BAIRD PARKEROVÝ AGAR: ZALOŽENÍ, PŘÍPRAVA A POUŽITÍ - BIOLOGIE - 2025

Agar Baird Parker je pevná střední selektivní a diferenční kultury. Byl vytvořen v roce 1962 pro detekci a počítání koagulázově pozitivních stafylokoků (Staphylococcus aureus).

Je tvořen pankreatickým hydrolyzátem kaseinu, masového extraktu, kvasnicového extraktu, chloridu lithného, ​​glycinu, pyruvátu sodného, ​​teluritu draselného, ​​agaru a žloutkové emulze.

Typické kolonie Staphylococcus aureus na agaru Baird Parker. Zdroj: Daizy John

Baird Parker Agar je založen na schopnosti S. aureus redukovat telurit a produkovat lecitinázu. Obě vlastnosti vytvářejí kolonii se specifickými vlastnostmi tohoto druhu. Proto je vysoce účinný při detekci tohoto mikroorganismu.

Typické kolonie S. aureus jsou černé nebo tmavě šedé, s bezbarvým okrajem a světelným halom, který je obklopuje, což je odlišuje od ostatních mikroorganismů. Tento patogen lze nalézt v klinických vzorcích, vodách, kosmetice a v syrových nebo vařených potravinách.

Jeho diagnóza nebo detekce je nanejvýš důležitá, mimo jiné díky různým patologickým stavům, jako jsou otrava jídlem, syndrom opařené kůže, syndrom toxického šoku, abscesy, meningitida, septikémie, endokarditida.

Základ

Výživná síla

Pankreatický hydrolyzát kaseinu, masového extraktu a kvasnicového extraktu jsou zdroji živin, vitamínů a minerálů nezbytných pro celkový mikrobiální vývoj, zatímco pyruvát a glycin jsou sloučeniny, které upřednostňují specifický růst Staphylococcus aureus.

Selektivní

Baird Parker Agar je selektivní, protože obsahuje látky, které inhibují růst doprovodné flóry a současně podporují vývoj S. aureus. Inhibičními sloučeninami jsou chlorid lithný a telurit draselný.

Rozdíl

Toto médium umožňuje odlišit S. aureus od zbytku koagulázově negativních stafylokoků. S. aureus má schopnost redukovat tellurit na volné kovové černé tellurium a vytvářet černé nebo tmavě šedé kolonie.

Podobně vaječný žloutek poskytuje substráty k prokázání přítomnosti enzymu lecitinázy a lipázy. S. aureus je pozitivní na lecitinázu, a proto kolem kolonie bude pozorován jasný halo, což naznačuje, že lecitin byl hydrolyzován.

V tomto smyslu vzhled lesklých černých nebo tmavě šedých kolonií se světelnou halou kolem nich naznačuje přítomnost S. aureus.

Pokud se vytvoří precipitační zóna, ukazuje to na lipázovou aktivitu. Některé kmeny S. aureus jsou pozitivní na lipázu a jiné negativní.

V případě, že S. aureus je pozitivní na lipázu, bude kolem černé nebo tmavě šedé kolonie pozorována neprůhledná oblast, následovaná světlem halo díky působení lecitinázy.

U kolonií jiných bakterií než S. aureus schopných růst na tomto médiu se vytvoří bezbarvé nebo hnědé kolonie bez okolního halo.

Atypické černé kolonie lze také vidět s bezbarvým okrajem nebo bez něj, ale bez světelného halou. Tyto kolonie by neměly být brány v úvahu, neodpovídají S. aureus.

Příprava

Emulze vaječného žloutku

Vezměte čerstvé slepičí vejce, dobře ho umyjte a vložte jej na 2 až 3 hodiny do 70% alkoholu. Vejce se potom asepticky otevře a bílá se pečlivě oddělí od žloutku. Poté se odebere 50 ml žloutku a smísí se s 50 ml sterilního fyziologického roztoku.

Tellurit draselný 1% m / v

Některé komerční domy prodávají 1% telurit draselný připravený k použití. Přidá se do média před ztuhnutím média.

K přípravě tohoto roztoku v laboratoři se zváží 1,0 g teluritanu draselného a rozpustí se v jedné části vody. Následně se doplní množství vody až do dosažení 100 ml. Roztok musí být sterilizován filtrační metodou.

Příprava kultivačního média

Naváží se 60 g dehydratovaného média a rozpustí se v 940 ml destilované vody. Nechte směs sedět přibližně 5-10 minut.

Pro zlepšení procesu rozpouštění aplikujte teplo častým mícháním média. Přiveďte k varu na minutu. Sterilizujte v autoklávu při 121 ° C po dobu 15 minut.

Nechte stát, dokud nedosáhne teploty 45 ° C, přidejte 50 ml emulze vaječného žloutku a 10 ml 1% teluritu. Dobře promíchejte a nalijte 15-20 ml na sterilní Petriho misky.

Nechte ztuhnout, převraťte jej na desky a skladujte v chladničce až do použití.

Konečné pH připraveného média musí být 6,8 ± 0,2.

Před naočkováním vzorku počkejte, až destička dosáhne pokojové teploty. Desky se naočkují proužky nebo povrchovým výsevem špachtlí Drigalski.

Barva dehydratovaného média je světle hnědá a barva připraveného média je světle žlutá.

Použití

Klinické vzorky

Klinické vzorky se vysévají přímo, vypouštějí část materiálu na jednom konci destičky a odtud se vyčerpávají. Inkubujte 24 až 48 hodin při 35–37 ° C.

Vzorky potravin

Naváží se 10 g potravinového vzorku a homogenizuje se v 90 ml 0,1% peptonové vody, odtud se podle potřeby připraví ředění. Desky se naočkují trojnásobně 0,3 ml připravených roztoků a naočkují se na povrch špachtlí Drigalski. Inkubujte 24 až 48 hodin při 35–37 ° C.

Tato metodika umožňuje spočítat typické získané kolonie a je ideální, pokud existuje podezření na přítomnost S. aureus nad 10 CFU na g / ml vzorku.

Pokud je podezření na malé množství S. aureus nebo existuje-li spousta doprovodné flóry, doporučuje se obohatit vzorek v sójovém bujónu s tryptikázou o 10% NaCl a 1% pyruvát sodný. To podpoří růst S. aureus a bude bránit rozvoji doprovodné flóry. Zakalené zkumavky se naočkují na agar Baird Parker.

Vzorky vody

Ve sterilizovaném vakuovém filtračním systému se filtruje 100 ml studované vody a následně se 0,4 mikronová mikroporézní membrána odstraní sterilními kleštěmi a umístí se na Baird Parkerovu destičku. Inkubujte 24 až 48 hodin při 35–37 ° C. Tato technika umožňuje počítat typické kolonie S. aureus.

QA

K hodnocení kvality agaru Baird Parker lze použít známé kmeny, jako je Staphylococcus aureus ATCC 25923, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Staphylococcus epidermidis ATCC 12228, Escherichia coli ATCC 25922 nebo Proteus mirabilis ATCC 43071.

V případě kmenů ATCC S. aureus je známo, že redukuje telurit a jsou pozitivní na lipázu a lecitinázu. Proto musí existovat uspokojivý vývoj a růst konvexních kolonií s černým středem a bezbarvým okrajem, s neprůhledným halo a lehkým vnějším halo.

Očekává se, že se S. epidermidis na tomto médiu bude vyvíjet špatně, s hnědo-šedými až černými koloniemi, bez světlého halou.

U E. coli a P. mirabilis se očekává, že bude zcela nebo částečně inhibována. V případě růstu se vytvoří hnědé kolonie bez neprůhledné oblasti nebo lehkého halou.

doporučení

-Médium by nemělo být zahříváno po přidání telluritu a vaječného žloutku.

- Příprava emulze vaječného žloutku a její přidání do středu je velmi zranitelný krok pro kontaminaci. Musí být věnována mimořádná pozornost.

- Pokud jsou přítomny typické kolonie S. aureus, mělo by se to potvrdit připojením koagulačního testu na uvedený kmen.

- Pokud existují pochybné výsledky s koagulázou, měly by být provedeny další potvrzující testy.

- Dávejte pozor, abyste nezaměňovali přítomnost typických kolonií S. aureus s atypickými černými koloniemi.

Reference

1. Přispěvatelé Wikipedie. Baird-Parkerův agar. Wikipedia, encyklopedie zdarma. 15. března 2017, 19:36 UTC. K dispozici na: wikipedia.org/ Přístup k 18. únoru 2019.
2. Laboratoře BD. Baird Parker Agar. 2006. K dispozici na adrese: bd.com
3. Britannia Laboratories. Základna agaru Baird Parker. 2015.K dispozici na: britanialab.com
4. Francisco Soria Melguizo Laboratories. 2009. Baird Parker Agar. K dispozici na adrese:
5. Britannia Laboratories. Tellurit draselný. 2015.K dispozici na: britanialab.com
6. Alarcón-Lavín M, Oyarzo C, Escudero C, Cerda-Leal F, Valenzuela F. Přeprava enterotoxigenních Staphylococcus aureus typu A, v nosohltanových nátěrech v manipulátorech s potravinami. Rev Med Chile 2017; 145: 1559-1564
7. Venezuelský standardní Covenin 1292-89. (1989). Potraviny. Izolace a stanovení počtu Staphylococcus aureus. K dispozici na adrese: sencamer.gob.ve