KONGO ČERVENÁ: VLASTNOSTI, PŘÍPRAVA A APLIKACE - BIOLOGIE - 2025

Konžské červeně je azobarvivo proteiny tvořenými spojením diazoniové soli a aktivní aromatický kruh. Tato látka je schopna absorbovat elektromagnetické záření ve viditelném spektru, proto má intenzivní barvu.

Je záporně nabitá. Má tedy afinitu k pozitivně nabitým buněčným složkám, jako jsou určité proteinové látky. Jeho barva se mění v závislosti na pH. V tomto smyslu, pokud je médium kyselé (<než pH 3), je barva intenzivní modrá. Mezi pH 3 - pH 5,2 je fuchsie (soustružená zóna) a při> pH 5,2 je barva tmavě červená.

Koloidní roztok dehydratované Kongo Red a Kongo Red. Zdroj: Pixinio.com a Wikipedia.com

Je to velmi všestranná látka, protože má více použití. Používá se jako barvivo v textilním průmyslu a také pro buňky a textilie.

Také připravit kultivační média, která měří enzymatický účinek jako indikátor pH, jako kontrolní látku při hodnocení správného fungování spektrofotometrů, při studiu tvorby biofilmu nebo při diagnostice amyloidů.

Rovněž umožnilo rozlišit bakteriální a fungální sérotypy identifikací specifických struktur v jejich stěně (lipopolysacharidy).

Vlastnosti Kongo červené

Tuto látku objevil Böttiger v roce 1884. Jedná se o derivát diazonia tvořený bis-diazoovou kyselinou benzidinu s naftionovou kyselinou. Konžská červená molekula měří 21 Armstrong a molekulová hmotnost je přibližně 8000 g / mol.

Konžská červená se vyznačuje tím, že je rozpustná ve vodě, a ještě více v organických rozpouštědlech, jako je ethanol, vytváří koloidní roztok.

Má afinitu k celulóze, k amyloidní tkáni ak pozitivně nabitým buněčným složkám.

Příprava

Kongo červená se připravuje v různých koncentracích v závislosti na použité technologii. Nejčastěji se používá Kongo červená v množství 1%, 2%, 0,1%.

Například pro přípravu 2% konžské červeně by se měly zvážit 2 g dehydratovaného potravinářského barviva a přidat 100 ml destilované vody. Poté se uchovává v jantarové láhvi.

Aplikace

Jako barvivo v textilním průmyslu

Po dlouhou dobu se široce používal v textilním průmyslu kvůli jeho fixaci na bavlnu, ale v současné době je nepoužíván, protože je karcinogenní a také proto, že barva není stabilní, a díky tření se zbarvila.

Stanovení kapacity tvorby biofilmu

Ukázalo se, že schopnost mikroorganismů tvořit biofilmy je faktorem virulence.

V tomto smyslu se kongo červené barvivo používá jako metoda pro stanovení tvorby biofilmu. Kongo červená se váže na exopolysacharidy přítomné v biofilmu. Ve srovnání s jinými metodami je však nejméně doporučován vzhledem k vysokým výskytům falešných negativů.

Metoda používá agar s červeným Kongem, který se skládá z krevního agaru jako báze, glukózy (10 g / l) a kongo červeného barviva (0,4 g / l). Kmen, který má být hodnocen, se naočkuje do média a inkubuje se po dobu 24 hodin při 37 ° C a následně se inkubuje po dobu 48 hodin při teplotě místnosti.

Pozitivní test se prokáže, pokud jsou pozorovány krystalické kolonie černé barvy a suchého vzhledu.

Kontrola kvality spektrofotometrů

Pro vyhodnocení toho, zda zařízení pro měření absorbance nebo transakce vyhovuje fotometrickým parametrům stanoveným mezinárodními předpisy, lze použít jednoduchou techniku ​​k určení, zda zařízení emituje výsledky v rozsahu přijatelnosti.

Jednou z technik hodnocení je použití konžské červeně na základě izosbestického bodu.

Isosbestickým bodem je vlnová délka, při které červená kongo vyzařuje stejnou absorbance nezávisle na pH, koncentraci a teplotě. Hodnota absorbance je pevná a může být použita jako reference.

Teoretický izosbestický bod konžské červeně je známý jako 541 nm. Pokud je získaná hodnota jiná, je známo, že zařízení má problémy s vlnovou délkou a musí být zkontrolováno specializovaným technikem.

Příprava kultivačních médií

Ortiz et al. Popište kultivační médium připravené z konžského červeného barviva a karboxymethylcelulózy zvané CMC agar, aby se detekovaly buněčné mikrobiální kmeny; tj. výrobci celulázy (endoglukony, exoglukanázy a ß-glukosidáza).

Toto médium má intenzivní zbarvení. Barva bude rozptýlena působením endoglukanasového enzymu, který narušuje strukturu karboxymethylcelulózy. To naznačuje pozitivní reakci.

Snížení viskozity a absorbance umožňuje kvantifikaci enzymatické aktivity. Například u kmenů Streptomyces sp.

Identifikace mikroorganismů

Kongo červená má afinitu k polysacharidovým strukturám určitých kmenů, čímž se dosahuje identifikace těchto mikroorganismů. Mezi nimi jsou Escherichia coli a Shigella flexneri.

K získání charakteristických kolonií se používají také agarové misky z Konga červeného, ​​jako je tomu u Azospirillum sp, který mimo jiné dává šarlatově červené kolonie.

Skvrny od buněk a tkání

Jednou z nejčastějších aplikací konžské červeně je její užitečnost při diagnostice amyloidózy. Toto podivné onemocnění spočívá v extracelulární akumulaci abnormálního proteinu v různých orgánech. Tento abnormální protein se vyrábí v kostní dřeni a nazývá se amyloid.

Kongo červená má vysokou afinitu k této látce. Tato vlastnost byla použita k prokázání její přítomnosti v histologických řezech tkáně. K tomuto účelu se používá konžská červená ve spojení s hematoxylinem / eosinem.

Spojení amyloidní tkáně a konžské červeně probíhá prostřednictvím nepolárních vodíkových vazeb mezi karboxylovými skupinami a aminoskupinami. Amyloidový protein poskytuje karboxylové skupiny (COOH) a konžská červená aminoskupina.

Amyloidní tkáň je barvena v různých odstínech od růžové po tmavě červenou, když je vidět pod světelným mikroskopem. V mikroskopech s dvojnásobně polarizovaným světlem jsou tyto přípravky pozorovány s patognomonickým jabloňovým dvojlomem.

To znamená, že představují dichroismus, protože amyeloidní vlákna jsou anizotropní. Toto pozorování potvrzuje diagnózu.

Tkáňové barvení konžskou červení je kompatibilní s dalšími diagnostickými metodologiemi, jako jsou imunocytochemické metody, a může být dokonce znovu zabarveno.

Jako indikátor pH

Vlastnost otáčení proti změnám pH je používána technikou zvanou chromoendoskopie.

Tato technika používá barviva a indikátory pH, které umožňují detekci určitých patologií. Mezi nimi je použití konžské červeně, která může odhalit ložiska včasné rakoviny v žaludeční sliznici, která se používá jako marker kyselosti.

Tato technika je založena na skutečnosti, že konžská červeň při kyselém pH je černá. Proto po umístění roztoku konžské červeně na žaludeční sliznici budou vybrány oblasti, kde je bledost, aby byl odebrán vzorek pro biopsii, tj. Tam, kde nedochází k produkci kyseliny. To naznačuje přítomnost rakovinného fokusu nebo ztrátu parietálních buněk.

Reference

1. "Kongo červená." Wikipedia, encyklopedie zdarma. 8. května 2019, 12:13 UTC. 16. května 2019, 04:08, es.wikipedia.org.
2. Ortiz M, Uribe D. Nová metoda pro kvantifikaci endoglukanasové aktivity na bázi komplexu celulóza-Kongo. Orinoquia. 2011 červen; 15 (1): 7-15. K dispozici na adrese: scielo.org.
3. Peña J, Uffo O. Produkce biofilmu v genotypech Staphylococcus aureus izolovaných z bovinní mastitidy na Kubě. Rev Salud Anim.. 2013 prosinec; 35 (3): 189-196. K dispozici na adrese: scielo.s
4. Fich F, Chahuán M, Farías M, Cárdenas C, Abarzúa A, Araya G a kol. Kožní projevy systémové amyloidózy jako diagnostického klíče: Klinický případ. Rev. zdravotník. Chile. 2012 duben; 140 (4): 499-502. K dispozici v: scielo.
5. Duymovich C, Acheme R, Sesini S, Mazziotta D. Spektrofotometry a fotokolorimetry Praktický průvodce aktualizací. Acta Bioquímica Clínica Latinoamericana 2005, 39 (září-prosinec): K dispozici na: redalyc.org
6. Marín J, Díaz J a Solís J. Chromoendoskopie u infekce Helicobacter pylori: je to reakční doba? Rev Esp Enferm Dig 2012; 104 (1): 1-3
7. Fieser L, Fieser M. 1985. Organická chemie. Redakční reverté. Barcelona, ​​Španělsko. K dispozici na adrese: books.google.co.ve
8. Murillo M. Techniky barvení histologické tkáně. University of Guadalajara, Mexico. K dispozici na adrese: academia.edu
9. Paillié M. Stanovení celulolytické, ligninolytické a amylolytické aktivity Actinobacteria izolovaných z rhizosférické půdy jetele bílého (Trifolium repens). 2012. Pontificia Universidad Javeriana Přírodovědecká fakulta Průmyslová mikrobiologie Bogotá DC Dostupné na: repository.javeriana.edu.co
10. Cárdenas, D, Garrido M, Bonilla R a Baldani V. Izolace a identifikace Azospirillum sp. na guinejské trávě (Panicum maximum Jacq.) z údolí Cesar. Pastviny a píce, 2010; 33 (3): 1-8 K dispozici v: scielo.