MEDIO MIO: ZALOŽENÍ, PŘÍPRAVA A POUŽITÍ - BIOLOGIE - 2025

MIO médium je biochemické testy použity pro pomoc při identifikaci druhů bakterií, které patří do čeledi Enterobacteriaceae. Je docela výživný a je tvořen glukózou, kvasnicovým extraktem, peptonem, tripteinem, L-ornitin hydrochloridem, bromokresolovým purpurem a agarem.

Význam jeho zkratky (MIO) popisuje každý z parametrů, které lze pozorovat na tomto médiu; pohyblivost, indol a ornitin. Motilita je schopnost mikroorganismu pohybovat se v důsledku přítomnosti bičíků. Aby byla tato vlastnost dodržena, musí být konzistence média polotuhá, takže přípravek obsahuje méně agaru.

Nástin interpretace výsledků v médiu MIO. Zdroj: Připravil autor MSc. Marielsa gil

Produkce indolu ukazuje přítomnost enzymu tryptofanázy, která působí na aminokyselinu tryptofan, což vyžaduje použití odhalovacího činidla, aby byla produkce indolu viditelná.

Nakonec ornithin stanoví, zda je bakterie schopna dekarboxylovat aminokyselinu, to znamená, zda obsahuje enzym orinithin dekarboxylázu.

Základ

Pepton, kvasnicový extrakt a triptein

Tyto prvky přispívají k výživové síle tohoto média. Slouží jako zdroj živin a esenciálních aminokyselin pro bakteriální vývoj.

Triptein je navíc zdrojem tryptofanu, který prokazuje přítomnost enzymu tryptofanázy, která degraduje tryptofan redukční deaminací, uvolňováním indolu, kyseliny pyruvové, amoniaku a energie.

Indol je bezbarvý, proto je jeho přítomnost odhalena přidáním pěti kapek Ehrlichova nebo Kovacsova činidla, obě s p-dimethylaminobenzaldehydem.

Aldehydová skupina této sloučeniny reaguje s indolem a vytváří na povrchu agaru kruhový fuchsiový červený produkt.

Každá stopa barvy by měla být považována za pozitivní test. Důkaz by se měl přečíst okamžitě, protože v průběhu času se barva zhoršuje.

Tento test by měl být navíc odhalen poté, co byly zaznamenány výsledky motility a dekarboxylace ornitinu.

Výklad

Pozitivní test: tvorba červeného prstence fuchsie při přidávání kapek Kovacsova činidla.

Negativní test: bez tvorby prstence.

Pohyblivost

Schopnost bakterií pohybovat se bude zřejmá, pokud je pozorováno zakalené médium nebo pokud kolem počáteční inokulace expanduje silná růstová linie.

Negativní test motility bude prokázán pozorováním tenké linie růstu a vše kolem něj bude bez růstu.

Je důležité, aby motilita byla čtena před odhalením indolu, protože přidání činidla zakalí celé médium.

U mobilních, ale pomalu rostoucích bakterií je obtížné prokázat jejich pohyblivost s tímto médiem. V tomto případě se doporučuje použít jiné testy nebo metody, například střední motilitu nebo metodu čekající na pokles.

Glukóza

Glukóza je fermentovatelný uhlohydrát, který kromě poskytování energie okysluje životní prostředí, což je nezbytná podmínka pro dekarboxylaci aminokyseliny ornithinu.

Kvašení glukózy musí vždy probíhat, počínaje zásadou, že všechny bakterie patřící do rodiny Enterobacteriaceae fermentují glukózu.

L-Ornithine

V případě, že bakterie produkují enzym ornithin dekarboxylázu, může to působit, jakmile je médium okyseleno fermentací glukózy.

Enzym ornithin dekarboxyláza působí na karboxylovou skupinu aminokyseliny za vzniku aminu zvaného putresin, který médium znovu alkalizuje.

Tento test by se měl přečíst po 24 hodinách inkubace, protože pokud se pokusíte číst dříve, než můžete test nesprávně interpretovat s nesprávným negativem.

Je třeba si uvědomit, že první reakcí, která nastává, je fermentace glukózy, takže médium v ​​počáteční fázi (prvních 10 až 12 hodin) zžloutne. Pokud následně dojde k dekarboxylaci ornithinu, médium se změní na fialové.

Je důležité interpretovat test dekarboxylace ornithinu před odhalením indolu, protože přidání Kovacsova činidla mění barvu média.

Výklad

Negativní test: médium se žlutou barvou nebo se žlutým pozadím.

Pozitivní test: střední zcela fialová.

Indikátor PH

V tomto případě se používá bromokresolová purpurová; ten, kdo má na starosti odhalení, když dojde ke změně pH v médiu. Po okyselení se indikátor změní na žlutý a po alkalizaci se změní na fialový.

Technika setí a vývoje

K zasetí média MIO se použije přímá smyčka nebo jehla a s ní se odebere část studované kolonie.

Uprostřed MIO se provede přímá propíchnutí. Nedoporučuje se provádět dvojitou punkci, protože může vést k falešnému obrazu pohyblivosti, pokud nejsou vpichy prováděny na stejném místě.

Inkubujte 24 až 48 hodin při 37 ° C v aerobióze. Podívejte se na výsledky v tomto pořadí: pohyblivost, dekarboxylace ornitinu a nakonec odhalte indol.

Je vhodné asepticky odstranit 2 ml média, přenést jej do sterilní zkumavky a provést tam indolový test, takže pokud je negativní, zbytek původní zkumavky může být inkubován dalších 24 hodin, aby se indol znovu odhalil.

Vývoj indolu se provádí následujícím způsobem: K MIO médiu se přidá 3 až 5 kapek Kovacsova činidla a intenzivně se míchá. Je pozorováno, zda se objeví prsten červené fuchsie.

Příprava

MIO střední

Naváží se 31 g média MIO a rozpustí se v jednom litru destilované vody.

Směs se zahřívá, dokud směs nevře jednu minutu, často se protřepává, dokud se agar úplně nerozpustí. Rozdělte 4 ml média do 13/100 zkumavek s vatovými uzávěry.

Sterilizujte v autoklávu při 121 ° C po dobu 15 minut. Vyjměte z autoklávu a nechte stát přímo v stojanu tak, aby se vytvořil polotuhý blok.

Uchovávejte v chladničce při 2-8 ° C. Před zasetím bakteriálního kmene jej nechte zahřát.

Barva dehydratovaného média je béžová a barva připraveného média mírně opalizující fialová.

Konečné pH připraveného média je 6,5 ± 0,2

Při kyselém pH médium zžloutne a při alkalickém pH fialové.

Kovacs Reagent (Indole Test Developer)

Toto činidlo je připraveno následujícím způsobem:

Změří se 150 ml amylového, isoamylového nebo butylalkoholu (kterékoli ze tří). V něm se rozpustí 10 g p-dimethylaminobenzaldehydu. Potom se pomalu přidá 50 ml koncentrované kyseliny chlorovodíkové.

Připravené činidlo je bezbarvé nebo světle žluté. Měl by být uchováván v jantarové lahvi a uchováván v lednici. Tmavě hnědé zbarvení ukazuje jeho zhoršení.

Ehrlichovo činidlo může také nahradit Kovacsovo činidlo. Ten, který je citlivější, je výhodnější odhalit indol v bakteriích, které jej produkují v nepatrných množstvích, například v některých nefermentujících gramnegativních tyčinkách a některých anaerobech.

Použití

Toto médium je test, který doplňuje soubor biochemických testů pro identifikaci bakterií patřících do rodiny Enterobacteriaceae.

Údaje o dekarboxylaci ornithinu slouží k rozlišení Shigella sonnei, který je pozitivní, od Shigella boydii, Shigella flexneri a S. dysenterieae, které jsou negativní.

Rovněž odlišuje rod Klebsiella, který je negativní, od rodu Enterobacter, kde většina jeho druhů testuje pozitivní.

Zdroj: Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologická diagnostika. 5. ed. Editorial Panamericana SA Argentina.

QA

Pokaždé, když je připravena šarže média MIO, může být proveden kontrolní test. K tomu se používají známé nebo certifikované kmeny k pozorování chování média.

Kmenem, který lze použít, jsou Escherichia coli, Morganella morganii, Klebsiella pneumoniae, Enterobacter aerogenes a Proteus mirabilis.

Očekávané výsledky jsou E. coli a M. morganii. Dan M: +, I: + a O: +.

Klebsiella pneumoniae je negativní (M: -, I: -, O:-). Proteus mirabilis a Enterobacter aerogenes dávají M: + I: - a O: +.

Reference

1. Mac Faddin J. (2003). Biochemické testy pro identifikaci bakterií klinického významu. 3. ed. Editorial Panamericana. Buenos Aires. Argentina.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey a Scott Mikrobiologická diagnostika. 12 ed. Editorial Panamericana SA Argentina.
3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologická diagnostika. 5. ed. Editorial Panamericana SA Argentina.
4. Britannia Laboratories. MIO Medio 2015. Dostupné na: britanialab.com
5. Laboratoře BD. BBL Motility Indole Ornithine (MIO) Medium. 2007. K dispozici na adrese: bd.com
6. Valtek Laboratories. Střední MIO Motility, Indole, Ornithine. 2010. K dispozici na adrese: andinamedica.com