OBOHACENÉ KULTIVAČNÍ MÉDIUM: VLASTNOSTI, TYPY, POUŽITÍ - BIOLOGIE - 2025

Obohacená kultivační médium se skládá z kombinace živného agaru jako základ plus obohacené látky nebo sloučeniny. Obohatenými médii par excellence jsou krevní agar a čokoládový agar.

Obě média mohou být připravena s jednoduchým základem jakéhokoli živného agaru, jako je například živný agar, trypticaseinový sójový agar nebo infuzní agar mozkového srdce. Obě média jsou rovněž doplněna vysoce obohaceným prvkem, kterým je krev, s tím rozdílem, že v prvním případě se používá defibrinovaná a ve druhém případě se zahřívá.

Dvě destičky s krevním agarem (obohacené kultivační médium) vykazující beta-hemolýzu. Zdroj: Pixabay.com

Tato média neobsahují inhibitory, takže na nich může růst celá řada mikroorganismů, včetně některých nutričně náročných kmenů. V těch případech, které jsou již extrémně náročné, vyžadují kromě krve také další speciální výživové doplňkové látky, které musí být přidány do média, ve kterém se má izolovat.

Na druhé straně, pokud se do obohaceného média přidají antibiotika nebo jiné inhibiční látky, okamžitě se stane selektivním obohaceným médiem. Posledně jmenované jsou nezbytné při pokusu izolovat vysoce náročné mikroorganismy z oblasti bohaté na mikrobiotu, jako je Haemophilus sp a Neisseria meningitidis izolovaná ze vzorku nasofaryngeálního exsudátu.

vlastnosti

Tato média mají mimo jiné nutriční základ tvořený peptony, kvasnicovými extrakty, pankreatickým trávením a někdy glukózou. Obsahuje také látky, které vyrovnávají pH, vodu a agar-agar.

Na druhé straně může být přidána defibrinovaná nebo zahřátá krev a následně mohou být zahrnuty specifické růstové faktory, jako jsou: vitamínové komplexy, biotin, kyselina para-aminobenzoová, hemin, NAD.

Rozdíly mezi kultivačními médii a obohacujícími médii

Důležité je, že obohacená kultivační média by neměla být zaměňována s obohacujícími médii. Ačkoli obě obsahují živiny a zvláštní nutriční požadavky, obohacující médium je kapalné a používá se jako předběžné ošetření vzorků, u nichž existuje podezření na přítomnost určitého typu patogenních bakterií, které se v menší míře vyskytují v polymikrobiální směsi.

Obohacovací médium bude inhibovat mikroorganismy, které nepatří do této skupiny, a bude podporovat růst patogenu.

Kromě toho mají schopnost opravit poškození přítomné na buněčné struktuře mikroorganismu, který má být regenerován, protože to může být normálně ovlivněno předchozím ošetřením a v tomto smyslu médium působí na zvýšení své životaschopnosti.

Obohacené typy a použití agaru

Nejrozšířenějším obohaceným agarem je krevní agar, který však lze připravit s různými výživovými základy a podle toho se mění jeho užitečnost.

Na druhé straně je zde také čokoládový agar, což je obohacené médium par excellence. Stejně jako krevní agar však může být připraven s různými nutričními základy, navíc k dalším přísadám pro izolaci náročných mikroorganismů.

Níže je uveden přehled nejpoužívanějších agarových základů pro přípravu krevního a čokoládového agaru, jakož i jejich užitečnost v každém případě.

- Krevní agar

Kultura na krevním agaru fakultativní anaerobní bakterie Morganella morganii. Převzato a upraveno z: Bacteria in Photos.

Připraveno s:

Dno živného agaru

Používá se mimo jiné pro nenáročné bakterie, jako jsou: Enterobacteriaceae, Pseudomonas sp, S. aureus, Bacillus sp. Není vhodný pro náročné bakterie, jako je Streptococcus.

Základ agaru pro infuzi mozkového srdce

Krevní agar s touto základnou je vynikající pro většinu bakterií, včetně Streptococcus sp, ale nedoporučuje se pro pozorování hemolýzy. Tato kombinace s určitými přísadami je užitečná pro určité mikroorganismy. Příklady:

Pokud se do tohoto média přidají cystin a glukóza, používá se k izolaci Francisella tularensis. Vzhledem k tomu, že je-li přidán cystinový tellurit, je užitečné izolovat Corynebacterium diphteriae.

Podobně se toto médium používá k izolaci bakterií rodu Haemophilus, ale v tomto případě je nutné přidat bacitracin, kukuřičný škrob, koňskou krev a další doplňky obohacení, jako je (IsoVitaleX).

A konečně, pokud je obsažen v přípravě (chloramfenikol - gentamicin) nebo (penicilin - streptomycin) s koňskou krví, je ideální pro izolaci Histoplasma capsulatum.

Trypticasein Soy Agar Base

Je vynikající pro podporu růstu celé řady mikroorganismů, včetně Streptococcus sp, což je nejvíce doporučované pro pozorování hemolytických vzorců.

Pokud je doplněn cystin telluritem a jehněčí krví, je ideální pro Corynebacterium diphteriae.

Müeller Hinton Agar Base

Ideální pro antibiogramy komplikovaných mikroorganismů, jako je Streptococcus sp, jakož i pro izolaci Legionella pneumophila.

Thayer Martin Agar Base

Je ideální pro izolaci druhů Neisseria meningitidis.

Columbia agarová základna

Je speciální pro izolaci Helicobacter pylori a Gardnerella vaginalis. Pro větší úspěch se přidávají různé typy antibiotik, které inhibují doprovodnou mikrobiotu.

Brucella agarová základna

Kombinace jehněčí krve, vitamínu K a agaru Brucella je vynikající pro pěstování anaerobních bakterií.

Agarová základna Campylobacter

Jak již název napovídá, tato báze se používá k izolaci Campylobacter jejuni ve vzorcích stolice. K tomu se doplňuje 5% ovčí krve a cefalothinu, amfotericinu B, trimethoprimu, polymyxinu B a vankomycinu.

- Čokoládový agar

Čokoládový agar

Připraveno s:

Columbia agarová základna

Příprava čokoládového agaru s tímto základem se široce používá k izolaci bakterií rodu Neisseria.

Doporučuje se také pro izolaci Brucella sp, ale k tomu je třeba přidat vitamin K a použít koňskou krev.

GC základní agarová báze

Je jedním z doporučovaných základů pro výrobu čokoládového agaru, zejména pro izolaci gonokoků.

Müeller Hinton Agar Base

Některé náročné mikroorganismy, jako je Streptococcus pneumoniae, vyžadují, aby bylo toto médium schopno provést test antimikrobiální susceptibility.

To je také užitečné v izolaci Neisserias a Haemophilus, s výjimkou toho, že rod Haemophilus preferuje koňskou krev, protože je bohatý na faktor X (hemin) a V (NAD).

Někdy je vhodné zahrnout do přípravy antibiotika, aby se inhibovala doprovodná mikrobiota.

Základna s agarem Thayer Martin

K přípravě čokoládového agaru s tímto základem se doporučuje použít jehněčí krev. Toto médium je zvláštní pro izolaci Neisseria gonorrhoeae. Antibiotika se přidávají k inhibici doprovodné mikrobioty.

Čokoládový agar (obohacené kultivační médium): Zdroj: Pixinio.com

Reference

1. Prescott M, Harley P, Klein A. Mikrobiologie, 4. Editorial McGraw-Hill Interamericana, 2003, Madrid, Španělsko, str. 105-108.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey a Scott Mikrobiologická diagnostika. 12 ed. Argentina. Editorial Panamericana SA
3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologická diagnostika. (5. vydání). Argentina, Editorial Panamericana SA
4. Jawetz E., Melnick J., Adelberg E. (1992). Lékařská mikrobiologie. (14 ^ta Edition) Mexiko, Editorial El Manual Moderno.
5. González M, González N. 2011. Manuál lékařské mikrobiologie. 2. vydání, Venezuela: Ředitelství médií a publikací z University of Carabobo.