SAFRANIN: VLASTNOSTI, POUŽITÍ, TECHNIKY, TOXICITA - CHEMIE - 2025

Safranin je meriquinoide barvivo, pojmenovaný pro jeho chemické struktury, která má dva benzenoidním kruhy a 2 chinoidní kroužků, druhé bytí ty, které poskytují červené barvy.

To je také nazýváno dimethyl safranin nebo základní červená 2 ve své krátké formě, protože jeho vědecký název je 3,7-diamino-2,8-dimethyl-5-fenyl-phenaziniumchloro dimethyl safraninem a chemický vzorec je C ₂₀ H ₁₉ N ₄ Cl.

Chemická struktura safraninu označující benzenoidní a chinoidní kruhy / Vodný roztok safraninu. Zdroj: NEUROtiker editoval MSc. Marielsa Gil / LHcheM

Existuje varianta nazvaná trimethyl-safranin, ale mezi těmito dvěma látkami není významný rozdíl.

Safranin je monochromatické barvivo a v závislosti na vlastnostech chemického vzorce je pozitivně nabitá látka. Proto má afinitu k negativně nabitým strukturám. Tyto struktury budou obarveny červeně.

Tato vlastnost umožňuje použití v mnoha histologických technikách pro barvení různých buněčných struktur, jak eukaryotických, tak prokaryotických organismů.

Safranin se používá jako kontrastní barvivo v důležitých a dobře známých technikách pro rutinní použití v bakteriologii. Tyto techniky jsou: Gram-Huckerovo barvení, Schaeffer Fultonovo barvení pro spory nebo barvení bakteriálních tobolek.

vlastnosti

Inspirací pro pojmenování tohoto barviva byla barva šafránu (koření získaného ze stigmat květu Crocus sativus). Od termínu šafrán pochází název safranin. Důvodem je velká podobnost mezi barvou šafranu a zbarvením, které toto barvivo poskytuje.

Safranin je k dispozici jako krystaly nebo prášek, přičemž obě formy jsou rozpustné ve vodě. Barvivo safraninu je bez zápachu. Skvrny jsou červené. Struktury, které přitahují safraninové barvivo, se nazývají safranofily.

Strukturálně safranin je složitý, má na koncích dva benzenoidové kruhy a ve středu jsou umístěny dva chinoidní kruhy, kde je nalezen kation N ⁺. Středem struktury je systém zajišťující barvu. Díky této vlastnosti je toto barvivo zařazeno do kategorie II.

Použití

Safranin se používá k barvení různých struktur. Zvláště zdůrazňuje Kulchitsky buňky přítomné v gastrointestinálním traktu, také nazývané enterochromafinové buňky.

Je schopen barvit mikroorganismy patřící do čeledi Rickettsiaceae. Rovněž se používá v různých technikách, jako je Kosterova metoda, která se používá k barvení bakterií rodu Brucella.

Na druhou stranu se safranin používá v technikě barvení spór Schaeffer Fulton a v barvení Gram-Hucker. V obou technikách funguje safranin jako kontrastní barvivo.

V první, spory mají barvu malachitové zeleně a zbývající struktury jsou červené safraninem. Ve druhé fázi Gram negativní bakterie ztratí barvu fialového krystalu v kroku zabarvení, a proto je safranin ten, který barví Gram negativní bakterie červeně.

Safranin se navíc používá v bakteriologii k přípravě agarového média Brucella s ředěním safraninu 1: 5000. Toto médium slouží k odlišení druhu Brucella suis od zbytku druhu. Brucella melitensis a Brucella abortus rostou na tomto médiu, ale B. suis je inhibován.

V agroprůmyslovém oboru se safranin použil v 2,25% a zředil 1:10 pro barvení vzorků stonků z rostliny cukrové třtiny.

Tato rostlina je běžně ovlivněna bakterií Leifsonia xyli subsp. xyli, což poškozuje xylém rostliny. Vybarvené stonky se vyhodnotí, aby se stanovila funkce xylemových cév.

Techniky v oblasti bakteriologie

Castañeda skvrna pro barvení r

Krev nebo tkáňový nátěr se umístí do pufrového roztoku (fosfátový pufr pH 7,6). Nechá se spontánně zaschnout a poté přikryje methylenovou modří po dobu 3 minut a kontrastně zabarví safraninem. Rickettsiae jsou zbarveny modře, což kontrastuje s červeným pozadím.

Kosterovo skvrny upravené pro

V zapalovači je vytvořen nátěr, který se fixuje. Následně se na 1 minutu přikryje směsí 2 dílů nasyceného vodného safraninu se 3 díly 1 mol / l roztoku KOH. Promytí se provádí destilovanou vodou a kontrastně barvené 1% karbolovou methylenovou modří.

Pokud vzorek obsahuje bakterie rodu Brucella, objeví se na modrém pozadí oranžově.

Bakteriální barvení kapslí

Směs bakteriální suspenze se připraví s indickým inkoustem a přidá se safranin. Pod mikroskopem se kolem každé bakteriální tobolky s černým pozadím objeví načervenalý halo.

Zbarvení spór

S bakteriální suspenzí se vytvoří pomazánka. Pak je připevněna k teplu. Je pokryta 5% malachitovou zelení, planoucí často až do emise par. Proces se opakuje po dobu 6-10 minut. Nakonec se promývá vodou a kontrastně barví 0,5% safraninem po dobu 30 sekund. Bacily zbarví červeně a spory zelené.

Gram-Huckerova skvrna

Nátěr je vyroben s bakteriální suspenzí a fixován v žáru. Sklíčko zakryjte krystalovou fialovou na 1 minutu. Poté se na 1 minutu umístí lugol jako mordantní roztok. Následně je běleno acetonalkoholem a nakonec barveno safraninem po dobu 30 sekund.

Gram pozitivní bakterie zafarbí namodralá fialová a Gram negativní bakterie červená.

Některé laboratoře přestaly používat Gram-Huckerovu techniku ​​k přijetí modifikované Gram-Kopeloffovy techniky. V posledně jmenovaném je safranin nahrazen základním fuchsinem. Je to proto, že safranin slabě barví druhy rodů Legionella, Campylobacter a Brucella.

Techniky v oblasti histologie

Kulchitského barvení buněk (enterochromafiny)

Tkáňové řezy z gastrointestinálního traktu jsou obarveny chloridem stříbrným. Poté se odbarví thiosíranem sodným a nakonec se vybarví safraninem.

Kulchitsky buňky se vyznačují přítomností černohnědých granulí.

Osteoartritická skvrna

Protože safranin má kladný náboj, velmi dobře se váže na karboxylové a sulfátové skupiny glykosaminoglykanů. Jsou součástí proteoglykanů, které tvoří kloubní chrupavku. V tomto smyslu je při barvení safraninem O možné zjistit, zda došlo ke ztrátě chrupavky.

Ztráta chrupavkové tkáně může být měřena pomocí Mankinovy ​​stupnice nebo také nazývána stupnicí osteoartrózy.

Technika je vysvětlena níže: histologická část je ponořena do misky s Weigertovým roztokem hematoxylínu železa, pak prochází kyselým alkoholem a promyta vodou.

Pokračujte v procesu barvení ponořením listu do rychle zelené, promývá se kyselinou octovou a nyní se ponoří do safraninu O. Pro dokončení procesu se dehydratuje pomocí alkoholů v různých koncentracích ve vzestupném pořadí. Poslední krok vyžaduje, aby vzorek vyjasnil xylen nebo xylen.

Sklíčka jsou upravena balzamem z Kanady nebo podobným způsobem, který lze pozorovat pod mikroskopem.

Pomocí této techniky jsou jádra obarvena černě, kostní zelená a chrupavka, kde se proteoglykany nacházejí červeně.

Skvrna pro identifikaci makroras

Pérez et al v roce 2003 navrhl jednoduchou a levnou techniku ​​barvení makrořas. Vzorky se připravují v histologických řezech parafinu. Řezy jsou fixovány 1% glycerinem, což jim umožňuje zcela vyschnout. Poté se umístí do xylolu, aby se odstranil parafin.

Sekce se rehydratuje průchodem skrz řadu misek obsahujících ethanol v různých stupních koncentrace (sestupně) po dobu 2 minut v každém z nich.

Následně se barví po dobu 5 minut směsí 1% safraninu s 1% toluidinové modři 3: 1, obě připravené 50% ethanolem. Ke směsi se přidají tři kapky kyseliny pikrové, která působí jako mořidlo.

Potom se dehydratuje opětovným průchodem zásobníky alkoholu, ale tentokrát vzestupně. Nakonec se propláchne xylolem a vzorek se připraví s balsamem z Kanady, který bude pozorován.

Toxicita

Naštěstí je safranin barvivo, které nepředstavuje nebezpečí pro ty, kdo s ním manipulují. Je to neškodné barvivo, není karcinogenní a není hořlavé.

Přímý kontakt s kůží nebo sliznicí může v oblasti způsobit mírné zarudnutí, a to bez větších komplikací. Z tohoto důvodu se doporučuje zasažené místo umýt velkým množstvím vody.

Reference

1. García H. Colorante safranina O. Zdravotní technik, 2012; 1 (2): 83-85. K dispozici na adrese: medigraphic.com
2. Gil M. Gram skvrna: nadace, materiály, technika a použití. 2019. K dispozici na adrese: lifeder.com
3. Gil M. Spore obarvení: zdůvodnění, techniky a použití. 2019. K dispozici na adrese: lifeder.com
4. Safranina. “ Wikipedia, encyklopedie zdarma. 7. března 2017, 10:39 UTC. 3. srpna 2019, 20:49 en.wikipedia.org
5. Pérez-Cortéz S, Vera B, Sánchez C. Užitečná technika barvení v anatomické interpretaci Gracilariopsis tenuifrons a Gracilaria chilensis (Rhodophyta). Act Bot. Venez. 2003; 26 (2): 237-244. K dispozici na adrese: scielo.org.
6. Kostel Aleika, Peralta Esther Lilia, Alvarez Elba, Milián J, Matos Madyu. Vztah funkčnosti xylemových cév a přítomnost Leifsonia xyli subsp. xyli. Rev. Veg Protection. 2007; 22 (1): 65-65. K dispozici na adrese: scielo.sld