistuje žádná aglutinace (negativní test).

Výsledek s SSF. Musí vždy dávat záporný, pokud dává kladný výsledek automaticky, je výsledek testu neplatný.

-Tube koagulační test

materiály

- Sterilní zkumavka

-Plazma

-Bath Marie při 37 ° C

Technika

Napipetujte 0,5 ml plazmy do sterilní pipety do zkumavky o objemu 12 x 75. Vložte platinovou smyčku do 2 až 4 čistých kolonií, abyste mohli studovat z pevné kultury po dobu 18 až 24 hodin a rozpustit se v plazmě opatrně promíchejte a inkubujte při 37 ° C po dobu 4 hodin.

Zkoumejte zkumavku v první hodině, aniž byste ji třepali, jen ji jemně nakloňte. Pokud není sraženina stále vidět, může být pozorována každých 30 minut, dokud nejsou dokončeny 4 hodiny. Pokud je po 4 hodinách stále negativní, může být ponechán až 24 hodin, ale při pokojové teplotě. Sledujte a ohláste výsledek.

Na základě zkušeností někteří mikrobiologové doporučují k provedení testu použít 500 µl bakteriální suspenze z 18-hodinové kultury v kapalném médiu.

Zdá se, že nabízí rychlejší a spolehlivější výsledky než při emulgaci kolonií z pevného média, zejména pokud byla použita lidská plazma získaná z krevní banky.

Použití kmenů z vývaru pomáhá zředit možnou přítomnost lidských anti-stafylokokových protilátek v plazmě, které mohou inhibovat působení koagulázy.

Výklad

Pokud je vidět sraženina, která zahrnuje veškerou tekutinu (úplné srážení) nebo sraženina s ničím ve zbývající tekutině (částečné srážení), mělo by se to považovat za pozitivní test.

Pokud se nevytvoří žádná sraženina, to znamená, že suspenze zůstává homogenní, je test negativní.

- Test na koagulázu s použitím fibrinogenu

Fibrinogen se používá stejně jako plazma a používá se jak pro sklíčka, tak pro zkumavky. Postupujte podle popisu pro plazmu a interpretujte stejným způsobem.

Použití

Používá se k odlišení Staphylococcus aureus od koagulázově negativních stafylokoků.

QA

Mějte k dispozici čerstvé kultury kmene S. aureus, které je možné použít jako pozitivní kontrolu. Kmen S. epidermidis je také k dispozici jako negativní kontrola.

Omezení

- Pozitivní test by neměl být ponechán v inkubaci po dobu 24 hodin, protože S. aureus produkuje fibrinolysin, který rozpustí sraženinu.

- Pro spolehlivý test by měla být použita čerstvá nebo nově rekonstituovaná plazma, stejně jako je důležité používat čerstvé bakteriální kultury (18 až 24 hodin). Tím se zabrání falešným negativům.

-Zkouška musí být provedena společně s negativní a pozitivní kontrolou.

- Některá pevná média mohou rušit koagulační test. Nedoporučuje se používat kolonie ze slaného mannitolového agaru.

-Pokud se používá citrátová plazma, doporučuje se umístit 5 jednotek heparinu na ml plazmy, aby se zabránilo falešně pozitivním výsledkům. Je tomu tak proto, že některé mikroorganismy jiné než S. aureus mohou rozkládat citrát a způsobit srážení plazmy. V tomto případě je vhodné provést Gramův test a katalázu.

- Při testování zkumavky je důležité monitorovat reakci každých 30 minut, protože existují kmeny S. aureus, které produkují vysoké koncentrace fibrinolysinu a rychle zředí nově vytvořenou sraženinu. Vyhněte se falešným negativům.

- Při sledování testu se vyhněte náhlému třepání zkumavky, což může zničit iniciaci tvorby sraženiny, která nebude později obnovena, což způsobí falešné negativy.

Reference

1. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologická diagnostika. 5. ed. Editorial Panamericana SA Argentina.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey a Scott Mikrobiologická diagnostika. 12 ed. Editorial Panamericana SA Argentina.
3. Mac Faddin J. (2003). Biochemické testy pro identifikaci bakterií klinického významu. 3. ed. Editorial Panamericana. Buenos Aires. Argentina.
4. Pro-Lab Laboratories. Králík koaguluje plazmu. K dispozici na adrese: prolab.com
5. "Koaguláza." Wikipedia, encyklopedie zdarma. 12. února 2019, 04:23 UTC. 22. dubna 2019, 15:50 wikipedia.org.